本发明专利技术提供一种基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测试剂盒。该试剂盒至少含有COVID-19 1ab基因检测引物和探针(SEQ ID NO:1-3)、COVID-19N基因检测引物和探针(SEQ ID NO:4-6)。此外还可包括裂解液、Tth酶体系、RNA酶抑制剂、标准阳性模板等。本试剂盒可实现即时检测，无需RNA提纯，可将样本直接加入试剂中进行RT-PCR反应，大大降低了操作者感染病毒的风险；特别适合RNA含量较低样本的快速、准确检测，合成的带蛋白壳的RNA假病毒检测准确率达99.9％以上，检测灵敏度高，100分钟内可得检测结果，解决了传统RNA核酸病毒检测耗时长的问题。问题。
【技术实现步骤摘要】
基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测试剂盒
[0001]本专利技术涉及核酸检测
，具体地说，涉及一种基于POCT模式的新型冠状 病毒COVID-19快速检测试剂盒。
技术介绍
[0002]新型冠状病毒(COVID-19)属于β属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆 形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与SARSr-CoV和MERSr-CoV有明显的 区别。研究显示，新型冠状病毒与蝙蝠SARS样冠状病毒同源性达85％以上。体外分 离培养时，COVID-19 96小时左右即可在人呼吸道上皮细胞内发现，而在Vero E6和 Huh-7细胞系中分离培养需约6天。
[0003]新型冠状病毒性肺炎的症状，在早期以干咳、发热和乏力为主，少数的患者会 出现有流鼻涕、打喷嚏或者是出现腹泻的现象。这种疾病病情发展非常快，一般在 一周左右如果没有得到控制的话，会出现有呼吸困难、呼吸窘迫综合征这一类的现 象，而且还会出现体温持续性升高，甚至达到39℃以上，表现出有头痛头晕，或者 是伴随有恶心呕吐、喉咙疼痛。在疾病的发展当中容易合并一些并发症，出现呼吸 窘迫综合征，出现难以纠正的代谢性酸中毒、出现凝血功能障碍这一类的情况，会 严重影响到生命。
[0004]新型冠状病毒在人与人之间的传播途径广，包括直接传播(咳嗽，打喷嚏和液 滴吸入传播)和接触传播(与口腔，鼻和眼粘膜接触)。COVID-19也可通过唾液直 接或间接传播。值得注意的是，2020年3月20日，Nature发表了题为《Covert coronavirusinfections could be seeding new outbreaks》的报告，指出30％-60％的新冠感染者无症 状或者症状轻微，但他们传播病毒的能力并不低于重症患者——这些隐性感染者可 能会引发新一轮的疫情大爆发。该病毒传播途径广，传播速度快，潜伏期长。因此 引起了全世界的高度重视。到目前为止，还没有特异性的药物和疫苗对这种疾病进 行治疗和预防。
[0005]目前，诊断新冠肺炎的手段主要依靠核酸和抗体检测作为临床确诊的主要依据。 新冠病毒核酸检测针对的位点主要包含病毒基因组中3段保守基因序列，即开放读码 框1ab(Open reading frame 1ab，ORF1ab)、核壳蛋白(Nucleocapsid protein，N)基 因以及包膜蛋白(Envelop，E)基因作为检测靶标。新冠病毒抗体检测针对的免疫球蛋 白包括IgM和IgG抗体。
[0006]传统的RNA病毒核酸检测样本需经RNA提纯步骤，这大大增加了操作者感染病 毒的风险。另外，传统的RNA病毒核酸检测样本需经RNA提纯、反转录和PCR多步 进行，耗时较长一般需要6-8小时才能出结果，临床使用不理想。因此这些常规的RNA 病毒核酸检测技术难以满足目前对新型冠状病毒COVID-19检测快速、准确的要求。
技术实现思路
[0007]本专利技术的目的是提供一种基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测试 剂盒。
[0008]本专利技术的另一目的是提供一种基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检 测方法。
[0009]为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一种新型冠状病毒COVID-19检测 引物，包括COVID-19 1ab基因检测引物和COVID-19N基因检测引物；COVID-19 1ab 基因检测引物包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO:2所示的下游 引物，COVID-19N基因检测引物包括如SEQ ID NO:4所示的上游引物和序列如SEQID NO:5所示的下游引物。
[0010]第二方面，本专利技术提供与上述引物配套使用的探针，与COVID-19 1ab基因检测 引物配套使用的探针序列如SEQ ID NO:3所示，与COVID-19N基因检测引物配套使 用的探针序列如SEQ ID NO:6所示，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6所示探针的5
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端分别 带有相同的荧光基团，3
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端具有淬灭基团。
[0011]第三方面，本专利技术提供含有上述引物和/或探针的检测试剂或试剂盒。
[0012]第四方面，本专利技术提供一种基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测 试剂盒，包括SEQ ID NO:1-3所示引物和探针以及包括SEQ ID NO:4-6所示引物和探 针。该试剂盒无需核酸提取操作，可直接将粗样本加入反应液进行RT-PCR检测。所 述试剂盒还包含内参基因GAPDH检测引物和探针，其中，GAPDH检测引物包括序列 如SEQ ID NO:7所示的上游引物和序列如SEQ ID NO:8所示的下游引物；GAPDH检测 探针的序列如SEQ ID NO:9所示，探针的5
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端具有荧光基团，3
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端具有淬灭基团，且 该荧光基团不同于SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6探针中使用的荧光基团。
