一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术将双斑东方鲀的卵巢进行分离培养，获得其原代细胞，并进行连续继代培养，最终建立稳定的双斑东方鲀卵巢细胞系。该细胞系的细胞性状优良，以长纤维状细胞为主，分裂旺盛，传代时间短，易消化，贴壁率好，耐饥饿。本发明专利技术的双斑东方鲀卵巢细胞系为双斑东方鲀性腺发育机制研究提供了一种新的体外模型。一种新的体外模型。

【技术实现步骤摘要】
一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用。

技术介绍

[0002]双斑东方鲀 (Takifugu bimaculatus)，属鲀形目，鲀科，东方鲀属，为近海暖温性底层鱼类，分布于我国南海、东海和黄海南部。其经济价值高、开发潜力大的水产珍品。双斑东方鲀是福建省养殖的河鲀鱼主要品种，是鱼虾贝生态混养模式主要搭配养殖品种，对于阻断对虾病害的水平传播、提高养殖成活率起到重要作用，目前在福建省已经达到一定的规模。2015年养殖面积8万亩以上，产量1.1万吨左右，产值8亿元以上，漳浦县为河豚鱼主产区，产量占全省90%以上。
[0003]建立鱼类细胞系能为鱼类病毒分离、抗病毒机制、疫苗研发、转基因技术、嵌合体组织工程等研究提供极大的便捷，且设施人力等资源要求相对活体实验低，重复性好，研究周期短。细胞培养为开展鱼类毒理、病理、遗传分析等研究提供了重要的体外模型。
[0004]目前关于双斑东方鲀细胞系的建立未见报道；仅有关于其他东方鲀属的部分细胞系的建立及少部分分离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株双斑东方鲀卵巢细胞系，其特征在于：所述细胞系分类命名为双斑东方鲀卵巢细胞FGO，已于2021年4月26日于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：C202175，保藏地址为中国武汉，武汉大学。2.权利要求1所述的一株双斑东方鲀卵巢细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：双斑东方鲀卵巢组织的获取：将7个月大，长8
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10cm的双斑东方鲀幼鱼在含三抗的灭菌海水，中暂养1
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2h，使用添加1wt
‰
次氯酸钠的灭菌海水对鱼体表面进行消毒15 min，然后滴入占灭菌海水体积0.005
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0.015%的丁香酚，直至鱼体翻转，腹部朝上，对刺激应激无反应为止；以灭菌纱布块擦除鱼体表面粘液，再以浸有酒精的纱布擦拭鱼体表面后，将鱼体移入超净台，用解剖器具取出卵巢组织，于含三抗的PBS溶液中漂洗3
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4次；所述三抗为三抗的100
ꢀ×
浓缩液：含10000 U/mL青霉素、10000 μg/mL链霉素及10000 U/mL两性霉素B；所述含三抗的灭菌海水：配制海水时每100 mL海水加入1 mL三抗的100
ꢀ×
浓缩液；所述含三抗的PBS溶液：100mL PBS液加入1 mL三抗的100
ꢀ×
浓缩液；（2）原代培养：将上述双斑东方鲀卵巢组织切碎至1mm3的小组织块，以PBS溶液漂洗三次；漂洗后将上述小组织块转移至15 mL离心管中，使用0.25wt%胰酶消化法获得单细胞，并利用70 μm细胞过滤筛过滤消化的细胞，转移至15 mL离心管中，收集细胞沉淀，用5 mL完全培养液重悬细胞后接种于细胞培养瓶中，于27℃恒温培养启动原代培养，每2
ꢀ‑ꢀ
3天更换完全培养液一次；（3）传代培养：原代培养至贴壁细胞增殖至80
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90%覆盖率时，移除旧培养液，加入5 mL含1vol%三抗的PBS溶液清洗1次；然后以0.25wt%胰酶消化法传代悬起细胞，以细胞悬液与完全培养液的体积比为1:2进行传代；以后每隔3
‑
4天传代一次，直至60代，成功建立双斑东方鲀卵巢细胞系。3.根据权利要求2所述的一株双斑东方鲀卵巢细胞系的构建方法，其特征在于：上述完全培养液以L
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15培养液为基础培养液，胎牛血清、β
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【专利技术属性】
技术研发人员：张子平，钟照威，王艺磊，赵丽萍，姜永华，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：