一种适用于粪便样本常温保存的保护液制造技术

本发明专利技术公开了一种适用于粪便样本常温保存的保护液，包括乙醇50

【技术实现步骤摘要】
一种适用于粪便样本常温保存的保护液


[0001]本专利技术涉及微生物分子检测
，具体为一种适用于粪便样本常温保存的保护液。

技术介绍

[0002]肠道中与人体共生或寄生的微生物如细菌、原生动物、病毒等被科学界称为人类的“第二基因组”。“第二基因组”有着庞大数量与类群基础的细菌，其种与种之间的分布平衡对人体健康尤为重要。近年来有关肠道菌群的研究成果大量涌现于各类顶尖期刊，一些常见的疾病包括糖尿病、哮喘、慢性腹泻、肠易激综合症(IBS)、炎症性肠道病(IBD)、肥胖症、免疫力低下等均被发现与细菌分布平衡的紊乱失调有着密切关联。随着细菌种群临床研究调查的不断深入，这些与人体健康密切相关菌群的功能也将越来越多被认知与开发应用。而如何准确、快速地获得样本细菌的组成信息对肠道疾病研究具有重要意义。
[0003]由于肠道微生物寄居人体肠道内，因此最便捷也是目前采用的最广泛的方式就是研究人体排出的粪便微生物，以此代表大肠内的共生微生物并应用于实际分析。便样采集、提取细菌总DNA、QPCR、16S rRNA、宏基因组测序以及一系列生物信息学可分析粪便中细菌构成，进一步研究肠道菌群与人体健康疾病之间的关系。但在便样离开人体后，其所处环境发生了极大变化，恒温恒湿的无氧环境转变为非恒温恒湿的有氧环境，提供微生物代谢的营养与能量来源同样再无法得到补充，部分细菌因环境剧烈变化死亡、部分细菌则保持活性不断代谢和生长，这些都会对后续的菌群数据分析产生极大影响。因此，对采集到的人体新鲜便样施加保存措施，尽可能使其微生物群落构成稳定于离体时状态，确保后续肠道菌群数据分析结果的准确性。
[0004]在肠道微生物样本离体后，因采样地点与实验条件限制，实验人员短时间内无法完成样本核酸提取工作，随着时间推移，样本菌群的数量、种类及丰度会不断发生变化，这对后续核酸提取与数据分析工作是不利的。而粪便样本是提取肠道微生物核酸的主要来源，如何在收集便样后保证其含有的肠道菌群的持久稳定，是提高肠道菌群数据分析结果准确性的关键。
[0005]当前医院与检测机构最常采用为冷藏法，即采集后的人体便样存放于
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20℃或更低温度容器，该保存方式尽管行之有效，但对运输条件与能否及时冷藏均有较高要求，且某些场景如外出采样、样本提供者居家采样的情形下难以实现，仅能应用于小规模实验采样，难以规模化的商业应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种适用于粪便样本常温保存的保护液，采样人员可直接将采集的新鲜便样装入粪便保护液中，室温条件下即可实现稳定保存便样微生物作用。经实际应用验证，使用本专利技术的保护液保存粪便样本可在常温下获得接近冻存粪便样本的保存效果，极大的便利于长途运输过程中保持样本菌群丰富度与遗传物质稳定性。
[0007]一种适用于粪便样本常温保存的保护液，包括乙醇50
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60％(v/v)、柠檬酸盐1％～1.5％(w/v)、Tris
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HCl 10
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20mM、EDTA
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Na
2 2％～3％(w/v)、氯化钠3％(w/v)、三氯叔丁醇0.8％～1.2％(w/v)。
[0008]优选的，保护液以水溶性有机物作为主要成分，该水溶性有机物可以为水溶性醇、酮类、醛类中的一种或几种。
[0009]优选的，保护液选用溶剂应为缓冲溶液，缓冲溶液为Tris
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HCl缓冲溶液。
[0010]优选的，保护液的配置方法如下：
[0011]称取各组分，加入去离子水补足余量充分溶解，经0.22um滤膜过滤除菌，装入经灭菌处理的洁净保存管中，即为可常温保存便样保护液。
[0012]优选的，保护液的使用方法如下：
[0013]使用取样勺挖取新鲜粪便中段黄豆粒体积便样后，迅速放入配置后的保护液中，拧紧管盖快速混匀样品，所述粪便样本和常温保护液用量比(v/v)应＞1：3，且＜1：2。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术相对现有产品，可在室温条件下较长时间稳定样本微生物构成、保存样本中DNA，有效改善现有采样方法极度依赖低温保存、运输的现状，极大便利于行动不便的供样人员居家采样与确保便样检测结果的准确性。本专利技术制备方法简捷，配置成本低廉，有助于工业化大规模生产应用，对相关健康管理检测企业产品推广同样有所助益。经实际使用验证，便样样本经保护液常温保存15天后，样本中菌群种类、丰度与新鲜样本相比差异小，应用于16s rRNA、生物芯片等检测中，经15天保存后的样本与新鲜样本检测数据一致性满足结果精度要求。
附图说明
[0015]图1为不同保存方式志愿者A门水平菌群丰度结果图；
[0016]图2为不同保存方式志愿者B门水平菌群丰度结果图；
[0017]图3为不同保存方式志愿者C门水平菌群丰度结果图；
[0018]图4为不同保存方式志愿者A属水平菌落构成结果图；
[0019]图5为不同保存方式志愿者B属水平菌落构成结果图；
[0020]图6为不同保存方式志愿者C属水平菌落构成结果图。
具体实施方式
[0021]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0022]实施例1
[0023]乙醇50％(v/v)
[0024]柠檬酸盐1％(w/v)
[0025]Tris
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HCl缓冲溶液12mM
[0026]EDTA
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Na2 2％(w/v)
[0027]氯化钠3％(w/v)
[0028]三氯叔丁醇0.8％(w/v)，
[0029]去离子水预先溶解配方中难溶于醇的组分，按照配方加入乙醇，去离子水定容至预定体积，pH调至7.5，0.22um滤膜过滤除菌得到保护液。
[0030]实施例2
[0031]乙醇55％(v/v)
[0032]柠檬酸盐1.2％(w/v)
[0033]Tris
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HCl缓冲溶液15mM
[0034]EDTA
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Na2 2.5％(w/v)
[0035]氯化钠3％(w/v)
[0036]三氯叔丁醇1％(w/v)，
[0037]去离子水预先溶解配方中难溶于醇的组分，按照配方加入乙醇，去离子水定容至预定体积，pH调至7.5，0.22um滤膜过滤除菌得到保护液。
[0038]实施例3
[0039]乙醇60％(v/v)
[0040]柠檬酸盐1.5％(w/v)
[0041]Tris
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HCl缓冲溶液20mM
[0042]EDTA
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Na2 3％(w/v)
[0043]氯化钠3％(w/v)
[0044]三氯叔丁醇1.2％(w/v本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于粪便样本常温保存的保护液，其特征在于：包括乙醇50
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60％(v/v)、柠檬酸盐1％～1.5％(w/v)、Tris
‑
HCl 10
‑
20mM、EDTA
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Na
2 2％～3％(w/v)、氯化钠3％(w/v)、三氯叔丁醇0.8％～1.2％(w/v)。2.根据权利要求1所述的一种适用于粪便样本常温保存的保护液，其特征在于：保护液以水溶性有机物作为主要成分，该水溶性有机物可以为水溶性醇、酮类、醛类中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的一种适用于粪便样本常温保存的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘译远，劉瑞宸，拉斯洛，
申请(专利权)人：南京百奥菌生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：