[0013]优选地，SEQ ID NO:3所示探针的5
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端荧光基团为FAM，SEQ ID NO:3所示探针 的3
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端淬灭基团为BHQ1。
[0014]SEQ ID NO:6所示探针的5
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端荧光基团为FAM，SEQ ID NO:6所示探针的3
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端淬灭 基团为BHQ1。
[0015]SEQ ID NO:9所示探针的5
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端荧光基团为Texas Red，SEQ ID NO:9所示探针的3
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端淬灭基团为BHQ2。
[0016]所述试剂盒还包括裂解液、Tth酶体系、RNA酶抑制剂、标准阳性模板等中的至 少一种。
[0017]其中，裂解液的成分为：十二烷基硫酸钠0.005％w/v、聚乙二醇辛基苯基醚0.01％ w/v和Tris-HCl 30mM。
[0018]可选地，所述RNA酶抑制剂购自珠海宝锐生物科技有限公司，商品编号为AS05。
[0019]本专利技术中使用的Tth酶体系如下：5
×
Superstart Tth Premix-UNG(Probe qRT-PCR)， 购自珠海宝锐生物科技有限公司。成分包括：RT-PCR buffer、dNTPs、MgCl2、UNG 酶、Mn
2+
、稳定剂、双功能活性的Tth酶。
[0020]第五方面，本专利技术提供用于检测新型冠状病毒COVID-19的qPCR反应体系，包括 用于检测COVID-19 1ab基因的qPCR反应体系以及用于检测COVID-19N基因的 qPCR反应体系。
[0021]用于检测COVID-19 1ab基因的qPCR反应体系包含：1.2
×
Tth酶体系，0.3U/μlRNA酶抑制剂，SEQ ID NO:1所示的上游引物、SEQ ID NO:2所示的下游引物各 0本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.新型冠状病毒COVID-19检测引物，其特征在于，包括COVID-19 1ab基因检测引物和COVID-19N基因检测引物；COVID-19 1ab基因检测引物包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO:2所示的下游引物，COVID-19N基因检测引物包括如SEQ ID NO:4所示的上游引物和序列如SEQ ID NO:5所示的下游引物。2.与权利要求1所述引物配套使用的探针，其特征在于，与COVID-19 1ab基因检测引物配套使用的探针序列如SEQ ID NO:3所示，与COVID-19N基因检测引物配套使用的探针序列如SEQ ID NO:6所示，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6所示探针的5
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端分别带有相同的荧光基团，3
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端具有淬灭基团。3.含有权利要求1所述引物和/或权利要求2所述探针的检测试剂或试剂盒。4.基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物和权利要求2所述探针。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含内参基因GAPDH检测引物和探针，其中，GAPDH检测引物包括序列如SEQ ID NO:7所示的上游引物和序列如SEQ ID NO:8所示的下游引物；GAPDH检测探针的序列如SEQ ID NO:9所示，探针的5
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端具有荧光基团，3
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端具有淬灭基团，且该荧光基团不同于权利要求2所述探针中使用的荧光基团。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，SEQ ID NO:3所示探针的5
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端荧光基团为FAM，SEQ ID NO:3所示探针的3
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端淬灭基团为BHQ1；和/或SEQ ID NO:6所示探针的5
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端荧光基团为FAM，SEQ ID NO:6所示探针的3
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端淬灭基团为BHQ1；和/或SEQ ID NO:9所示探针的5
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端荧光基团为Texas Red，SEQ ID NO:9所示探针的3
′
端淬灭基团为BHQ2。7.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括裂解液、Tth酶体系、RNA酶抑制剂、标准阳性模板中的至少...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟霞，陈耀凯，张国军，王安心，谢雪微，熊伟，
申请(专利权)人：重庆市公共卫生医疗救治中心重庆京因生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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