具有透皮增强作用的传递体-外泌体膜融合制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种具有透皮增强作用的传递体

【技术实现步骤摘要】
具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]皮肤是人体最大的器官，其中角质层负责抵御外来侵害，也因此阻挡了许多护肤功效成分的吸收。真皮层成纤维细胞胶原蛋白合成减少、流失增加会导致皮肤出现松弛、细纹等衰老现象，基底层黑素细胞合成的黑色素增加导致暗黄、生斑等问题，但是市面上的护肤品大多成分单一，且以化学成分为主，由于皮肤角质层的限制而只停留在皮肤表层，难以渗透进入皮肤深层针对特定细胞发挥作用，造成浪费，影响使用者的实际使用效果。
[0003]就护肤品而言，其中的活性成分若只是单独存在，易受pH、氧化、与其他成分的相互作用的影响导致自身效用降低。CN202010292807.2提供了一种具有美白祛斑功能的精华液，其中含有多种中西结合的美白组合物：密蒙花提取物(0.1
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10％)、黄精提取物(0.1
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10％)、辛夷提取物(0.1
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10％)、牡丹皮提取物(0.1
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10％)、根皮素(0.05
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2％)、4
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n
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丁基间苯二酚(0.01
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0.3％)、维生素C或其衍生物(0.05
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2％)、烟酰胺(0.05
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2％)、维生素E(0.03
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1％)等，另外含有5
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20％的保湿剂、1
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5％的皮肤调理剂、0.1
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5％的增溶剂、0.1
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1％的增稠剂、0.02
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2％的防腐剂，但是载体优势不够明显，难以保证多重美白成分的稳定性及有效性。CN104083318A提供了一种美白护肤品及其制备方法，其中美白成分仅占0.5
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1.5％，且存在渗透效果有限等问题，其美白效果还有较大提升空间。
[0004]新兴医美手段如微针、水光针等物理方法可以在一定程度上将有效成分递送至较深层皮肤，但会造成出血、刺激等皮肤损伤，使用后修复周期长，注意事项多，不宜长期、反复使用，给爱美人士造成诸多不便。脐带来源的间充质干细胞外泌体可以通过多种细胞因子恢复皮肤成纤维细胞的活性、促进胶原再生，具有强大的美容功效，但由于提取率低、载药效果差限制了其在美容护肤领域的应用。因此，有必要专利技术一种高效、无创、快速、稳定的新型美容技术，将护肤成分高效递送至皮肤深层以发挥多重美容功效。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂，本专利技术中的制剂是一种透皮肽修饰的载有小分子肽的传递体与外泌体膜融合载体以及与具有透皮作用植物精油联用的复合制剂，本专利技术制备的制剂有效克服了外泌体或者传递体作为单一载体使用，存在载药量小，渗透量有限等缺陷，为解决传统制备方法中存在的问题，本专利技术将外泌体和传递体进行膜融合构建一种仿生载体负载小分子肽，在表面用透皮肽修饰，并与具有透皮作用的植物精油联用，促进小分子肽的高效透皮吸收，增强美容效果的同时改善小分子肽的载药量和稳定性。
[0006]本专利技术还提供所述具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂和应用。
[0007]技术方案：为了实现上述目的，本专利技术所述一种具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)间充质干细胞外泌体的提取分离：培养间充质干细胞，超速离心法提取外泌体，
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80℃储存备用；
[0009](2)载有小分子肽的传递体制备：称取磷脂，胆固醇，边缘活性剂于茄形瓶，加入小分子肽溶液，采用薄膜分散法制备含有小分子肽的传递体混悬液；具体可以采用薄膜分散法，于不同水浴温度下水合制备含有肽的传递体混悬液，透析袋除去未被包封的游离肽，4℃储存备用；
[0010](3)透皮肽修饰的载有小分子肽的传递体
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外泌体膜融合载体的构建：将步骤(1)的外泌体和步骤(2)的传递体混悬液混合，采用挤出法使得载有小分子肽的传递体与外泌体的膜融合，加入透皮肽，混合后离心弃去上清，得到透皮肽修饰的载有小分子肽的传递体
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外泌体膜融合载体；其中，外泌体和传递体混悬液混合后，用挤出器分别过不同孔径的滤膜挤出，介导载有肽的传递体与外泌体膜融合载体的构建；其中，混合后离心为摇床振摇3h后于4℃，150000g条件下离心1h，弃去上清；
