一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物技术领域，更具体而言，涉及一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用，所述的烟草属特异性分子标记编号为Ntsp027和Ntsp151，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。所述的应用为利用上述烟草属特异性分子标记对涉案制烟原料基因组DNA进行PCR扩增，检测是否存在特异性的PCR扩增产物核苷酸序列，据此，精确判断该涉案制烟原料中是否有烟草材料存在。本发明专利技术所述的一种烟草属特异性分子标记实现了烟与非烟的快速、有效鉴别检测，提高了涉案制烟原料鉴别检测工作的科学性、准确性和权威性，降低了司法风险，为烟草行业专卖工作中的打假缉私提供强有力的司法证据。打假缉私提供强有力的司法证据。打假缉私提供强有力的司法证据。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物
，更具体而言，涉及一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]烟草是茄科烟草属中含有特殊生物碱
‑
烟碱(尼古丁)的草本经济作物，同时也是烟草工业的制烟原料(烟叶)基础。在国内随着中式卷烟的深入发展，制烟原料的基础性地位日益突显，其发展虽有专卖法的保驾护航，但在巨额利益的驱使下，大量涉及制烟原料的打假缉私案件(即，涉案原料中是否有烟草材料检出)仍层出不穷，此既制约着烟草行业的健康、持续发展，又对现行的涉案制烟原料鉴别检验 (前罚没烟检验)工作提出新挑战。
[0003]目前，在分子水平上对烟草资源(品种)鉴别检测的研究报道较多，如利用RFLP、RAPD、SSR、ISSR、DArT、SNP等标记或上述几种分子标记的组合对烟草资源(品种)开展遗传多样性分析、指纹图谱构建等研究工作。此外，在已知待测样品属于烟草材料条件下，利用 SSR，SCAR和RAPD标记对初烤烟叶进行品种的快速鉴别研究也有少量报道(孙九喆，杨金初，苏东嬴，王二彬，王君婷，张顺峰，李萌，马林，基于SSR标记的初烤烟叶品种快速鉴别，烟草科技，2019，52 (3)：26
‑
32；Jiuzhe Sun，Junting Wang，Dongying Su，Jinchu Yang，Erbin Wang，Shixi Wu，Meng Li，Lin Ma，Discrimination of tobacco cultivarsusing SCAR and RAPD markers，Czech Journal of Genetics and PlantBreeding，2020，56(4)：170
‑
173)。然而，在分子水平上针对涉案制烟原料鉴别检测方面的研究在国外尚无报道。国内烟草行业针对涉案制烟原料的鉴别检验工作主要采用感观检验法和化学检验法，但该两种方法均存在较明显的缺陷：感观检验法主要依赖检验人员对涉案制烟原料的感观感受和检验经验，极易受到检验人员主观感受和经验影响，存在较高比例的误判可能性；化学检验法的主要原理是通过测定待测涉案制烟原料是否含有烟碱进而判定样品是否为烟草专卖品，但烟碱并非烟草所独有，许多非烟草(尤其是茄科)植物也可检出烟碱成分，因此，依据检测待测物中烟碱和N
‑
亚硝胺含量的化学检验法进行鉴别检测涉案烟草制品存在较高的误判风险。随着基因组测序技术和生物信息学的发展及大量植物(尤其是茄科)基因组数据的获得，为利用烟草属特异的分子标记开展涉案制烟原料鉴定检验工作奠定了坚实的理论和技术基础。因此，研究开发一种能够快速简便的鉴别烟与非烟的方法，以提高涉案制烟原料鉴别检测工作的科学性、准确性和权威性非常必要。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术提供一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用，以解决目前烟草行业的打假缉私工作中对涉案制烟原料采用感观检验法和化学检验法存在的显著缺陷和不足的问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术的一个方面的目的在于，提供一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标
记，所述的烟草属特异性分子标记编号为Ntsp027和 Ntsp151，其PCR扩增产物核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示。
[0007]进一步地，所述分子标记Ntsp027所对应的引物序列为：
[0008]Ntsp027F：5
’‑
GTTGTTCGCTTCCCTGATGT
‑3’
；
[0009]Ntsp027R：5
’‑
AACCAAAGCAAGCGAAATGT
‑3’
。
[0010]进一步地，所述分子标记Ntsp151所对应的引物序列为：
[0011]Ntsp151F：5
’‑
ATTTGGCTTTGGCTATGGAA
‑3’
；
[0012]Ntsp151R：5
’‑
CGGAGACAAGAGACCCAAGT
‑3’
。
[0013]本专利技术的另一个方面的目的在于，提供一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记的应用，包括以下步骤：
[0014]S1、提取待测样品基因组DNA；
[0015]S2、以步骤S1提取的DNA为模板，采用引物Ntsp027或引物 Ntsp151，进行PCR扩增反应；
[0016]S3、通过电泳检测步骤S2中PCR扩增结果：
[0017]利用引物Ntsp027对参试材料进行PCR扩增时，若PCR扩增产物中含有303bp的PCR扩增核苷酸片段时，则表明待测样品为烟草样品；
[0018]利用引物Ntsp151对参试材料进行PCR扩增时，若PCR扩增产物中含有300bp的PCR扩增核苷酸片段时，则表明待测样品为烟草样品；
[0019]若PCR扩增产物中不含有303bp和300bp的PCR扩增核苷酸片段，则表明待测样品为非烟草样品。
[0020]进一步地，步骤S1中所述DNA的提取采用CTAB法或植物组织 DNA提取试剂盒提取。
[0021]进一步地，步骤S2中所述PCR扩增反应中，引物Ntsp027或引物Ntsp151的退火温度均为60℃。
[0022]进一步地，所述步骤S3中所述303bp的PCR扩增核苷酸片段为序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述300bp的PCR扩增核苷酸片段为序列表SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
[0023]本专利技术具有如下优点：
[0024]本专利技术提供了一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用，在分子水平上对涉案制烟原料是否为烟草产品进行快速鉴别和检测；本专利技术提供的分子标记、引物及方法实现了烟与非烟的快速、有效鉴别检测，且方法简单易行、操作性强，为烟草行业打假缉私工作提供一种客观、高效、简易的分子水平检验技术，进而提升涉案制烟原料鉴别检测的科学性、准确性和权威性，降低了司法风险，为行业专卖打假打私提供强有力的司法证据。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其他的实施附图。
[0026]本说明书所绘示的内容，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。
[0027]图1为实施例3中引物N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记，其特征在于：所述的烟草属特异性分子标记编号为Ntsp027和Ntsp151，其PCR扩增产物核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。2.根据权利要求1所述的一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记，其特征在于：所述分子标记Ntsp027所对应的引物序列为：Ntsp027F：5
’‑
GTTGTTCGCTTCCCTGATGT
‑3’
；Ntsp027R：5
’‑
AACCAAAGCAAGCGAAATGT
‑3’
。3.根据权利要求1所述的一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记，其特征在于：所述分子标记Ntsp151所对应的引物序列为：Ntsp151F：5
’‑
ATTTGGCTTTGGCTATGGAA
‑3’
；Ntsp151R：5
’‑
CGGAGACAAGAGACCCAAGT
‑3’
。4.一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记的应用，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取待测样品基因组DNA；S2、以步骤S1提取的DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：童治军，张轲，肖炳光，方敦煌，张晓伟，隋学艺，陈学军，孙浩巍，龙杰，张冀武，陈丹，李海燕，王春琼，蔡洁云，顾健龙，魏佳，彭丽娟，王潞，韩小渊，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：