一种检测血清中5-羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测血清中5

【技术实现步骤摘要】
一种检测血清中5
‑
羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒


[0001]本专利技术属于血液检测
，具体涉及一种检测血清中5
‑
羟色胺(5
‑
Hydroxytryptamine，5
‑
HT)和褪黑素(Melatonin，MLT)浓度的试剂盒。

技术介绍

[0002]5‑
羟色胺和褪黑素作为人体内重要的吲哚胺类神经递质，具有调节生物节律、情绪、认知、清除自由基、促进炎信号传导等多种生物活性，同时还对骨代谢有着重要的影响。褪黑素是5
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羟色胺的代谢产物，可经由5
‑
羟色胺N
‑
乙酰转移酶和5
‑
羟色胺N
‑
乙酰甲氧基转移酶转化为褪黑素。近年来的国内外研究发现，5
‑
羟色胺参与了骨形成和骨重吸收的过程，包括中枢5
‑
羟色胺的促进成骨作用和外周5
‑
羟色胺对骨形成的负性调节作用；而褪黑素同样具有促进成骨细胞增殖和分化以及骨分化标记物表达作用，同时可以通过促进OPG分泌和消除破骨细胞自由基来抑制破骨细胞分化，5
‑
羟色胺和褪黑素在维持骨代谢动态平衡中都扮演着至关重要的角色，为骨质疏松等骨代谢疾病提供了新的靶点和方向。利用超高效液相色谱串联质谱技术同时检测血清中5
‑
羟色胺和褪黑素浓度，可以通过循环5
‑
羟色胺和褪黑素水平来反应人体骨量和骨结构的变化，用于评估老年人、绝经后妇女、2型糖尿患者等人群的骨质酥松情况，为临床诊治提供科学依据。
[0003]北京洛奇临床检验所股份有限公司于2016年申请的中国专利(申请号:201610220614.X)公开了一种“高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中褪黑素的方法及试剂盒”，其提供了一种利用高效液相色谱串联质谱法检测唾液中褪黑素的方法，该方法检测成分单一，基质简单，而且如果是只检测褪黑素，前处理条件非常简单，萃取液毒性也很大，氮吹时间较长，不适用于血清样品的前处理，即使采用该专利中的色谱条件和前处理方法也无法同时检测5
‑
羟色胺和褪黑素，对于血清中褪黑素的临床检测没有太大参考价值。另一篇专利(申请号:201910058794.X)公开了“一种采用HPLC同时检测酱油中多种生物胺含量的方法”，该专利里中待测物虽然含有5
‑
羟色胺，但待测样品不是生物样品，基质简单，而且前处理采用衍生法，非常复杂。
[0004]由于5
‑
羟色胺和褪黑素分别属于碱性和中性物质，一同检测比较困难，目前关于血清中5
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羟色胺和褪黑素的一同检测尚未见报道，Chau RM(Chau RM,Patel BA.Determination of serotonin,melatonin and metabolites in gastrointestinal tissue using high
‑
performance liquid chromatography with electrochemical detection.Biomed Chromatogr.2009,23(2):175
‑
81.)等人采用电化学分析技术一同检测胃肠道中的5
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羟色胺和褪黑素，灵敏度低(褪黑素的检测限为70ng/ml)，不能满足临床血样检测需求，分析时间长(30min)，也不利于临床应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种检测血清中5
‑
羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒。
[0006]本专利技术的另一目的是提供上述试剂盒在利用超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中5
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羟色胺和褪黑素的应用。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种检测血清中5
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羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒，
[0009]其中，5
‑
羟色胺和褪黑素对应的内标物分别为：5
‑
羟色胺
‑
d4(5
‑
HT
‑
d4)，褪黑素
‑
d4(MLT
‑
d4)；
[0010]所述的试剂盒包含如下试剂：
[0011](1)洗脱液：
[0012]洗脱液A：0.01％～0.2％甲酸
‑
1～5mM乙酸铵水溶液；洗脱液B：乙腈；
[0013](2)校准品溶液：
[0014]将包含有5
‑
羟色胺20μg/ml和褪黑素0.02μg/ml的混合标准储备溶液以空白血清基质配制成七个不同浓度点的校准品溶液，所述校准品溶液的七个浓度点为：
[0015]5‑
