复合稳定剂及含其的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种复合稳定剂及含其的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒，所述复合稳定剂由各物质按以下质量浓度组成：庆大霉素0.002g/L～1.0g/L、牛血清白蛋白(BSA)0.1g/L～10g/L、甘露醇10g/L～100g/L；在鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒中添加所述复合稳定剂，能有效延长鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒的保存时间，有利于该试剂盒在市场中的进一步推广。市场中的进一步推广。市场中的进一步推广。

【技术实现步骤摘要】
复合稳定剂及含其的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒


[0001]本专利技术属于临床检验生化分析
，特别是涉及一种复合稳定剂及含其的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒。

技术介绍

[0002]鸟嘌呤脱氨酶(GUA)主要定位于肝脏，在骨骼肌、心肌、胰腺、肺等几乎缺如，其肝脏特异性远大于谷丙转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，在急性肝炎早期诊断及鉴别诊断、输血后肝炎的预防等方面已经引起重视，尽管鸟嘌呤脱氨酶活性检测对肝病的诊断及预防具有重大意义，但到目前为止，仍没有令人满意的即稳定又灵敏的GUA全自动分析用试剂盒。
[0003]当前，常使用以下方法对GUA活性进行测定：1、Rousca&Norris.E.R；Arch.Biochem法，其利用鸟嘌呤与黄嘌呤的吸光度不同，测定鸟嘌呤的减少量，进而计算GUA的活性；2、测量尿酸法，该方法中样本内含的GUA作用于底物鸟嘌呤生成黄嘌呤，黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(XOD)的作用下生成尿酸和过氧化氢，尿酸在290nm处有吸收峰，通过检测尿酸的生成量计算GUA的活性；3、氨定量法，使用GUA作用于底物鸟嘌呤生成黄嘌呤和氨，利用谷氨酸脱氢酶法测定NADH的生成量进而计算GUA的活性；4、过氧化氢定量法，包括eintz Fr1tz、Reckel Sylvia.&.Kalden Joachim、R、Enzyme法和杉浦法，均通过测量过氧化氢的生成量来定量计算GUA的活性；5、
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C标记法，使用
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C标记的鸟嘌呤生成黄嘌呤，通过电泳分离，并用闪烁计数器测量其放射性，计算GUA的活性；然而上述方法1
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3中消光系数小、灵敏度低，而
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C标记法需使用特殊设备，不适用于临床，杉浦法同样存在反应时间长，内源性干扰大的问题。
[0004]在实现本专利技术过程中，专利技术人发现现有技术中至少存在以下问题：目前临床检查用的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒多以液体或冻干的形式供应，在测定过程中液体以原样使用，冻干产品溶解后使用，测定后剩余试剂在打开状态于2
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8℃的环境中保存，而GUA测定试剂盒测量值和灵敏度会随储存时间的推移而降低，GUA测定试剂盒在存储期间的稳定性不能令人满意，现有技术对冻干测定试剂盒具有稳定作用，但在液体测定试剂盒中未必有效，需开发更为有效的稳定方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术实施例的目的在于提供一种复合稳定剂及含其的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒，使用所述复合稳定剂能保护液态GUA测定试剂盒中的工具酶不失活，以此延长鸟嘌呤脱氨酶测定试剂的保存时间，有利于其在市场上进一步推广。
[0006]本专利技术实施例所采用的技术方案是，复合稳定剂，由各组分按以下质量浓度组成：庆大霉素0.002g/L～1.0g/L、牛血清白蛋白0.1g/L～10g/L、甘露醇10g/L～100g/L。
