一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，它涉及一种分离胆固醇的方法。本发明专利技术的目的是要解决目前没有方法可以将磷脂膜中的胆固醇分离的问题。方法：一、玻璃基底表面疏水基团的修饰；二、基底上磷脂膜的铺展。本发明专利技术利用玻璃基底的特殊处理，构建不同程度的纳米级亲水和疏水结构域表面，实现铺展在表面上的磷脂膜中胆固醇的抽取分离，创建了磷脂膜中胆固醇分离的新方法，具有操作简单、反应条件温和、可控性好、耗时短、成本低等优点。本发明专利技术可以使胆固醇从磷脂膜中分离出来。本发明专利技术可获得一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法。利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法。利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法。
【技术实现步骤摘要】
一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法
[0001]本专利技术涉及一种分离胆固醇的方法。
技术介绍
[0002]膜结构是生物、医药和工业领域的重要组成部分，其中，由固体表面支撑构建的支撑磷脂双层膜是研究生物膜特性的最佳模型。
[0003]将磷脂膜中的胆固醇分离便于开展磷脂膜与基底的相互作用研究，膜的结构及性质等膜特性等研究。目前没有方法可以将磷脂膜中的胆固醇分离，因此，需要寻找一种具有操作简单、反应条件温和、可控性好、耗时短、成本低等优点的方法将磷脂膜中的胆固醇进行分离。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是要解决目前没有方法可以将磷脂膜中的胆固醇分离的问题，而提供一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法。
[0005]一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，具体是按以下步骤完成的：
[0006]一、玻璃基底表面疏水基团的修饰：
[0007]①
、将疏水剂和甲苯混合均匀，得到疏水剂甲苯溶液；
[0008]②
、将清洗干净的基底浸入到疏水剂甲苯溶液中组装4h～8h，取出后使用甲苯冲洗，再氮气吹干，得到表面组装疏水基团的基底，放入4℃冰箱保存备用；
[0009]二、基底上磷脂膜的铺展：
[0010]①
、将表面组装疏水基团的基底置于等离子清洗机中氧化处理，得到含有纳米级亲水和疏水结构的基底；
[0011]②
、首先将Tris缓冲液滴加到含有纳米级亲水和疏水结构的基底上，然后滴加磷脂囊泡溶液，磷脂囊泡下沉并与基底接触，破裂铺展在基底表面，最后使用Tris缓冲液冲洗掉剩余的磷脂囊泡，得到含有磷脂膜的基底；
[0012]③
、将含有磷脂膜的基底在室温下继续孵育5min～120min，得到分离胆固醇后的磷脂膜。
[0013]本专利技术的原理及优点：
[0014]一、本专利技术利用玻璃基底的特殊处理，构建不同程度的纳米级亲水和疏水结构域表面，实现铺展在表面上的磷脂膜中胆固醇的抽取分离，创建了磷脂膜中胆固醇分离的新方法，具有操作简单、反应条件温和、可控性好、耗时短、成本低等优点；
[0015]二、有纹理表面特性的生物底物的普遍存在和广泛使用，本专利技术不仅在生物和化学科学领域的膜特性研究提供方案，在生物传感器和可调节的生物膜特性应用研究也具有参考意义，可用于细胞生物学、生物化学、仿生膜等领域的相关生物膜特性，细胞膜模拟等研究和应用；
[0016]三、使用本专利技术的方法，胆固醇从磷脂膜中分离率可达70％以上。
[0017]本专利技术可获得一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法。
附图说明
[0018]图1为接触角对比图，图中1为实施例一中表面组装疏水基团的基底，2为使用等离子清洗机部分氧化处理后的基底；
[0019]图2为磷脂囊泡在铺展前后的荧光显微镜照片图，图中1为磷脂囊泡溶液，2为含有磷脂膜的基底；
[0020]图3为磷脂膜中胆固醇分离示意图，图中1为未处理的基底，2为表面组装疏水基团并经部分氧化处理的基底；
[0021]图4为接触角对比图，图中1为实施例二中表面组装疏水基团的基底，2为使用等离子清洗机部分氧化处理后的基底。
具体实施方式
[0022]以下实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本专利技术的范围。
[0023]具体实施方式一：本实施方式一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，具体是按以下步骤完成的：
[0024]一、玻璃基底表面疏水基团的修饰：
[0025]①
、将疏水剂和甲苯混合均匀，得到疏水剂甲苯溶液；
[0026]②
、将清洗干净的基底浸入到疏水剂甲苯溶液中组装4h～8h，取出后使用甲苯冲洗，再氮气吹干，得到表面组装疏水基团的基底，放入4℃冰箱保存备用；
[0027]二、基底上磷脂膜的铺展：
[0028]①
、将表面组装疏水基团的基底置于等离子清洗机中氧化处理，得到含有纳米级亲水和疏水结构的基底；
[0029]②