羟色胺的七个浓度点为依次为：1ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、250ng/ml、500ng/ml；
[0016]褪黑素的七个浓度点为依次为：0.001ng/ml、0.0025ng/ml、0.005ng/ml、0.025ng/ml、0.05ng/ml、0.25ng/ml、0.5ng/ml；
[0017](3)混合内标溶液：
[0018]包含有5
‑
羟色胺
‑
d4 10000ng/ml和褪黑素
‑
d4 40ng/ml的甲醇水溶液；
[0019](4)萃取液：
[0020]甲基叔丁基醚；
[0021](5)pH调节剂：
[0022]0.1M～0.5M碳酸钠溶液；
[0023](6)质控品：
[0024]含有5
‑
羟色胺和褪黑素的空白血清基质，分为低、中、高三个浓度，分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)，其中，
[0025]QC(L)为上述混合标准储备溶液以空白血清基质稀释至10000倍；
[0026]QC(M)为上述混合标准储备溶液以空白血清基质稀释至1000倍；
[0027]QC(H)为上述混合标准储备溶液以空白血清基质稀释至50倍。
[0028]在一种优选方案中，上述洗脱液A为0.1％～0.15％甲酸
‑
1～2.5mM乙酸铵水溶液，优选为0.1％甲酸
‑
2mM乙酸铵水溶液。
[0029]在一种优选方案中，pH调节剂为0.15M～0.25M碳酸钠溶液，优选为0.2M碳酸钠溶液。
[0030]对于本专利技术而言，对于本专利技术而言，空白血清基质为不含目标化合物的空白血清。在一种优选方案中，其中，空白血清基质为5％～15％甲醇水溶液，例如，空白血清基质为10％甲醇水溶液。
[0031]本专利技术提及的血清为人或动物的血清。
[0032]本专利技术提及的混合标准储备溶液按照如下方法制备：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血清中5
‑
羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒，所述5
‑
羟色胺和褪黑素对应的内标物分别为：5
‑
羟色胺
‑
d4和褪黑素
‑
d4；所述的试剂盒包含如下试剂：(1)洗脱液：洗脱液A：0.01％～0.2％甲酸
‑
1～5mM乙酸铵水溶液；洗脱液B：乙腈；(2)校准品溶液：将包含有5
‑
羟色胺20μg/ml和褪黑素0.02μg/ml的混合标准储备溶液以空白血清基质配制成七个不同浓度点的校准品溶液，所述校准品溶液的七个浓度点为：5
‑
羟色胺的七个浓度点为依次为：1ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、250ng/ml、500ng/ml；褪黑素的七个浓度点为依次为：0.001ng/ml、0.0025ng/ml、0.005ng/ml、0.025ng/ml、0.05ng/ml、0.25ng/ml、0.5ng/ml；(3)混合内标溶液：包含有5
‑
羟色胺
‑
d4 10000ng/ml和褪黑素
‑
d4 40ng/ml的甲醇水溶液；(4)萃取液：甲基叔丁基醚；(5)pH调节剂：0.1M～0.5M碳酸钠溶液；(6)质控品：含有5
‑
羟色胺和褪黑素的空白血清基质，分为低、中、高三个浓度，分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)，其中，QC(L)为上述混合标准储备溶液以空白血清基质稀释至10000倍；QC(M)为上述混合标准储备溶液以空白血清基质稀释至1000倍；QC(H)为上述混合标准储备溶液以空白血清基质稀释至50倍。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液A为0.1％～0.15％甲酸
‑
1.5～2.5mM乙酸铵水，优选为0.1％甲酸
‑
2mM乙酸铵水溶液。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述pH调节剂为0.15M～0.25M碳酸钠溶液，优选为0.2M碳酸钠溶液。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述空白血清基质为5％～15％甲醇水溶液，优选地，所述血清基质为10％甲醇水溶液；所述血清为人或动物血清。5.根据权利要求1、2、3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述混合标准储备溶液按照如下方法制备：将5
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羟色胺和褪黑素配制成如下浓度的标准品母液：5
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羟色胺1mg/ml，褪黑素0.01mg/ml；分别移取各标准品母液：5
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羟色胺20μl，褪黑素2μl；再加入至978...

【专利技术属性】
技术研发人员：成晓亮，尚红，韩晓旭，戴锦娜，李美娟，张伟，
申请(专利权)人：南京品生医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：