[0011](4)植物精油凝胶的制备：称取植物精油、增溶剂、纯化水混合均匀，形成植物精油的均相溶液；称取卡波姆粉末，均匀分散于植物精油均相溶液表面，溶胀过夜，形成植物精油凝胶；溶胀为室温下溶胀过夜，使用三乙醇胺调节pH至5.0
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6.5(皮肤表面pH)；
[0012](5)具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合美容制剂：将步骤(3)的膜融合载体与步骤(4)的植物精油凝胶混合，搅拌均匀，即得。
[0013]作为优选，步骤(1)所述干细胞为人脐带间充质干细胞；超速离心法提取分离外泌体的方法为：依次4℃，2000g离心10min去除细胞碎片，取上清过0.22μm滤膜，于100000g，离心70min，得到外泌体。
[0014]其中，步骤(2)所述磷脂为大豆磷脂(SPC)，蛋黄卵磷脂(EPC)，氢化大豆磷脂(HSPC)，二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)中的一种或几种；所述边缘活性剂为吐温80、胆酸钠、去氧胆酸钠等中的一种或几种的组合物。本专利技术制备的传递体是在脂质体的基础上添加一定的边缘活性剂如胆酸盐等，使磷脂双分子层的流动性更强，能够通过挤压变形穿过小于其自身粒径数倍的皮肤角质细胞间隙，具有优异的透皮效果，不仅能有效改善难溶性成分的溶解度，还可提高有效成分的稳定性，具有两亲性、生物相容性等优点。
[0015]其中，步骤(2)所述磷脂与胆固醇的质量比为9
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5:1，边缘活性剂与总脂质(磷脂及胆固醇)的质量比为1:5
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7，小分子肽与总脂质的质量比例(药脂比)为1:10
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80，作为优选，薄膜分散法中成膜及水合温度为25或55℃。
[0016]其中，步骤(3)所述小分子美容肽为具有美白、抗衰等多重美容功效的寡肽
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1、三肽
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1和六肽
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12中的一种或几种的组合物。本专利技术中使用的寡肽
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1，六肽
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1，三肽
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12已被证明具有很好的美白、抗衰功效，常作为功效成分被添加至多种护肤品中，以期发挥恢复皮肤细胞活力、改善细纹、对抗肌肤松弛、暗哑，使肌肤重现立体与饱满等功效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)间充质干细胞外泌体的提取分离：培养间充质干细胞，超速离心法提取外泌体；(2)载有小分子肽的传递体制备：称取磷脂，胆固醇，边缘活性剂，加入小分子肽溶液，采用薄膜分散法制备含有小分子肽的传递体混悬液；(3)透皮肽修饰的载有小分子肽的传递体
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外泌体膜融合载体的构建：将步骤(1)的外泌体和步骤(2)的传递体混悬液混合，采用挤出法使得载有小分子肽的传递体与外泌体的膜融合，加入透皮肽，混合后离心弃去上清，得到透皮肽修饰的载有小分子肽的传递体
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外泌体膜融合载体；(4)植物精油凝胶的制备：称取植物精油、增溶剂、纯化水混合均匀，形成植物精油的均相溶液；称取卡波姆粉末，均匀分散于植物精油均相溶液表面，溶胀过夜，形成植物精油凝胶；(5)具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合美容制剂：将步骤(3)的膜融合载体与步骤(4)的植物精油凝胶混合，搅拌均匀，即得。2.根据权利要求1所述的具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述磷脂优选为大豆磷脂(SPC)，蛋黄卵磷脂(EPC)，氢化大豆磷脂(HSPC)，二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)中的一种或几种；所述边缘活性剂为吐温80、胆酸钠、去氧胆酸钠等中的一种或几种的组合物。3.根据权利要求1所述的具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述磷脂与胆固醇的质量比为9:5
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1，边缘活性剂与总脂质的质量比为1:5
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7，小分子肽与总脂质的质量比为1:10
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80，薄膜分散法中的成膜及水合温度为25
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55℃。4.根据权利要求1所述的具有透皮增强作用的传递体
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外泌体膜融合制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述美...

【专利技术属性】
技术研发人员：李斯文，尚美彤，李钰，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：