本发明专利技术提供一种抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、一种总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其使用方法，本申请提供的酶结合物稀释液可以增强酶结合物的稳定性，同时抑制解离剂对酶结合物的破坏作用，实现两者可以共存于同一试剂组分中，在总三碘甲状腺原氨酸检测中可以同时满足总三碘甲状腺原氨酸解离、降低新旧样本干扰和HAMA干扰，从而使本申请提供的总三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒达到更快速更便捷的操作和获取更准确的检测结果。捷的操作和获取更准确的检测结果。
【技术实现步骤摘要】
抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其使用方法
[0001]本专利技术涉及免疫学检测
，尤其是涉及一种抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、一种总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
[0002]三碘甲状腺原氨酸(T3)分子量为651，大约25％由甲状腺直接产生，75％由甲状腺素(T4)在外周组织中经5`-脱碘酶的作用形成，是目前已知生物活性最强的甲状腺激素，其生物活性为甲状腺素的3～5倍。因此三碘甲状腺原氨酸的检测能有效的评估甲状腺功能状态。
[0003]针对总三碘甲状腺原氨酸(TT3)现有的检测方法有液相色谱-串联质谱法、免疫学方法。其中免疫学方法因其检测快捷，成本低廉是目前临床应用的主流方法。平台上又形成了化学发光、酶联免疫、免疫荧光、免疫比浊、荧光免疫等产品形式。
[0004]应用免疫学方法的产品中，目前应用较多的方法是：固相化抗三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体，酶标记三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原，对样本进行前处理使总三碘甲状腺原氨酸(TT3)从结合蛋白上解离为游离态。然后酶标记的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原和样本处理后呈现游离态的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原，竞争结合固相化的抗三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体，进行竞争法检测。例如：北京科美东雅公司、北京源德生物、北京美康生物等公司使用的都是这种方法，这种方法需要单独进行一步样本前处理，重要的是该方法容易造成一定比例的结合蛋白异常的样品检测结果错误。原因是这些样本的结合蛋白解离后有机会与酶标记的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原形成新的结合，从而造成干扰竞争反应的后果。或者只能使用两步法操作，避免结合蛋白与酶标记抗原发生结合。
[0005]另外市场上也有部分产品采用另一种方法，就是固相化三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原，酶标记抗三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体的方法，反应试剂中加入解离剂成分使总三碘甲状腺原氨酸(TT3)从结合蛋白上解离为游离态，然后固相化的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原和样本处理后呈现游离态的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原，竞争结合酶标记的抗三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体，进行竞争法检测。这种方法虽然可以规避样品中结合蛋白解离后与基质液中三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原形成新的结合，从而造成干扰竞争反应的后果，但是由于解离剂的理化性质对酶有一定的降解作用，所以一直以来也只能使用酶稀释液和酶浓缩液的产品形式，分离酶结合物(存在于酶浓缩液中)与解离剂(存在于酶稀释液中)在不同试剂组分中，从而造成操作繁琐，例如使用前现配酶结合物工作液或者两步加样。例如：郑州安图生物技术有限公司的产品使用的就是这种方法。
技术实现思路
[0006]为解决上述问题，本专利技术提供一种抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、一种总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其使用方法，本申请提供的酶结合物稀释液可以增强
酶结合物的稳定性，同时抑制解离剂对酶结合物的破坏作用，实现两者可以共存于同一试剂组分中，在总三碘甲状腺原氨酸检测中可以同时满足总三碘甲状腺原氨酸解离、降低新旧样本干扰和HAMA干扰，从而使本申请提供的总三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒达到更快速更便捷的操作和获取更准确的检测结果。
[0007]本专利技术的目的是以下述方式实现的：一种抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，包括酶结合物稀释液与酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体，酶结合物稀释液与酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体的体积比为4500-5500：1；酶结合物稀释液，包括BSA、胰蛋白胨、氨基比林。
[0008]酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体可以为含有HRP标记抗三碘甲状腺原氨酸单抗。
[0009]具体的，酶结合物稀释液，包括巴比妥钠缓冲液、ANS、BSA、胰蛋白胨、氨基比林、IPBC、HBR、Proclin300。
[0010]巴比妥钠缓冲液为PH值为6.8-8的巴比妥钠缓冲液。
[0011]酶结合物稀释液，每升中含有BSA 25-35g、胰蛋白胨7-12g、氨基比林0.8-1.2g。
