一种菰米遗传转化体系建立的方法技术

本发明专利技术属于植物基因工程领域。受限于菰米胚性愈伤的培养以及再生效率的低下，菰米的遗传转化体系迟迟未能建立。本发明专利技术一方面通过优化菰米胚性愈伤的培养条件和培养方式以及优化愈伤再生的培养基，极大程度地提高菰米愈伤的再生效率，为农杆菌侵染提供优质的胚性愈伤受体材料，为转化奠定坚实的基础；另一方面通过实验探究优化转化过程中的处理方式和培养条件，得到转化阳性株系，顺利建立稳定的农杆菌介导的菰米遗传转化体系。菌介导的菰米遗传转化体系。

【技术实现步骤摘要】
一种菰米遗传转化体系建立的方法


[0001]本专利技术属于植物基因工程领域，具体涉及一种菰米遗传转化体系建立的方法。

技术介绍

[0002]中国菰(Zizania latifolia)起源于中国，分布于日本、韩国、印度和东南亚中南半岛国家。除西藏外，中国各地尤其是长江流域的河流、湖泊、沟渠、池塘、稻田周围中都有中国菰的分布。菰米(wild rice)是中国菰的颖果，它在我国作为粮食食用已经有3 000多年的历史，在古代是供帝王食用的重要的“六谷”(稻、黍、稷、粱、麦、菰)之一。唐代之后，随着人口数量的大幅度增长、围湖造田等各种农事活动增多，以及水稻种植技术的推广，再加上菰米采收和脱壳较为困难，菰米渐渐淡出人们的视线。随后，菰米逐渐作为中药材使用，明代李时珍《本草纲目》等著作有将菰米用于治疗消渴症(糖尿病)和胃肠疾病的记载。菰米由于较高的营养价值以及独特的风味，开始广泛出现在餐桌、商店里，受到越来越多人的欢迎。
[0003]目前，中国菰的生物活性和保健作用已被中国和韩国等东亚科学家广泛关注。菰米已经证实的生物活性和保健价值包括抗氧化活性、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菰米遗传转化体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1)诱导培养：将成熟菰米种子在诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，在愈伤诱导培养基上继代培养，挑选状态良好的愈伤组织转至愈伤诱导培养基上预培养；2)农杆菌菌液的制备：将农杆菌接种于农杆菌活化培养基上活化，用重悬液重悬稀释农杆菌获得OD660值0.2
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0.4的农杆菌菌液；3)农杆菌菌液的侵染：将步骤1)中经过预培养的愈伤组织浸泡于步骤2)获得的农杆菌菌液中进行侵染15
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25min；4)愈伤组织的恢复培养和筛选：将步骤3)中侵染后的愈伤颗粒进行共培养，共培养的条件：一次性培养皿垫上三张无菌滤纸后加入终浓度为15
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25mg/L的乙酰丁香酮的液体培养基，用无菌滤纸吸干愈伤组织表面的农杆菌菌液后均匀分散在共培养介质上，20
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28℃黑暗培养2
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4d；共培养结束后，将经共培养的愈伤组织均匀且稀疏地散布于恢复培养基中，25
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35℃光照培养3
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6d，光照周期为16h光照/8h黑暗；恢复培养结束后，将愈伤组织转至筛选培养基上，培养条件为：25
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35℃光照培养，光照周期为16h光照/8h黑暗；5)愈伤组织再生：将4)所得愈伤颗粒在培养基上筛选3
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4周之后，转至再生培养基上，25
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35℃光照培养，光照周期为16h光照/8h黑暗；苗生长至长度2
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5cm，移至生根培养基上，25
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35℃光照培养，光照周期为16h光照/8h黑暗。2.根据权利要求1所述的一种菰米遗传转化体系建立的方法，其特征在于：所述步骤1)愈伤组织诱导培养的条件为：光培养，光强4000Lux，光周期16h光照/8h黑暗，温度25
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35℃，培养3周后，得胚性愈伤组织。3.根据权利要求1所述的一种菰米遗传转化体系建立的方法，其特征在于：所述侵染时农杆菌菌液得OD660值为0.3，愈伤颗粒侵染时间为20min。4.根据权利要求3所述的一种菰米遗传转化体系建立的方法，其特征在于：共培养的培养基乙酰丁香酮终浓度为20mg/L，23℃黑暗培养3d。5.根据权利要求3所述的一种菰米遗传转化体系建立的方法，其特征在于：恢复培养、筛选培养、再生培养及生根培养的条件为：30℃光照培养，光照周期为16h光照/8h黑暗。6.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫宁，吴丹丹，李亚丽，张晶，于秀婷，纪春，杨婷，郑凯丽，张宇，许敏敏，杜咏梅，刘新民，张忠锋，
申请(专利权)人：合肥戬谷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：