[0007]进一步的，由各组分按以下质量浓度组成：庆大霉素0.1g/L～0.5g/L、牛血清白蛋白1g/L～8g/L、甘露醇20g/L～80g/L。
[0008]进一步的，由各组分按以下质量浓度组成：庆大霉素0.2g/L～0.3g/L、牛血清白蛋
白2g/L～5g/L、甘露醇30g/L～50g/L。
[0009]鸟嘌呤脱氨酶测定试剂盒包含第一试剂、第二试剂和复合稳定剂，其中第一试剂组成为：0.1M Tris Buffer pH7.6，鸟嘌呤盐酸盐0.1M，尿酸酶40U/L，过氧化氢酶17KU/L，4
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氨基安替比林0.05mM；
[0010]第二试剂组成为：0.1M Tris Buffer pH6.5，黄嘌呤氧化酶(XOD)240U/L，过氧化物酶(POD)8KU/L，超氧化物歧化酶(SOD)24KU/L，TOOS 0.1M，叠氮钠3.2mM。
[0011]进一步的，所述第一试剂与第二试剂的体积比为4：1。
[0012]本专利技术实施例的有益效果是：复合稳定剂中包含的庆大霉素能够保护XOD的酶蛋白质结构，防止酶蛋白质表面构象发生变化，抑制XOD随时间推移产生的活性降低，延长鸟嘌呤脱氨酶活性测定试剂盒的稳定期；牛血清白蛋白和甘露醇同样具有保护酶、稳定酶的胶体作用，及保护酶蛋白的立体构象作用。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0014]图1是本专利技术实施例的效果图。
具体实施方式
[0015]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0016]GUA测定试剂盒由多种酶、色原物质、电子传递物质及缓冲物质组成的复合物，在该反应体系中，任一成分发生改变，特别是试剂中工具酶的活性发生变化，都会影响整个试剂盒的质量，使其劣化，本专利技术实施例使用工具酶再次添加法，在发生劣化的GUA测定试剂盒中分别加入不同的工具酶，逐项排除各项工具酶对检测结果的影响，具体实验结果如表1所示：
[0017]表1劣化GUA测定试剂盒加酶后的测定结果
[0018][0019]通过对GUA测定试剂盒的劣化机理进行研究，发现当加入所需浓度的XOD时，GUA测
定试剂盒的测定结果恢复初始值，即GUA测定试剂盒劣化的主要原因是检测试剂中的黄嘌呤氧化酶(XOD)的残存活性随保存时间的延长而降低，导致黄嘌呤被氧化成尿酸和过氧化氢的速度减慢，GUA测定试剂盒的灵敏度下降，不能准确检测鸟嘌呤脱氨酶的含量。
[0020]本专利技术通过在GUA测定试剂盒中添加复合稳定剂，以保持XOD的立体结构，使GUA测定试剂盒的长期稳定性良好，GUA测定试剂盒包含第一试剂、第二试剂和复合稳定剂，其中第一试剂组成为：0.1M Tris Buffer pH7.6，鸟嘌呤盐酸盐0.1M，尿酸酶40U/L，过氧化氢酶17KU/L，4
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氨基安替比林0.05mM，第二试剂组成为：0.1M Tris Buffer pH6.5，黄嘌呤氧化酶(XOD)240U/L，过氧化物酶(POD)8KU/L，超氧化物歧化酶(SOD)24KU/L，TOOS 0.1M，叠氮钠3.2mM，第一试剂与第二试剂的体积比为4：1。
[0021]在GUA测定试剂盒中XOD因为其特异性不高，对多种底物均可发生催化反应，因此其用量需控制在一定的低浓度范围内，这样既可以正常地与黄嘌呤进行氧化反应，又能尽量减少与鸟嘌呤等物质的非特异性反应，降低了测定误差。
[0022]所述复合稳定剂中各物质的质量浓度如下：庆大霉素0.002g/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.复合稳定剂，其特征在于，由各组分按以下质量浓度组成：庆大霉素0.002g/L～1.0g/L、牛血清白蛋白0.1g/L～10g/L、甘露醇10g/L～100g/L。2.根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，由各组分按以下质量浓度组成：庆大霉素0.1g/L～0.5g/L、牛血清白蛋白1g/L～8g/L、甘露醇20g/L～80g/L。3.根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，由各组分按以下质量浓度组成：庆大霉素0.2g/L～0.3g/L、牛血清白蛋白2g/L～5g/L、甘露醇30g/L～50g/L。4.含有如权利要求1～3任一项所述复合稳定剂的鸟嘌呤脱氨酶测定试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晶，王立强，孙强，高海迪，董丽，杨靖，
申请(专利权)人：吉林大学第一医院，
类型：发明
国别省市：