靶向DLL3的嵌合抗原受体和结合剂制造技术

本文提供了DLL3结合剂和包含与DLL3特异性结合的DLL3结合分子的嵌合抗原受体(CAR)；以及包含这些DLL3特异性CAR的免疫细胞，例如CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向DLL3的嵌合抗原受体和结合剂
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年3月1日提交的美国临时申请号62/812,585以及2020年2月4日提交的美国临时申请号62/969,976的优先权权益，所有这些的内容特此通过引用整体并入本文。


[0003]本公开涉及包含与DLL3结合的抗原结合分子的DLL3结合剂和嵌合抗原受体(CAR)；编码其的多核苷酸；以及使用其治疗患者的癌症的方法。
[0004]序列表
[0005]本申请正在通过EFS
‑
Web电子提交，并且包括以.txt格式电子提交的序列表。.txt档包含序列表，标题为“AT
‑
019_03US_SL”，创建于2020年2月4日，大小为1,026,798字节。该.txt档中包含的序列表是说明书的一部分，通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0006]小细胞肺癌(SCLC)是肺癌的一种侵袭性形式，其预后较差且治疗选择有限。SCLC占所有新诊断的肺癌的约10
‑
15％。美国癌症协会估计，2018年将诊断出约234,000例肺癌新病例。SCLC的5年相对存活率估计为31％(对于I期)，19％(对于II期)，8％(对于III期)和2％(对于IV期)。几十年来，SCLC的存活率一直很低，这在很大程度上是由于缺乏对抗这种形式的肺癌的新疗法。癌症的常规治疗性治疗方法包括化疗和放疗。患者典型地对包括依托泊苷(etoposide)和顺铂(cisplatin)在内的当前的一线疗法反应良好，但总是会迅速复发化学耐药性疾病。复发性难治疾病的预后极差，并且疾病进展迅速，中位生存期短，小于六个月。因此，仍然非常需要开发针对增生性病症的更有靶向性且更有效的疗法。
[0007]经遗传修饰以识别恶性肿瘤相关抗原的免疫细胞的过继转移显示出有希望作为治疗癌症的新方法(参见例如Brenner等,《免疫学新见(Current Opinion in Immunology)》,22(2):251
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257(2010)；Rosenberg等,《自然评论：癌症(Nature Reviews Cancer)》,8(4):299
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308(2008))。可以对免疫细胞进行遗传修饰，以表达嵌合抗原受体(CAR)，即包含DLL3抗原识别部分和T细胞激活结构域的融合蛋白(参见例如Eshhar等，《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,90(2):720
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724(1993)；和Sadelain等，《免疫学新见(Curr.Opin.Immunol)》,21(2):215
‑
223(2009))。含有CAR的免疫细胞，例如CAR
‑
T细胞(CAR
‑
T)，被工程化以赋予其抗原特异性，同时保留或增强其识别和杀死靶细胞的能力。
[0008]DLL3是非规范的Notch配体，其以细胞自主方式起作用以抑制Notch信号传导，从而阻断细胞与细胞的相互作用以及Notch在靶细胞中的内化。δ样配体3(DLL3)是SCLC肿瘤标志物，并且已发现其与癌症干细胞有关。涉及DLL3的其它适应症包括黑色素瘤、低级别神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、甲状腺髓样癌、类癌、胰腺中的弥散性神经内分泌肿瘤、膀胱和前列腺癌、睾丸癌和具有神经内分泌特征的肺腺癌。需要用于癌症且特别是涉及DLL3异常表
达的恶性肿瘤的治疗。本文提供了解决这一需求的方法和组合物。

