具有免疫反应性的新冠状病毒B-细胞抗原制造技术

本发明专利技术公开了具有免疫反应性的新冠状病毒B

【技术实现步骤摘要】
具有免疫反应性的新冠状病毒B
‑
细胞抗原
专利

[0001]本专利技术涉及一组与新型冠状病毒相关的B
‑
细胞抗原，一种待测样品中是否含有与新型冠状病毒导致的抗体的检测方法，和/或一种检测受试者是否感染新型冠状病毒的方法。本专利技术还涉及一种检测待测样品中是否含有与新型冠状病毒抗体的试剂盒。本专利技术进一步涉及所述的新型冠状病毒B
‑
细胞抗原用于制备预防由新型冠状病毒导致疾病的药物的用途，以及一种预防与新型冠状病毒感染的疫苗抗原，属于医药


技术介绍

[0002]与人类相关的新型冠状病毒已经被确认为新的病毒，人类以迄今最快的速度测定了他们的基因序列，主要由RNA
‑
依赖性RNA聚合酶、刺突(S)、膜 (M)、被膜(E)、核壳(N)、聚合酶(P)等蛋白组成。其中刺突(S)蛋白、膜(M) 蛋白和包膜(E)蛋白组成了病毒外壳，是病毒识别、结合并进入宿主细胞的蛋白质。尤其是刺突S蛋白是关键性蛋白。
[0003]寻找抗原决定簇最为常用的方法是利用各种计算机软件，通过已经发表的序列采用亲水性、疏水性、转角结构、HPLC滞留系数、螺旋结构、保守性等参数进行预测。我们的实验结果表明，这种预测方法与实际测得的序列仅有30％～50％的重复性(1、ZHANG XM,LIU G和SUN MJ,Brain Research,2000, 868：157
‑
164；2、ZHANG XM,LIU G和SUN MJ,Brain Research, 2001,895：277
‑
282.)。
[0004]另一种方法是采用组合化学技术对蛋白抗原决定簇谱的研究(“交叉重叠”多肽化合物)，从而快速发现最小的抗原决定簇，并构建决定簇谱(一种肽文库、其合成方法及从该文库中筛选的活性片段，申请号： 200310101892.6。)。

