蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体、靶向肽修饰仿生脂质体及其制备方法和治疗疟疾的应用技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体、靶向肽修饰仿生脂质体及其制备方法和治疗疟疾的应用；本发明专利技术的蒿甲醚脂质体制备方法包括将蒿甲醚载入脂质体内，能够提高蒿甲醚的水溶性，提高其抗疟疾效果；本发明专利技术的红细胞膜包脂质体的制备方法包括将红细胞膜包裹于蒿甲醚脂质体表面，通过红细胞膜表面的肝素样受体俘获血液游离的裂殖子，阻止裂殖子反复感染正常红细胞，预防疟疾周期性发作；本发明专利技术的靶向肽修饰仿生脂质体的制备方法包括在红细胞膜包脂质体(仿生脂质体)表面修饰PS靶向肽，靶向递送蒿甲醚至感染红细胞，提高抗疟疾效果。提高抗疟疾效果。提高抗疟疾效果。

【技术实现步骤摘要】
蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体、靶向肽修饰仿生脂质体及其制备方法和治疗疟疾的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体、靶向肽修饰仿生脂质体及其制备方法和治疗疟疾的应用。

技术介绍

[0002]疟疾(malaria)是经按蚊叮咬传播的急性传染性疾病，是联合国重点防控的三大传染病之一。青蒿素类药物是一线抗疟药物，其抗疟机制主要是影响疟原虫表膜与线粒体的功能，阻断疟原虫营养的供应。蒿甲醚作为青蒿素的主要衍生物之一，其化学性质相对稳定，抗疟效果优于青蒿素，是一种诺华制药抗疟药物
‑
Coartem的主要成分。
[0003]然而，蒿甲醚存在生物利用度低，溶解性差，半衰期短等问题，极大限制了其临床应用。而且，传统蒿甲醚制剂缺乏靶向性，因此使用剂量相对较高，患者面临心脏毒性、胚胎毒性及神经毒性等风险提高，新型纳米靶向抗疟制剂的研发显得尤为关键。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体、靶向肽修饰仿生脂质体及其制备方法和治疗疟疾的应用。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种蒿甲醚脂质体的制备方法，包括：
[0007]将蒿甲醚、蛋黄卵磷脂和胆固醇溶解于乙醇和二氯甲烷的混合溶液中，制成脂质溶液；
[0008]将脂质溶液加入PBS缓冲溶液中，搅拌，超声处理，并将有机溶剂蒸发，制得脂质体；
[0009]将脂质体依次用200nm、100nm的聚碳酸酯膜来回挤压。
[0010]在可选的实施方式中，将脂质溶液按照0.20
‑
0.25mL/min的速率滴加入40
‑
50℃的1
×
PBS的缓冲溶液中，与此同时，通过磁力搅拌器以700
‑
800r/min的转速搅拌，以200w、超声处理5s，间歇停止5s的条件超声处理8
‑
12min，旋转蒸发有机溶剂，制得脂质体。
[0011]第二方面，本专利技术提供一种蒿甲醚脂质体，其是由前述实施方式的蒿甲醚脂质体的制备方法制备的。
[0012]第三方面，本专利技术提供一种红细胞膜包脂质体的制备方法，包括：
[0013]将红细胞膜加入前述实施方式的蒿甲醚脂质体的溶液中，冰水浴超声处理，将悬液用挤出方式依次挤出通过400nm、200nm的聚碳酸酯膜。
[0014]在可选的实施方式中，红细胞膜的制备方法包括：在红细胞溶液内加入含0.25 mmol/L EDTA的低渗溶液，剧烈涡旋后，添加PBS溶液至等渗，再次涡旋混匀；离心去上清液以浓缩；再添加纯水，重悬，离心去上清液，洗涤红细胞膜至白色。
[0015]第四方面，本专利技术提供一种红细胞膜包脂质体，其是由前述实施方式的红细胞膜
包脂质体的制备方法制备的。
[0016]第五方面，本专利技术提供一种靶向肽修饰仿生脂质体的制备方法，包括：
[0017]向前述实施方式的红细胞膜包脂质体的溶液中加入DSPE
‑
PEG
2000
‑
PTP，冰水浴超声处理，通过挤出方式依次挤出通过400nm、200nm聚碳酸酯膜。
[0018]在可选的实施方式中，DSPE
‑
PEG
2000
‑
PTP的制备方法包括：固相合成多肽，并在N 段加入半胱氨酸末端，再与DSPE
‑
PEG
2000
‑
Mal进行偶联。
[0019]第六方面，本专利技术提供一种靶向肽修饰仿生脂质体，其是由前述实施方式的靶向肽修饰仿生脂质体的制备方法制备的。
