一种人肝微粒体与细胞共培养体系及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种人肝微粒体与细胞共培养体系及其构建方法和应用。人的肝源很难保证无菌，在制备人源肝微粒体时，几乎无法获得无菌的肝微粒。为了将人源肝微粒体与细胞共培养进行体外代谢试验研究，本发明专利技术提供了一种能够将有菌的人肝微粒体与无菌细胞直接接触的共培养方法，成功构建了人肝微粒体与细胞共培养体系。试验证明，本发明专利技术的构建方法能够保证人肝微粒体中的污染源无法对细胞的无菌环境造成影响，维持细胞正常生长的无菌状态。并且，该方法适用于外源物质(如烟碱、烟气)体外代谢研究，为人源肝微粒体与细胞共同作用的体外代谢研究奠定了基础。研究奠定了基础。研究奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种人肝微粒体与细胞共培养体系及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞共培养
，具体涉及一种人肝微粒体与细胞共培养体系及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]肝微粒体是从肝细胞内质网碎片中得到的小型囊泡，直径约为0.1μm，具有完整的I相代谢酶(如细胞色素P450、黄素单加氧酶、单胺氧化酶等)，II相代谢酶(如葡萄糖醛酸转移酶，硫酸基转移酶)、酯酶等，这些酶参与人体内药物代谢情况，是FDA指定预测人体内代谢及抑制试验的研究工具。
[0003]在进行与细胞共同参与的代谢活化试验时，通常将无菌鼠肝微粒体+代谢活化体系与外源物质加入培养基中共同作用细胞。而由于种属差异的存在，鼠肝微粒体中代谢酶并不能完全符合实验的需要，如研究报道鼠肝微粒体中CYP2A6酶低表达或者不表达。CYP2A6酶是CYP450酶系亚家族CYP2A中的重要一员，负责烟碱、咖啡因等药物的代谢。因此，在做烟碱及咖啡因等药物代谢相关研究时，通常需选择供体来源丰富的人源肝微粒体如25供体人肝微粒进行代谢活化实验研究，而由于人的肝源很难保证无菌，在制备人源肝微粒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人肝微粒体与细胞共培养体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以二甲胺四环素盐酸盐、青霉素、链霉素、NADPH再生系统、人肝微粒体和基础培养基配制孵育代谢培养基溶液；所述孵育代谢培养基溶液中，二甲胺四环素盐酸盐的终浓度为2～3μg/mL，青霉素的终浓度为80～120U/mL，链霉素的终浓度为80～120μg/mL；2)使用孵育代谢培养基溶液培养细胞，实现人肝微粒体与细胞的共培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，人肝微粒体的终浓度为1mg/mL，NADPH再生系统的体积百分浓度为6％。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，细胞为Beas
‑
2b细胞，步骤1)中所述基础培养基为BEGM BulletKit，或者含终体积5
‑
10％FBS、终浓度80～120U/mL青霉素和终浓度80～120μg/mL链霉素的DMEM培养基溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中，使用孵育代谢培养基溶液培养细胞包括将指数生长期的Beas
‑
2b细胞的原培养基移除，然后加入孵育代谢培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：华辰凤，赵俊伟，史清照，尚平平，李翔，谢复炜，秦亚琼，王昇，刘惠民，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：