技术实现思路

[0009]本文提供了包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)；以及包含这些DLL3特异性CAR的免疫细胞，例如CAR
‑
T细胞。还提供了制造和使用这些DLL3特异性CAR以及包含这些DLL3特异性CAR的免疫细胞的方法。本文所述的靶向DLL
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3的CAR T细胞表现出良好的转导效率、体外表型以及强效的体外和体内抗肿瘤活性。
[0010]在一个方面，本公开提供一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含以下中的至少一种：(a)可变重链CDR1，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO 1、10、19、28、37、46、55、64、73、82、91、100、109、118、127、136、145、154、163、172、181、190、199、208、217、226、235、244、253、262、271、280、289、298、307、316、325、334、343、352、361、370、379、388、397、406、415、424、433、442、451和460；(b)可变重链CDR2，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、11、20、38、47、56、65、74、83、92、101、110、119、128、137、146、155、164、173、182、191、200、209、218、227、236、245、254、263、272、281、290、299、308、317、326、335、344、353、362、371、380、389、398、407、416、425、434、443、452、461和695；(c)可变重链CDR3，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO 3、12、21、30、39、48、57、66、75、84、93、102、111、120、129、138、147、156、165、174、183、192、201、210、219、228、237、246、255、264、273、282、291、300、309、318、327、336、345、354、363、372、381、390、399、408、417、426、435、444、453和462；(d)可变轻链CDR1，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4、13、22、31、40、49、58、67、85、94、103、112、121、130、139、148、157、166、175、184、193、202、211、220、229、238、247、256、265、274、283、292、301、310、319、328、337、346、355、364、373、382、391、400、409、418、427、436、445、454、463和696；(e)可变轻链CDR2，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5、14、23、32、41、50、59、68、77、86、95、104、113、122、131、140、149、158、167、176、185、194、203、212、221、230、239、248、257、266、275、284、293、302、311、320、329、338、347、356、365、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含以下中的至少一种：(a)可变重链CDR1，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO 1、10、19、28、37、46、55、64、73、82、91、100、109、118、127、136、145、154、163、172、181、190、199、208、217、226、235、244、253、262、271、280、289、298、307、316、325、334、343、352、361、370、379、388、397、406、415、424、433、442、451和460；(b)可变重链CDR2，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ NO:2、11、20、38、47、56、65、74、83、92、101、110、119、128、137、146、155、164、173、182、191、200、209、218、227、236、245、254、263、272、281、290、299、308、317、326、335、344、353、362、371、380、389、398、407、416、425、434、443、452、461和695；(c)可变重链CDR3，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO 3、12、21、30、39、48、57、66、75、84、93、102、111、120、129、138、147、156、165、174、183、192、201、210、219、228、237、246、255、264、273、282、291、300、309、318、327、336、345、354、363、372、381、390、399、408、417、426、435、444、453和462；(d)可变轻链CDR1，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4、13、22、31、40、49、58、67、85、94、103、112、121、130、139、148、157、166、175、184、193、202、211、220、229、238、247、256、265、274、283、292、301、310、319、328、337、346、355、364、373、382、391、400、409、418、427、436、445、454、463和696；(e)可变轻链CDR2，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5、14、23、32、41、50、59、68、77、86、95、104、113、122、131、140、149、158、167、176、185、194、203、212、221、230、239、248、257、266、275、284、293、302、311、320、329、338、347、356、365、374、383、392、401、410、419、428、437、446、455和464；以及(f)可变轻链CDR3，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、15、24、33、42、51、60、69、78、87、96、105、114、123、132、141、150、159、168、177、186、195、204、213、222、231、240、249、258、267、276、285、294、303、312、321、330、339、348、357、366、375、384、393、402、411、420、429、438、447、456和465。2.一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含：(a)可变重链CDR1，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、10、19、28、37、46、55、64、73、82、91、100、109、118、127、136、145、154、163、172、181、190、199、208、217、226、235、244、253、262、271、280、289、298、307、316、325、334、343、352、361、370、379、388、397、406、415、424、433、442、451和460；(b)可变重链CDR2，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ NO:2、11、20、38、47、56、65、74、83、92、101、110、119、128、137、146、155、164、173、182、191、200、209、218、227、236、245、254、263、272、281、290、299、308、317、326、335、344、353、362、371、380、389、398、407、416、425、434、443、452、461和695；以及(c)可变重链CDR3，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:3、12、21、30、39、48、57、66、75、84、93、102、111、120、129、138、147、156、165、174、183、192、201、210、
219、228、237、246、255、264、273、282、291、300、309、318、327、336、345、354、363、372、381、390、399、408、417、426、435、444、453和462。3.一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含：(a)可变轻链CDR1，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4、13、22、31、40、49、58、67、85、94、103、112、121、130、139、148、157、166、175、184、193、202、211、220、229、238、247、256、265、274、283、292、301、310、319、328、337、346、355、364、373、382、391、400、409、418、427、436、445、454、463和696；(b)可变轻链CDR2，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ NO:5、14、23、32、41、50、59、68、77、86、95、104、113、122、131、140、149、158、167、176、185、194、203、212、221、230、239、248、257、266、275、284、293、302、311、320、329、338、347、356、365、374、383、392、401、410、419、428、437、446、455和464；以及(c)可变轻链CDR3，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、15、24、33、42、51、60、69、78、87、96、105、114、123、132、141、150、159、168、177、186、195、204、213、222、231、240、249、258、267、276、285、294、303、312、321、330、339、348、357、366、375、384、393、402、411、420、429、438、447、456和465。4.一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含以下中的至少一种：(a)可变重链，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、16、25、34、43、52、61、70、79、88、97、106、115、124、133、142、151、160、169、178、187、196、205、214、223、232、241、250、259、268、277、286、295、304、313、322、331、340、349、358、367、376、385、394、403、412、421、430、439、448、457、466；以及(b)可变轻链，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ NO:8、17、26、35、44、53、62、71、80、89、98、107、116、125、134、143、152、161、170、179、188、197、206、215、224、233、242、251、260、269、278、287、296、305、314、323、332、341、350、359、368、377、386、395、404、413、422、431、440、449、458和467，其中所述可变重链和所述可变轻链通过至少一个接头连接。5.一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含：(a)可变重链，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、16、25、34、43、52、61、70、79、88、97、106、115、124、133、142、151、160、169、178、187、196、205、214、223、232、241、250、259、268、277、286、295、304、313、322、331、340、349、358、367、376、385、394、403、412、421、430、439、448、457和466；以及(b)可变轻链，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ NO:8、17、26、35、44、53、62、71、80、89、98、107、116、125、134、143、152、161、170、179、188、197、206、215、224、233、242、251、260、269、278、287、296、305、314、323、332、341、350、359、368、377、386、395、404、413、422、431、440、449、458和467，其中所述可变重链和所述可变轻链通过至少一个接头连接。
6.一种嵌合抗原受体，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞外结构域包含与DLL3特异性结合的DLL3抗原结合结构域，并且其中所述抗原结合结构域包含选自由表1d中列出的那些scFv组成的组的序列。7.一种与DLL3特异性结合的嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含与SEQ ID NO:482至533和SEQ ID NO:632
‑
683中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。8.根据权利要求1至7中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内结构域包含至少一个共刺激结构域。9.根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激结构域是以下物质的信号传导区：CD28、OX
‑
40、4
‑
1BB/CD137、CD2、C...

【专利技术属性】
技术研发人员：章奕，T，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：