技术实现思路

[0005]本专利技术采用组合化学技术，该法的特点是以一定数目的氨基酸残基肽 (比如1到50个氨基酸残基)为基础，合成“交叉重叠”片段，将蛋白序列通过氨基酸逐个错位(或者间隔错位)的方式全部合成出来，然后进行抗原
‑
抗体反应(或者其它生物目的的筛选反应等，如筛选发现T
‑
细胞免疫抗原决定簇，以及新型冠状病毒的受体配基等)，一次便可以得到所有最短的抗原决定簇，进而绘制成抗原决定簇谱。基于此抗原决定簇谱，通过针对设计的抗原性多肽再进行抗新型冠状病毒人阳性血清筛选，可以筛除非抗原性多肽，得到的抗原性多肽可用于制备新型冠状病毒诊断试剂、药物以及疫苗的B
‑
细胞多肽化合物以及它们的图谱。
[0006]本专利技术基于新型冠状病毒相关的S和N蛋白的全部“交叉重叠”多肽的抗原决定簇谱，独特的抗原性多肽设计经验，使用新型冠病毒感染者的阳性血清对其进行筛选，快速发现了新型型冠状病毒的B
‑
细胞抗原多肽，从而完成了本专利技术。
[0007]本专利技术的一个方面，涉及一组衍生自新型冠状病毒的B
‑
细胞抗原，其选自至少一种下列多肽序列，或其任一组合，包括：
[0008]新型冠病毒抗原1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示
[0009]新型冠病毒抗原2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示
[0010]新型冠病毒抗原3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示
[0011]本专利技术所涉及的这些抗原其C
‑
端可为酰胺基或者羧基或者是酯基形式亦或是酰胺基的其他形式；再可能是其C
‑
端再加一个半胱氨酸残基(cys)的酰胺基形式亦或是酰胺基的其他形式亦或是羧基形式亦或是酯基形式；其N
‑ꢀ
端可能是氨基、乙酰化的氨基、烷酰化的氨基，亦或是N
‑
端增加一个半胱氨酸(cys)乙酰化形式、其他酰胺化的其他形式亦或是氨基的形式。
[0012]本专利技术所涉及到的抗原包含其中含有的任意序列的抗原决定簇，包括线性及环装抗原决定簇。
[0013]本专利技术人在上述短肽基础上，并采用10份抗新型冠状病毒阳性血清混合抗原筛选结果得到。阴性血清为健康人血清，并证实对这些抗原没有酶联免疫吸附试验中的免疫反应性。
[0014]本专利技术的另一方面还涉及一种检测待测样品中是否含有与新型冠病毒感染相关的新型冠状病毒抗原的试剂盒，其中含有至少一种本专利技术所述的新型冠状病毒B
‑
细胞抗原或其任一组合，以及适当的显色剂和缓冲液。
[0015]本专利技术的试剂盒可以用于检测待测样品中是否含有与新型冠病毒感染相关的新型冠病毒抗体，包括用检测有效量的至少一种本专利技术所述新型冠状病毒B
‑
细胞抗原或其任一组合，在适于抗原抗体结合的条件下与待测样品结合或接触。如本专利技术中使用的ELISA方法，以及方法中使用的辣根过氧化酶及其底物。
[0016]相应的，本专利技术还涉及一种检测受试者是否感染新型冠病毒的方法，包括用检测有效量的至少一种所述新型冠状病毒B
‑
细胞抗原或其任一组合，在适于抗原抗体结合的条件下与获自受试者的样品结合或者接触。
[0017]本领域普通技术人员知晓如何根据所选择的具体检测方式决定所采用的本专利技术所述多肽的用量，以及与所选择的检测标记相适应的显示方式。本领域普通技术人员也知晓能够通过将一种或一种以上的所述抗原决定簇多肽用于所述SARS相关冠状病毒的抗体检测方法中。
[0018]本专利技术还包括所述的新型冠状病毒B
‑
细胞抗原用于制备预防新型冠疾病的药物的用途。
[0019]本专利技术还特别包括一种预防与新型冠疾病感染导致相关症状的新型冠状病毒感染的疫苗，其中含有预防有效量的所述新型冠状病毒B
‑
细胞抗原，任选的佐剂，以及药学可接受的载体。
附图说明
[0020]图1：新型冠病毒抗原1的高效液相色谱图。
[0021]图2：新型冠病毒抗原1的质谱图。
[0022]图3：新型冠病毒抗原2的高效液相色谱图。
[0023]图4：新型冠病毒抗原2的质谱图。
[0024]图5：新型冠病毒抗原3的高效液相色谱图。
[0025]图6：新型冠病毒抗原3的质谱图。
具体实施方式
[0026]实施例1：多肽的制备步骤
[0027]采用常规的固相合成多肽的方法，制备了多肽。步骤如下：
[0028]1)、脱Fmoc保护步骤
[0029]脱Fmoc保护步骤将市售的Rink Amide AM resin装入一个有过滤器且耐有机溶剂的反应管中，并用一个耐有机溶剂的盖子盖紧。用DMF(二甲基甲酰胺) 洗涤1分钟后，加入过量的20％哌啶/DMF(体积比)溶液，盖紧后轻轻摇晃反应管，使之混合均匀并保持脱除Fmoc保护15分钟。抽杆后再用DMF洗涤三次。
[0030]2)、肽键缩合步骤
[0031]将经过预活化(预本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠状病毒抗原，所述抗原是至少下述任意一种多肽或组合，所述多肽的氨基酸序列选自：如SEQ ID NO:1所示，如SEQ ID NO:2所示或如SEQ ID NO:3所示。2.一种新型冠状病毒抗原在制备疫苗中的应用，其特征在于，所述抗原是至少下述任意一种多肽或组合，所述多肽的氨基酸序列选自：如SEQ ID NO:1所示，如SEQ ID NO:2所示或如SEQ ID NO:3所示。3.根据权利要求2的应用，其特征在于，所述的疫苗是将所述新型冠状病毒抗原与佐剂合用。4.根据权利要求2
‑
3中任一项的应用，其特征在于，所述的疫苗含有预防有效量的权利要求3所述的新型冠状病毒抗原，任选的的佐剂，以及药学可接受的载体。5.一种的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有一种新冠状病毒抗原，所述抗原是至少下述任意一种多肽或组合，所述多肽的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：周子意，刘刚，马瑶，
申请(专利权)人：杭州康柏睿格医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：