一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒及其使用方法，属于生物医药检测技术领域。本发明专利技术提供的高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒包括试剂A、试剂B、试剂C、FeSO4·7H

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及生物医药检测
，尤其涉及一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
生物体的细胞内会产生多种抗氧化剂，例如谷胱甘肽，α-生育酚，抗坏血酸，超氧化物歧化酶，过氧化氢酶，过氧化物酶等，以防止活性氧ROS潜在的有害作用。目前已经开发出多种测定法来测量特定抗氧化剂的浓度以及生物体细胞内存在的所有抗氧化剂的浓度。不同于其他间接检测法，还原铁抗氧化能力FRAP法能直接检测量样品中抗氧化剂对氧化作用抑制的能力。其原理是在低pH值下，样品中的抗氧化剂将Fe3+-TPTZ络合物还原为Fe2+-TPTZ，呈现蓝色。着色强度与样品中大多数非酶类抗氧化剂的还原能力成正比，因此可测量总体抗氧化能力。FRAP法简单，快速，便宜且稳定，已广泛用于农业、营养以及生态研究的各个领域。在FRAP分析中，不需要样品预处理，化学计量因子恒定，线性范围宽，重现性极佳，灵敏度高。检测过程不需要高度专业的设备或技能，也不需要严格控制时间和反应条件。然而对于血液样本来说，采用FRAP法测量多个抗氧化剂并估算其精度通常需要的样本量太大，这使得研究人员难以对小型野生动物的抗氧化特征进行全面分析。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提出了一种准确性、稳定性好、灵敏度高的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒。本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，包括：试剂A、试剂B、试剂C、FeSO4·7H2O粉末、阳性对照TCEP-HCl溶液和尿酸酶。在以上技术方案的基础上，优选的，所述试剂A包括醋酸溶液和醋酸钠溶液，试剂B包括TPTZ溶液和HCl溶液，试剂C包括FeCl3溶液和Tris-HCl溶液，上述溶液的溶剂为去离子水。在以上技术方案的基础上，优选的，所述醋酸溶液体积分数为1％-5％，醋酸钠溶液浓度为5-50mmol/L。在以上技术方案的基础上，优选的，所述TPTZ溶液浓度为5-50mmol/L，HCl溶液浓度为10-100mmol/L。在以上技术方案的基础上，优选的，所述FeCl3溶液浓度为5-50mmol/L，Tris-HCl溶液浓度为5-40mmol/L。在以上技术方案的基础上，优选的，所述阳性对照TCEP-HCl溶液浓度是10-20mmol/L。在以上技术方案的基础上，优选的，所述尿酸酶浓度为1-5U/ml。在以上技术方案的基础上，优选的，所述的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤如下：S1，所述FeSO4·7H2O用去离子水溶解，配置浓度为0、0.25、0.50、0.75、1.00、1.50mmol/L的标准溶液；S2，所述试剂A、试剂B、试剂C以体积比为10:1:1的比例混合，配成工作液；S3，从96孔板中选取6个孔，将S1中配置的FeSO4·7H2O标准溶液分别加入这6个孔，每个孔加入量为20μl，作为标准曲线检测孔；另外选取1个孔加入20μl去离子水作为空白孔；再根据待测样品数量选取检测孔，并向孔内分别加入10μl待测样品和10ul尿素酶，作为样品检测孔；另选取1个孔，加入10μlTCEP-HCl和10ul尿素酶，作为阳性对照孔；分别向标准曲线检测孔、空白孔、样品检测孔、阳性对照孔中加入180μl工作液，混匀备用；S4，37℃孵育3-5分钟后，于593nm处测定各孔吸光度，绘制标准曲线。在以上技术方案的基础上，优选的，所述的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒在小型野生动物血清样本中的应用。本专利技术的总抗氧化能力检测试剂盒相对于现有技术具有以下有益效果：(1)通过加入尿酸酶，消除了血液样品中尿酸的干扰，结果更准确。(2)优化了醋酸与醋酸钠的比例，使pH不受样品加入的影响，结果稳定重复性好。