[0020]第七方面，本专利技术提供如前述实施方式的蒿甲醚脂质体、或前述实施方式的红细胞膜包脂质体、或前述实施方式的靶向肽修饰仿生脂质体在治疗疟疾的应用。
[0021]本专利技术的有益效果包括：
[0022]本专利技术实施例的蒿甲醚脂质体的制备方法是将蒿甲醚载入脂质体，提高蒿甲醚的水溶性，增强其抗疟疾效果。
[0023]本专利技术实施例的蒿甲醚脂质体由上述制备方法制得，通过将蒿甲醚载入脂质体，提高水溶性，增强抗疟疾效果。
[0024]本专利技术实施例的红细胞膜包脂质体的制备方法将红细胞膜包裹于蒿甲醚脂质体表面，通过红细胞膜表面的肝素(heparan sulfate,HS)俘获血液游离的裂殖子，阻止裂殖子的再次感染正常红细胞，能够阻断疟疾周期性发作，进而提高抗疟疾的效果；而且，红细胞膜包裹的蒿甲醚脂质体通过将蒿甲醚载入脂质体，提高水溶性，进一步提高抗疟疾效果。
[0025]本专利技术实施例的红细胞膜包脂质体由上述的红细胞膜包脂质体的制备方法制得，能够有效地提高抗疟疾效果。
[0026]本专利技术实施例的靶向肽修饰仿生脂质体的制备方法在红细胞膜包脂质体(仿生脂质体)表面修饰PS靶向肽，以便于与感染红细胞表面的PS作用，靶向递送蒿甲醚至感染红细胞，提高抗疟疾效果；利用红细胞膜表面的肝素俘获裂殖子阻断其反复感染正常红细胞，通过载入脂质体的蒿甲醚的水溶性得到改善，以有效地提高抗疟疾效果。
[0027]本专利技术实施例的蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体或靶向肽修饰仿生脂质体用于治疗疟疾具有良好的效果。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0029]图1为本专利技术实施例1的脂质体稳定性试验结果，其中，(A)7天粒径稳定性实验； (B)10％血清粒径稳定性和(C)浊度变化；
[0030]图2为本专利技术实施例1的脂质体靶向性试验结果，其中，(A)鼠疟模型裂殖子对不同红细胞膜含量的脂质体的摄取及(B)MFI的统计分析；(C)鼠疟模型裂殖子对Lip
‑
NR、 EM
‑
NR和PEM
‑
NR的摄取及(D)MFI的统计分析；(E)鼠疟模型裂殖子与PEM
‑
NR的荧光共聚焦图；
[0031]图3为本专利技术中HO/TO双染，流式细胞法对疟疾模型鼠的红细胞生长周期分析结
果；
[0032]图4为本专利技术中不同感染率的鼠疟模型红细胞中正常红细胞(A)、环状体(B)、滋养体(C)和裂殖体(D)对脂质体(Lip
‑
NR、EM
‑
NR、P1
‑
EM
‑
NR、P2
‑
EM
‑
NR、P3
‑
EM
‑
NR) 的摄取；(E)滋养体和裂殖体与P1
‑
EM
‑
NR脂质体的激光共聚焦图片；
[0033]图5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蒿甲醚脂质体的制备方法，其特征在于，包括：将蒿甲醚、蛋黄卵磷脂和胆固醇溶解于乙醇和二氯甲烷的混合溶液中，制成脂质溶液；将所述脂质溶液加入PBS缓冲溶液中，搅拌，超声处理，并将有机溶剂蒸发，制得脂质体；将所述脂质体依次用200nm、100nm的聚碳酸酯膜来回挤压。2.根据权利要求1所述的蒿甲醚脂质体的制备方法，其特征在于，将所述脂质溶液按照0.20
‑
0.25mL/min的速率滴加入40
‑
50℃的1
×
PBS的缓冲溶液中，与此同时，通过磁力搅拌器以700
‑
800r/min的转速搅拌，以200w、超声处理5s，间歇停止5s的条件超声处理8
‑
12min，旋转蒸发有机溶剂，制得所述脂质体。3.一种蒿甲醚脂质体，其特征在于，其是由权利要求1或2所述的蒿甲醚脂质体的制备方法制备的。4.一种红细胞膜包脂质体的制备方法，其特征在于，包括：将红细胞膜加入权利要求3所述的蒿甲醚脂质体的溶液中，冰水浴超声处理，将悬液用挤出方式依次挤出通过400nm、200nm的聚碳酸酯膜。5.根据权利要求4所述的红细胞膜包脂质体的制备方法，其特征在于，所述红细胞膜的制备方法包括：在红细胞溶液内加入含0.25...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁剑铭，何周清，茹丽，曾峰，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：