一种穿心莲内酯衍生物及其工业色谱制备方法和应用技术

本发明专利技术的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯，体外实验表明该化合物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞中一氧化氮(NO)的生成具有显著的抑制作用，进一步，可用于治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)；本发明专利技术提供的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯制备方法，可采用工业色谱技术大量制备高纯度该化合物。色谱技术大量制备高纯度该化合物。色谱技术大量制备高纯度该化合物。

【技术实现步骤摘要】
一种穿心莲内酯衍生物及其工业色谱制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种穿心莲内酯衍生物10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]穿心莲内酯是从爵床科植物穿心莲[Andrographis paniculata(Burm.F.)Nees]全草中提取的半日花烷型二萜类化合物，具有抗菌消炎，解毒等功效，是一种重要的活性天然产物。穿心莲内酯及其衍生物已经被制成多种剂型(片剂、滴丸、胶囊等)广泛应用于临床，如喜炎平注射液、莲必治注射液、炎琥宁注射液、穿心莲内酯片等在临床均表现出良好的清热解毒、抗菌消炎功效。Luvone等认为，一氧化氮(NO)与急慢性炎症的发生均相关[Luvone T,Carnuccio R,Di RM.Modulation of granuloma formation endogenous nitric oxide[J].Eur J Pharmacol,1994,265(1/2):89-92.]。穿心莲内酯能够明显下调脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中炎症因子NO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6的表达，从而抑制炎症反应。
[0003]目前临床上广泛使用的喜炎平注射液的有效成分为穿心莲内酯总磺化物，为穿心莲内酯的衍生物，具有清热解毒、抗菌消炎等功能，但是喜炎平的活性成分为穿心莲内酯的磺化产物，并非单一结构，因此采用单一结构的小分子化合物以进一步明确机理，对其药效及其毒理学研究具有重要意义；尽管穿心莲内酯类化合物已取得一些研究成果，但是对于多种疾病，尤其抗炎领域仍然没有新的特别有效的穿心莲内酯衍生物或类似物用于临床。因此，开发新的具有抗炎活性的穿心莲内酯单体药物具有重要的社会意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了新的具有抗炎活性的穿心莲内酯衍生物10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯(式I)及其制备方法和用于制备炎症疾病药物方面的应用。
[0005]本专利技术第一方面，提供10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯式(Ι)化合物，
[0006][0007]本专利技术第二方面，提供10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯式(Ι)化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)取穿心莲内酯总磺化物溶解于水，上样于大孔吸附树脂柱，采用有机溶剂和水
混合溶剂进行洗脱，合并含有10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯的洗脱液，浓缩，得粗品1；
[0009](2)将粗品1用混合有机溶剂(A/B)溶解，上样于硅胶柱，用混合有机溶剂(A/B)进行洗脱，合并含有10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯的洗脱液，浓缩，得粗品2；
[0010](3)将粗品2用有机溶剂和水混合溶剂溶解，上样于HPLC制备柱，用有机溶剂和水混合溶剂进行梯度洗脱，用紫外在线检测器检测分离情况，根据出峰时间及色谱峰高度，确定洗脱液收集起止时间，合并含有10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯的洗脱液，浓缩。
[0011]优选的，所述步骤(1)中，大孔吸附树脂为苯乙烯型大孔吸附树脂；
[0012]更优选的，苯乙烯型大孔吸附树脂型号为HPD-100S、D101S或LX-1180。
[0013]优选的，所述步骤(1)中，有机溶剂为醇类，如甲醇或乙醇。
[0014]优选的，有机溶剂和水的混合溶剂0％～70％(V/V)甲醇-水溶液(优选20-60％(V/V)甲醇-水溶液)或0％～70％(V/V)乙醇-水溶液(优选20-60％(V/V)乙醇-水溶液)。
[0015]优选的，所述步骤(1)中，洗脱的方式为梯度洗脱，如依次用体积比20％、40％、60％乙醇-水溶液，或，依次用体积比20％、35％、45％、60％乙醇-水溶液进行洗脱，或，依次用体积比20％、35％、50％、60％甲醇-水溶液进行洗脱。
[0016]优选的，所述步骤(1)中，浓缩为减压浓缩。
[0017]优选的，所述步骤(1)中，浓缩温度为40～50℃。
