筛选转基因植物的组合物和方法技术

本发明专利技术公开了筛选转基因植物的组合物和方法。本发明专利技术利用植物花青素生物合成途径中的酶类基因DFR、LDOX、UFGT构建了筛选植物转基因的载体以及含有该载体的宿主细胞，并将所述载体及宿主细胞用于筛选转基因植物，巧妙地利用花青素的显色，在愈伤组织阶段即可筛选出植物转基因的阳性细胞，有效地减轻转化后筛选的工作量。本方法能够在悬浮培养的愈伤组织中进行无细胞损伤的筛选，筛选过程无需进行组织化学检测或利用特殊的仪器设备，肉眼观测即可。利用本方法可获得高阳性率的转基因愈伤组织，极大缩短了筛选培养的时间。大缩短了筛选培养的时间。大缩短了筛选培养的时间。

【技术实现步骤摘要】
筛选转基因植物的组合物和方法


[0001]本专利技术涉及植物基因工程
，具体涉及一种植物转基因阳性细胞的筛选方法。

技术介绍

[0002]现行的植物基因工程一般通过农杆菌介导侵染宿主植物的愈伤组织，通过农杆菌的T
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DNA介导将外源基因序列转化、并随机插入到植物细胞中基因组中。因常规转基因方法构建的转基因细胞效率较低，需要通过一定的筛选方法对阳性细胞进行筛选，目前常用筛选方法为抗生素筛选和除草剂筛选。但受限于植物细胞和转染方法的特殊性，该筛选方式将获得大量假阳性细胞，继而形成嵌合体细胞团。此外，潮霉素或除草剂对液体环境培养的植物愈伤组织筛选能力远低于固体培养的植物愈伤细胞，实践操作中难以进行。因此，迫切需要寻找一种能够在植物转基因系统中，使用便捷、可靠性更高、且同时适用于固体和液体培养的新筛选方法。
[0003]我们在初始研究中，目标是建立一种可视化、不损伤细胞即可进行持续检测鉴定的植物转基因筛选方法。最为直接的是以GFP、RFP等荧光蛋白和目的蛋白进行共表达，在相应激发光源下持续进行筛选，直至获得完全荧光的愈伤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.筛选转基因植物的载体，所述载体包含DFR、LDOX、UFGT基因，所述DFR的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述LDOX的基因序列如SEQ ID NO.2所示，所述UFGT的的基因序列如SEQ ID NO.3所示。2.如权利要求1所述的载体，还包括其他标记基因。3.如权利要求2所述的载体，所述标记基因选自以下基因中的1种、2种，或3种：潮霉素除草剂抗性基因、卡那霉素抗生素抗性基因，氨苄青霉素抗生素抗性基因。4.如权利要求1
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3所述任一载体，所述植物为双子叶植物或单子叶植物。5.如权利要求4所述的载体，所述植物为水稻。6.包含权利要求1
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3，5所述任一载体的宿主细胞。7.包含权利要求4所述任一载体的宿主细胞。8.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于：所述的DFR、LDOX、UFGT基因可以分别位于2个或3个载体中，也可以位于同一个载体中。9.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于：所述的DFR、LDOX、UFGT基因可以分别位于2个或3个载体中，也可以在同一个载体中。10.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物。11.如权利要求7
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9所述的任一宿主细胞，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物。12.如权利要求10所述的宿主细胞，其特征在于：所述植物为水稻。13.如权利要求11所述的宿主细胞，其特征在于：所述植物为水稻。14.筛选转基因植物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）构建含有如权利要求1所述的DFR、LDOX、UFGT基因和外源基因的载体；2）将步骤1）构建的载体转入植物愈伤组织中，获得含有DFR、LDOX、UFGT和外源基因的愈伤组织；3）添加DFR基因编码的酶的底物；4）挑选显色的愈伤组织。15.如权利要求14所述的方法，其特征在于：还增加如下步骤，将挑选出的愈伤组织，于去除所述酶底物的培养基中培养1
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5天；挑选颜色褪去的愈伤组织颗粒。16.如权利要求15所述的方法，其特征在于：还增加如下步骤，对颜色褪去的愈伤组织颗粒，重复权利要求14的步骤3）、4），直到所有愈伤组...

【专利技术属性】
技术研发人员：王益行，吕晓荣，宋淼泉，凌建群，
申请(专利权)人：江苏吉锐生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：