一种鸡EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法，本方法在构建pET

【技术实现步骤摘要】
一种鸡EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法


[0001]本专利技术涉及生物技术和基因工程
，具体涉及一种鸡 EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法。

技术介绍

[0002]在我国养鸡业飞速发展的同时，也仍然存在一些问题，比如禽产 品质量仍有待提高，疾病控制力度仍有待加强、饲养管理环境仍有待 完善；在这之中，如何有效的控制疾病仍然是养殖业的首要解决问题， 虽然我们已经在免疫程序、疫苗生产和其他一些疾病预防方面取得了 突出的研究进展，但疾病带来的危害仍不容忽视，疾病的治疗依然刻 不容缓；随着科学研究的发展，一些传染性疾病和普通疾病相继得到 了控制，因此，作为严重危害养鸡业的重要疾病之一—肿瘤性疾病， 显得越发重要；由于肿瘤的发病机制在基因水平上得到了阐明，肿瘤 的基因治疗方法得到了迅速发展；通过对肿瘤性疾病的基因治疗方法， 可以进一步了解肿瘤性疾病，我们也能够更好的控制肿瘤性疾病的发 生、发展以及传播，促进养禽业的健康发展；
[0003]EZH2(enhancer of zeste homolog 2)是PRC2的成分，又可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸡EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法，其特征在于：包括步骤S1.样品的制备与处理收集PET
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32a
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EZH2和PET
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32a菌液，超声破碎后分别取其上清和沉淀，即为蛋白样品；S2.SDS
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PAGE凝胶电泳观察配制凝胶，对经步骤S1处理得到的样品进行SDS
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PAGE凝胶电泳观察，若存在于上清则为分泌性表达；反之则为包涵体形式表达；S3.EZH2蛋白原核表达条件的优化；S4.样品的纯化在EZH2原核表达载体的最优表达条件下对经步骤S3表达的样品使用His标签蛋白纯化试剂盒进行纯化，得到条带在90KD的EZH2的单一蛋白条带。2.根据权利要求1所述的一种鸡EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法，其特征在于：步骤S1所述的样品的制备与处理过程包括：S101.挑取PET
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32a
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EZH2和PET
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32a单菌落，接种到4ml LB+A液体培养基，过夜培养；S102.按照1:100的比例取培养过夜的菌液，接种到4ml的2YT+A液体培养基，恒温震荡培养4h；S103.加IPTG诱导剂，29℃，180r/min的条件下继续培养7h；S104.收集菌液，PBS洗两遍，然后加入200ulPBS重悬；冰水浴中进行超声波破碎，离心，分别收集上清和沉淀，即为蛋白样品。3.根据权利要求1所述的一种鸡EZH2蛋白的原核表达与纯化方法的研究方法，其特征在于：步骤S2所述的SDS
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PAGE凝胶电泳观察的过程包括：S201.首先配制12％分离胶，凝固后配制5％浓缩胶；S202.蛋白样品加上样液煮沸10min，冷却后进行点样；S203.80V跑浓缩胶、120V跑分离胶；S204.电泳结束后取出凝胶，加染色液于脱色摇床上...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁川，朱文文，张贺伟，程相朝，田文静，宋敏杰，王聪慧，
申请(专利权)人：洛阳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：