针对人补体蛋白C5的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人C5蛋白的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合人C5蛋白，阻断C5蛋白或其R885突变体裂解为C5a和C5b，可以用于治疗类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿、非典型溶血性尿毒症综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎或黄斑变性等疾病从而使患者受益。变性等疾病从而使患者受益。

【技术实现步骤摘要】
针对人补体蛋白C5的抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体药物领域，具体而言，本专利技术涉及针对人补体蛋白C5的抗体及其用于制备药物的用途。

技术介绍

[0002]已知补体系统由数十种蛋白(C1(C1q、C1r、C1s)、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9等)组成，是一个复杂的免疫监测系统，作为抵御其他生物感染的第一道宿主防御系统起作用，并且也将健康的宿主组织与细胞碎片、凋亡的和坏死的细胞区别开；此外，参与清除免疫复合体、调节适应性免疫反应、促进组织再生、血管生成、干细胞动员和中枢神经系统的发育。
[0003]补体蛋白C5是补体系统的主要成分，是先天免疫系统的关键部分。C5是190kDa的糖蛋白，包含两个由二硫键连接的多肽链α和β，其分子质量是115kDa和75kDa。在C5α-链N末端下游第74个氨基酸的精氨酸残基处被C5转化酶切割，会产生C5a和C5b补体裂解产物。其中，C5a是一种过敏毒素，可通过嗜碱性细胞和巨细胞释放的组胺刺激血管舒张；C5b可在细胞表面依次与补体蛋白C6、C7、C8、C9一同形成膜攻击复合体(MAC)的初始组分，MAC在靶细胞表面的积累最终导致细胞胶体渗透性裂解，促成促炎环境和细胞损失。
[0004]正常条件下，补体激活及其末端效应均处于严密调控之下，从而有效地维持机体的自稳功能，MAC的形成也会由于存在细胞表面组分和可溶性调节组分而不影响外围组织。但是，不受控制或不适当的补体激活或调节也会对自身组织细胞造成损伤，诱导急性和慢性疾病状态，例如类风湿性关节炎、缺血再灌注损伤、肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力以及黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性等。
[0005]针对补体蛋白C5，已有不同报道描述了抗C5的抗体，部分抗体已经被批准上市用于相关适应症的治疗，或处于临床开发中。例如，由亚力兄制药(Alexion)研发的单克隆抗体依库珠单抗(Eculizumab)，作为人源化的靶向补体蛋白C5的IgG2/4κ型单克隆抗体，能与补体蛋白C5高亲和性结合且有效抑制其裂解为C5a和C5b，阻止终端补体复合物C5b-9的生成，从而有效抑制补体末端介导的血管内溶血，已被批准用于治疗成人和儿童阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力和视神经脊髓炎谱系疾病。依库珠单抗的第二代Ravulizumab，则通过抗体工程实现了长效化：与C5结合为pH敏感性的，在细胞外中性条件下与C5结合，被内皮细胞内吞后，在酸性环境中与C5解离，避免了抗体被降解，从而再循环到细胞外继续结合C5，达到长效目的。
[0006]但是，虽然以上两种药物可以有效治疗大部分PNH、aHUS患者，但由于部分患者C5的多态性(Arg885突变型)，导致患者对二者不响应。因此，目前仍需要开发新型的针对补体蛋白C5的结合剂，例如抗体，特别是适用于在具有补体蛋白C5多态性的患者中作为替代或更佳的相关适应症治疗药物。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题是，通过杂交瘤筛选和人源化技术，获得特异性结合人C5蛋白的高亲和力抗体，其不但能够有效阻断C5裂解为C5a和C5b，而且对R885多态性人群有效。
[0008]针对上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种特异性结合人C5蛋白的抗体或其功能片段，并提供其用途。其中，本专利技术所述的抗体的片段涵盖抗体的各种功能性片段，例如其抗原结合部分，如Fab、F(ab
’
)2或scFv片段。
[0009]本专利技术的技术方案如下：
[0010]一方面，本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段在中性pH下结合C5蛋白的亲和力比在酸性pH下更高。并且，所述抗体或其抗原结合片段能够有效阻断C5蛋白或其R885突变体裂解为C5a和C5b。
[0011]根据序列结构域的组成，本专利技术提供的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区和轻链可变区重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，所述重链可变区和轻链可变区包含选自以下的重链CDR和轻链CDR的组合：
[0012](1)依次示于SEQ ID NO:47、48、49的HCDR1(DYHLD)、HCDR2(YIDPDNGGTFYNQKFKG)、HCDR3(WHDYAPSFAY)；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1(HASQNINVWLS)、LCDR2(KASNLHT)、LCDR3(QQGQSYPLT)；
[0013](2)依次示于SEQ ID NO:47、97、49的HCDR1(DYHLD)、HCDR2(YIDPDTGGTFYNQKFKG)、HCDR3(WHDYAPSFAY)；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1(HASQNINVWLS)、LCDR2(KASNLHT)、LCDR3(QQGQSYPLT)；
[0014](3)依次示于SEQ ID NO:65、66、67的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPENLSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHYNDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLQF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
[0015](4)依次示于SEQ ID NO:65、98、67的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPENPSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHYNDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLQF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
[0016](5)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPEQLSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHFTDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLQF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
[0017](6)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPEQLSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHFTDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、101、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLIF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
[0018](7)依次示于SEQ ID NO:71、72、73的HCDR1(DIYIH)、HCDR2(RIDPASGHTEYDPKFQA)、HCDR3(EDYEGIGY)；和，依次示于SEQ ID NO:74、75、76的LCDR1(RASQNVDTHVA)、LCDR2(LASYRYS)、LCDR3(QQYNTYP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合C5蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段在中性pH下结合C5蛋白的亲和力比在酸性pH下更高。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段能够有效阻断C5蛋白或其R885突变体裂解为C5a和C5b。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，所述重链可变区和轻链可变区包含选自以下的重链CDR和轻链CDR的组合：(1)依次示于SEQ ID NO:47、48、49的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(2)依次示于SEQ ID NO:47、97、49的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(3)依次示于SEQ ID NO:65、66、67的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(4)依次示于SEQ ID NO:65、98、67的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(5)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(6)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、101、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(7)依次示于SEQ ID NO:71、72、73的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:74、75、76的LCDR1、LCDR2、LCDR3；(8)依次示于SEQ ID NO:77、78、79的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:80、81、82的LCDR1、LCDR2、LCDR3。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段中，所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:1、23、25、26或27的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:2或24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者，所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:9、28、30、32或33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:10、29、31或34的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:11、35或37的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:12、36或38的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者，所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:13、39或41的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:14、40或42的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段中：(1)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸
序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；(2)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；(3)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；(4)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；(5)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；(6)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；(7)重链可变区...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪，徐晓红，高攀，陶春艳，邓小芳，吴建，李祥烽，毕建军，王骊淳，任红媛，林鉴，
申请(专利权)人：上海普铭生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：