(3)优化了各组分的浓度，使得在低浓度的样本测定上依旧能保持良好的线性关系，结果的准确性和稳定性更好，灵敏度更高，适合小型野生动物血清抗氧化特征进行全面分析。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例一中兔血清抗氧化能力标准曲线图；图2为实施例二中兔血清抗氧化能力标准曲线图；图3为实施例三中兔血清抗氧化能力标准曲线图；图4为对比例中兔血清抗氧化能力标准曲线图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施方式，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。以兔血清为试验材料，采用3个实施例和1个对照例检验试剂盒的准确性和稳定性。实施例一本实施例试剂盒，包括试剂A、试剂B、试剂C、FeSO4·7H2O粉末、阳性对照和尿酸酶。试剂A：醋酸溶液、醋酸钠溶液，醋酸溶液体积分数为2.5％，醋酸钠溶液浓度为5mmol/L；试剂B：TPTZ溶液和HCl溶液，TPTZ溶液浓度为15mmol/L，HCl溶液浓度为75mmol/L；试剂C：FeCl3溶液和Tris-HCl溶液，FeCl3溶液浓度为20mmol/L，Tris-HCl溶液浓度为5mmol/L；阳性对照：TCEP-HCl溶液，浓度为10mmol/L；尿酸酶：尿素酶浓度为1U/ml。检测步骤：S1，所述FeSO4·7H2O用去离子水溶解，配置浓度为0、0.25、0.50、0.75、1.00、1.5mmol/L的标准溶液；S2，所述试剂A、试剂B、试剂C以体积比为10:1:1的比例混合，配成工作液；S3，从96孔板中选取6个孔，将S1中配置的FeSO4·7H2O标准溶液分别加入这6个孔，每个孔加入量为20μl，作为标准曲线检测孔；另外选取1个孔加入20μl去离子水作为空白孔；再根据待测样品数量选取检测孔，并向孔内分别加入10μl兔血清样品和10ul尿素酶，作为样品检测孔；另选取1个孔，加入10μlTCEP-HCl和10ul尿素酶，作为阳性对照孔；分别向标准曲线检测孔、空白孔、样品检测孔、阳性对照孔中加入180μl工作液，混匀备用；S4，37℃孵育3-5分钟后，于593nm处测定各孔吸光度，绘制标准曲线。实施例二本实施例试剂盒，包括试剂A、试剂B、试剂C、FeSO4·7H2O粉末、阳性对照和尿酸酶。试剂A：醋酸溶液、醋酸钠溶液，醋酸溶液体积分数为5％，醋酸钠溶液浓度为35mmol/L；试剂B：TPTZ溶液和HCl溶液，TPTZ溶液浓度为50mmol/L，HCl溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂A、试剂B、试剂C、FeSO

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂A、试剂B、试剂C、FeSO4·7H2O粉末、阳性对照TCEP-HCl溶液和尿酸酶；
所述试剂A包括醋酸溶液和醋酸钠溶液，试剂B包括TPTZ溶液和HCl溶液，试剂C包括FeCl3溶液和Tris-HCl溶液，上述溶液的溶剂为去离子水。


2.如权利要求1所述的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，其特征在于，所述醋酸溶液体积分数为1％-5％，醋酸钠溶液浓度为5-50mmol/L。


3.如权利要求1所述的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，其特征在于，所述TPTZ溶液浓度为5-50mmol/L，HCl溶液浓度为10-100mmol/L。


4.如权利要求1所述的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，其特征在于，所述FeCl3溶液浓度为5-50mmol/L，Tris-HCl溶液浓度为5-40mmol/L。


5.如权利要求1所述的一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照TCEP-HCl溶液浓度为10-20mmol/L。


6.如权利要求1所述的一种高灵敏度...

【专利技术属性】
技术研发人员：董垚，戴琦，
申请(专利权)人：武汉菲恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42