、首先将Tris缓冲液滴加到含有纳米级亲水和疏水结构的基底上，然后滴加磷脂囊泡溶液，磷脂囊泡下沉并与基底接触，破裂铺展在基底表面，最后使用Tris缓冲液冲洗掉剩余的磷脂囊泡，得到含有磷脂膜的基底；
[0030]③
、将含有磷脂膜的基底在室温下继续孵育5min～120min，得到分离胆固醇后的磷脂膜。
[0031]具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同点是：步骤一中所述的疏水剂为十八烷基三甲氧基硅烷或3
‑
氨丙基三乙氧基硅烷；步骤一中所述的疏水剂与甲苯的体积比为1:100。其它步骤与具体实施方式一相同。
[0032]具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤一
②
中所述的基底为载玻片，基底的清洗过程如下：将基底在异丙醇中超声清洗10min～15min，再使用去离子水超声清洗10min～15min，最后使用氮气吹干，得到清洗干净的基底；所述的超声清洗的功率为250W～300W。其它步骤与具体实施方式一或二相同。
[0033]具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤二
①
中所述的氧化处理的工艺条件如下：压力为0.2MPa，功率为300W，氧化处理的时间为1s～30s。
其它步骤与具体实施方式一至三相同。
[0034]具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤二
②
中所述的Tris缓冲液的体积与基底的表面积比(0.5mL～5mL):(3cm2～5cm2)；步骤二
②
中所述的磷脂囊泡溶液的体积与基底的表面积比(0.5μL～30μL):(3cm2～5cm2)。其它步骤与具体实施方式一至四相同。
[0035]具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤二
②
中所述的Tris缓冲液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，NaCl的浓度为150mmol/L，CaCl2的浓度为2mmol/L。其它步骤与具体实施方式一至五相同。
[0036]具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是：步骤二
②
中所述的磷脂囊泡溶液的制备方法具体是按以下步骤完成的：
[0037](1)、将磷脂溶解到氯仿中，得到浓度为0.5mg/mL～20mg/mL的磷脂溶液；
[0038](2)、将浓度为0.5mg/mL～20mg/mL的磷脂溶液均匀涂覆到洁净的ITO导电玻璃表面，再在温度为10℃～30℃下干燥2h～3h，得到表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃；
[0039](3)、将两块表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃和玻璃框架组装成密闭的反应装置，向反应装置中注入反应本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于该方法具体是按以下步骤完成的：一、玻璃基底表面疏水基团的修饰：
①
、将疏水剂和甲苯混合均匀，得到疏水剂甲苯溶液；
②
、将清洗干净的基底浸入到疏水剂甲苯溶液中组装4h～8h，取出后使用甲苯冲洗，再氮气吹干，得到表面组装疏水基团的基底，放入4℃冰箱保存备用；二、基底上磷脂膜的铺展：
①
、将表面组装疏水基团的基底置于等离子清洗机中氧化处理，得到含有纳米级亲水和疏水结构的基底；
②
、首先将Tris缓冲液滴加到含有纳米级亲水和疏水结构的基底上，然后滴加磷脂囊泡溶液，磷脂囊泡下沉并与基底接触，破裂铺展在基底表面，最后使用Tris缓冲液冲洗掉剩余的磷脂囊泡，得到含有磷脂膜的基底；
③
、将含有磷脂膜的基底在室温下继续孵育5min～120min，得到分离胆固醇后的磷脂膜。2.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤一中所述的疏水剂为十八烷基三甲氧基硅烷或3
‑
氨丙基三乙氧基硅烷；步骤一中所述的疏水剂与甲苯的体积比为1:100。3.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤一
②
中所述的基底为载玻片，基底的清洗过程如下：将基底在异丙醇中超声清洗10min～15min，再使用去离子水超声清洗10min～15min，最后使用氮气吹干，得到清洗干净的基底；所述的超声清洗的功率为250W～300W。4.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二
①
中所述的氧化处理的工艺条件如下：压力为0.2MPa，功率为300W，氧化处理的时间为1s～30s。5.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二
②
中所述的Tris缓冲液的体积与基底的表面积比(0.5m...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕洪梅，史国滨，陈泽钦，邱家钦，陈钱铃，
申请(专利权)人：广东石油化工学院，
类型：发明
国别省市：
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