一种串联双促溶标签及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种串联双促溶标签，包括促溶标签IF2DI和SUMO以及内含肽Mxe，本发明专利技术同时采用IF2DI和SUMO两个促溶标签组成双促溶表达标签，相对于单一的标签，可以更好促进目的蛋白的正确折叠并提高表达量，克服了单一标签蛋白折叠不好，促溶效果不理想的情况；且内含肽Mxe剪接后末端没有多余的氨基酸序列，提高了目的蛋白的纯度。目的蛋白的纯度。目的蛋白的纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种串联双促溶标签及其应用


[0001]本专利技术涉及蛋白表达纯化领域，尤其涉及一种串联双促溶标签及其应用。

技术介绍

[0002]重组蛋白的原核表达目前已被广泛应用，其优点是能够在短时间内获得大量基因表达产物，所需成本相对低廉。为了能够进行后续的结构功能研究，所获得的重组蛋白必须可溶，稳定，正确折叠以及具有生物活性。原核表达的缺点是表达出来的蛋白缺乏翻译后加工，导致不正确的蛋白折叠形成不溶性包涵体，需要经过复杂的变性复性处理，很难表达大量的可溶外源蛋白。重组蛋白表达的可溶性成为首要解决的问题，促溶标签常被用于促进重组蛋白的可溶性表达。
[0003]促溶标签IF2DI来源于大肠杆菌，分子量18kDa，对蛋白的结构影响小，具有很高的亲水性，可在不同的宿主中表达，适用范围广，促溶效率高。小泛素样修饰蛋白SUMO来源于啤酒酵母，分子量11.5kDa，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，还能抗蛋白酶水解和促进目的蛋白正确折叠，提高重组蛋白的稳定性和可溶性。促溶标签IF2DI与SUMO串联融合表达可以显著促进目的蛋白的可溶性表达。但是促溶标签IF2DI与SUMO在表达CD138时，蛋白酶或凝血酶酶切促溶标签IF2DI与SUMO时，目的蛋白的末端常残留有多余的氨基酸序列，从而影响目的蛋白的纯度。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提出了一种可以避免包涵体，同时也无需引入蛋白酶酶切，能够得到序列天然的目标产物的IF2DI和SUMO串联双促溶表达标签序列。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：一方面，本专利技术提供了一种串联双促溶标签，包括促溶标签IF2DI和SUMO以及内含肽Mxe。
[0006]在以上技术方案的基础上，优选的，所述促溶标签IF2DI的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述促溶标签SUMO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述内含肽Mxe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0007]另一方面，提供了一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，包括如下步骤：
[0008]S1，构建表达载体pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe；
[0009]S2，将目的基因X插入表达载体pET28a
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IF2DI
‑
SUMO
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Mxe的HindIII和XhoI酶切位点之间；
[0010]S3，将插入目的基因的表达载体pET28a
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IF2DI
‑
SUMO
‑
Mxe
‑
X转入表达菌株中，诱导表达；
[0011]S4，诱导后破碎菌株细胞，进行可溶蛋白的镍柱亲和纯化，得到纯合的目的蛋白。
[0012]在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S3所述诱导表达采用IPTG作为诱导剂。
[0013]在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S1的表达载体采用PCR及酶切连接方法，将IF2DI、SUMO和Mxe序列连接，并插入pET28a载体，获得pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe载体。
[0014]在以上技术方案的基础上，优选的，所述IF2DI促溶标签插入pET28a载体的方法为：人工合成IF2DI基因序列，并将该基因插入pET28a载体的NcoI和NdeI酶切位点之间，构建表达载体pET28a
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IF2DI，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。
[0015]在以上技术方案的基础上，优选的，所述SUMO促溶标签插入pET28a载体的方法为：通过PCR技术扩增出SUMO的基因片段，并将其插入pET28a
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IF2DI质粒的NdeI和BamHI酶切位点之间，位于IF2DI基因的下游，构建表达载体pET28a
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IF2DI
‑
SUMO，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。
[0016]在以上技术方案的基础上，优选的，所述内含肽Mxe插入pET28a载体的方法为：通过PCR技术扩增出内含肽Mxe蛋白的基因片段，并将其插入pET28a
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IF2DI
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SUMO质粒的BamHI和HindIII酶切位点之间，位于SUMO基因的下游，构建表达载体pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。
[0017]本专利技术的一种串联双促溶标签及其应用相对于现有技术具有以下有益效果：
[0018](1)本专利技术同时采用IF2DI和SUMO两个促溶标签组成双促溶表达标签，相对于单一的标签，可以更好促进目的蛋白的正确折叠并提供表达量，克服了单一标签蛋白折叠不好，促溶效果不理想的情况。
[0019](2)该表达载体可通过镍柱亲和纯化，纯化方法简单。纯化完成后无需用SUMO蛋白酶去除标签部分，内含肽可以自行切除标签并与目的基因连接，大大节约了研究的时间和成本。
[0020](3)内含肽可以自行切除标签并与目的蛋白连接，可以减少目的蛋白末端残留的多余氨基酸序列，提高目的蛋白纯度，从而保证目的蛋白的天然结构和功能。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为本专利技术的pET28a图诱导前后不同处理样品的SDS
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PAGE电泳图；
[0023]图2为本专利技术的pET28a
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IF2DI诱导前后不同处理样品的SDS
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PAGE电泳图；
[0024]图3为本专利技术的pET28a
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SUMO诱导前后不同处理样品的SDS
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PAGE电泳图；
[0025]图4为本专利技术的pET28a
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IF2DI
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SUMO诱导后不同处理样品的SDS
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PAGE电泳图；
[0026]图5为本专利技术的pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe诱导后不同处理样品的SDS
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PAGE电泳图。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施方式，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种串联双促溶标签，其特征在于：包括促溶标签IF2DI和SUMO以及内含肽Mxe。2.如权利要求1所述的一种串联双促溶标签，其特征在于：所述促溶标签IF2DI的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述促溶标签SUMO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述内含肽Mxe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于：包括如下步骤：S1，构建表达载体pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe；S2，将目的基因X插入表达载体pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe的HindIII和XhoI酶切位点之间；S3，将插入目的基因的表达载体pET28a
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IF2DI
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SUMO
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Mxe
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X转入表达菌株中，诱导表达；S4，诱导后破碎菌株细胞，进行可溶蛋白的镍柱亲和纯化，得到纯合的目的蛋白。4.如权利要求3所述的一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于，步骤S1的表达载体采用PCR及酶切连接方法，将IF2DI、SUMO和Mxe序列连接，并插入pET28a载体，获得pET28a
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IF2DI
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SUMO
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【专利技术属性】
技术研发人员：雷苗，孙秋菊，
申请(专利权)人：武汉菲恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：