[0012]酶结合物稀释液，每升中含有巴比妥钠缓冲液978ml、ANS 3g、BSA 30g、胰蛋白胨10g、氨基比林1g、IPBC 1g、HBR 50mg、Proclin300 1ml，巴比妥钠缓冲液为每10.3g巴比妥钠配制成1L的巴比妥钠水溶液，然后加入6M的盐酸配制成PH值为7.4的巴比妥钠缓冲液。
[0013]酶结合物稀释液与酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体的体积比为5000：1。
[0014]一种总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，包括包被有三碘甲状腺原氨酸的包被板、酶标记抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、和三碘甲状腺原氨酸校准品，其中酶结合物为通过在酶结合物稀释液中加入酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体制备而成。
[0015]包被有三碘甲状腺原氨酸的包被板的制备方法，包括以下步骤：(1)将T3-BSA加入到tris-HCl缓冲液中配制成包被液，充分混匀；(2)将配制好的包被液加入空白酶标板内，在2～8℃下放置16-24hr；(3)甩去酶标板中的包被液，酶标板表面无液体后，用洗液洗板至少2次；(4)洗板后2分钟内封闭，然后每个孔内加入封闭液，然后在2～8℃下放置16～24hr；(5)将酶标板的封闭液甩出，然后将酶标板放置在烘干装置中干燥(湿度≤30％)4-8hr。
[0016]三碘甲状腺原氨酸校准品的的制备方法，包括以下步骤：(1)使用PH为6.8-7.5的HEPES缓冲液、BSA、制霉菌素、Proclin300配制校准品稀释液；(2)使用校准品稀释液对三碘甲状腺原氨酸进行稀释，分别配制成不同浓度的三碘甲状腺原氨酸校准品。
[0017]步骤(2)中制成0ng/ml,0.5ng/ml,1ng/ml,2ng/ml,4ng/ml,8ng/ml六个浓度的三碘甲状腺原氨酸校准品。
[0018]所述的总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤，(1)加样：取出一定量的包被板上编号的包被孔，用微量移液器依次加入50μl校准品及待测样本，再加入酶结合物50μl；(2)、温育：将加样后的包被板置37℃环境温度下60分钟；(3)、洗涤：甩去包被孔内液体，用稀释后的洗涤液注满各包被孔，静置20秒，甩掉，如此
反复洗涤5次，每次均需甩净液体，最后在吸水纸上拍干；(4)、显色：每包被孔加底物液100μl，18～23℃避光反应20分钟；(5)、终止：每包被孔加终止液50μl，终止反应。
[0019]本试剂盒基于酶免免疫法制备而成，配合酶标仪使用，操作简便，检测速度快。与市场上在售的总三碘甲状腺原氨酸(TT3)检测试剂盒相比，本试剂盒采用固相化三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原，酶标记抗三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体的反应方式；并优化酶结合物配方，添加了氨基比林、胰蛋白胨、BSA，有效的保护了酶标抗体不受解离剂的影响。该反应原理因参与竞争的三碘甲状腺原氨酸抗原固相化，可以不受样本解离后结合蛋白的影响。另外，在酶结合物中添加上本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，其特征在于：包括酶结合物稀释液与酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体，酶结合物稀释液与酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体的体积比为4500-5500：1；酶结合物稀释液，包括BSA、胰蛋白胨、氨基比林。2.根据权利要求1所述的抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，其特征在于：酶结合物稀释液，包括巴比妥钠缓冲液、ANS、BSA、胰蛋白胨、氨基比林、IPBC、HBR、Proclin300。3.根据权利要求2所述的抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，其特征在于：巴比妥钠缓冲液为PH值为6.8-8的巴比妥钠缓冲液。4.根据权利要求1所述的抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，其特征在于：酶结合物稀释液，每升中含有BSA 25-35g、胰蛋白胨7-12g、氨基比林0.8-1.2g。5.根据权利要求1所述的抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，其特征在于：酶结合物稀释液，每升中含有巴比妥钠缓冲液978ml、ANS 3g、BSA 30g、胰蛋白胨 10g、氨基比林1g、IPBC 1g、HBR 50mg、Proclin300 1ml，巴比妥钠缓冲液为每10.3g巴比妥钠配制成1L的巴比妥钠水溶液，然后加入6M的盐酸配制成PH值为7.4的巴比妥钠缓冲液。6.根据权利要求1所述的抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物，其特征在于：酶结合物稀释液与酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体的体积比为5000：1。7.一种总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：包括包被有三碘甲状腺原氨酸的包被板、酶标记抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、和三碘甲状腺原氨酸校准品，其中酶结合物为通过在酶结合物稀释液中加入酶标记三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体制备而成。8.根据权利要求7...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玲玲，普鹏，
申请(专利权)人：郑州达诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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