[0018]优选的，所述步骤(2)中，混合有机溶剂(A/B)中，A为石油醚或环己烷中的一种或多种，B为乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或丙酮中的一种或多种；
[0019]更优选的，混合有机溶剂(A/B)优选石油醚/丙酮溶液；
[0020]进一步优选的，溶解时采用的混合有机溶剂(A/B)为5:1～4:1(V/V)石油醚/丙酮溶液；洗脱时采用的混合有机溶剂(A/B)为5:1～1:1(V/V)(优选4:1～1:1(V/V))石油醚/丙酮溶液。
[0021]优选的，所述步骤(2)中，洗脱的方式为梯度洗脱，如依次用4:1、3:1、2:1、1:1(V/V)石油醚丙酮溶液洗脱。
[0022]优选的，所述步骤(2)中，浓缩优选减压浓缩。
[0023]优选的，所述步骤(2)中，浓缩温度优选为40～50℃。
[0024]优选的，所述步骤(3)中，HPLC制备柱填料为反相C
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填料，更优选为XAqua、ODS-A或ODS-AQ。
[0025]优选的，所述步骤(3)中，紫外在线检测器的检测波长为200～300nm。
[0026]优选的，所述步骤(3)中，有机溶剂为甲醇或乙腈；
[0027]更优选的，溶解时采用的有机溶剂和水的混合溶剂为5～15％(V/V)甲醇水溶液或5～15％(V/V)乙腈水溶液；洗脱时采用的有机溶剂和水的混合溶剂为20％～60％(V/V)甲醇水溶液或20％～60％(V/V)乙腈水溶液。
[0028]优选的，所述步骤(3)中，浓缩为减压浓缩。
[0029]优选的，所述步骤(3)中，浓缩温度为40～50℃。
[0030]本专利技术第三方面，提供一种以10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯作为药物活性成分的药物制剂，该制剂类型包括但不限于注射剂、片剂、胶囊或分散片。
[0031]本专利技术第四方面，提供上述的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯或上述的药物制剂在制备治疗炎症疾病药物中的应用；所述炎症疾病优选肺炎；所述肺炎优选新型冠状病
毒肺炎；所述新型冠状病毒肺炎优选COVID-19。
[0032]本专利技术的有益技术效果
[0033]1.提供一种全新的手性的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯式(Ι)化合物，经验证具有较好的治疗炎症疾病的效果；进一步的，可用于治疗肺炎，如新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
[0034]2.本专利技术所述的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯制备方法，操作方便，收率高，可采用工业色谱技术大量制备高纯度该化合物，用于工业规模化生产。
附图说明
[0035]图1:实施例2的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯核磁共振氢谱图；
[0036]图2:实施例2的10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯核磁共振碳谱图；
[0037]图3:实施例2的10-(R)-1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯式(Ι)化合物，2.10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯式(Ι)化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取穿心莲内酯总磺化物溶解于水，上样于大孔吸附树脂柱，采用有机溶剂和水混合溶剂进行洗脱，合并含有10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯的洗脱液，浓缩，得粗品1；(2)将粗品1用混合有机溶剂(A/B)溶解，上样于硅胶柱，用混合有机溶剂(A/B)进行洗脱，合并含有10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯的洗脱液，浓缩，得粗品2；(3)将粗品2用有机溶剂和水混合溶剂溶解，上样于HPLC制备柱，用有机溶剂和水混合溶剂进行梯度洗脱，用紫外在线检测器检测分离情况，根据出峰时间及色谱峰高度，确定洗脱液收集起止时间，合并含有10-(R)-17-氢-7-去氢穿心莲内酯的洗脱液，浓缩。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，大孔吸附树脂为苯乙烯型大孔吸附树脂；优选的，苯乙烯型大孔吸附树脂型号为HPD-100S、D101S或LX-1180；和/或，有机溶剂为醇类，如甲醇或乙醇；和/或，有机溶剂和水的混合溶剂为0％～70％(V/V)甲醇-水溶液或0％～70％(V/V)乙醇-水溶液；和/或，洗脱的方式为梯度洗脱；和/或，浓缩为减压浓缩；和/或，浓缩温度为40～50℃。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，混合有机溶剂(A/B)中，A为石油醚或环己烷中的一种或多种，B为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王章伟，郭正友，刘地发，张毅，刘尧奇，方礼，刘芳芳，周舟，王振，周鹏，谢标鹏，钟仁清，
申请(专利权)人：江西青峰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：