一种AMH纳米抗体、试剂盒及在生殖领域的应用制造技术

本发明专利技术具体涉及一种AMH纳米抗体、试剂盒及在生殖领域的应用。AMH与人体内生殖相关的激素具有密切的联系，通过检测血清中AMH的含量可用于多种疾病的诊断或生殖功能相关的评价。目前基于抗原抗体原理进行检测的产品中，所述抗体大多鼠源型抗体，临床检测效果并不稳定。基于上述现状，本发明专利技术提供了一种AMH纳米抗体，所述纳米抗体具有良好的检测特异性和亲和力，可应用多种生殖相关疾病的检测。可应用多种生殖相关疾病的检测。可应用多种生殖相关疾病的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种AMH纳米抗体、试剂盒及在生殖领域的应用


[0001]本专利技术属于纳米抗体开发
，具体涉及一种AMH的纳米抗体、所述纳米抗体的编码基因、所述纳米抗体的抗原蛋白以及上述物质在药物组合物、药物及检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]女性生育能力与其体内各类生殖激素和卵巢储备功能有着密切的联系。卵巢储备功能是卵巢产生卵子数量和质量的潜能，间接反映卵巢的功能，卵巢储备功能与生育和不孕症诊治关系密切，高效、准确的检测为临床医生全面了解女性的卵巢储备功能提供重要的参考信息，这对于科学制定个体化的生育计划，提高女性生育率具有重要意义。AMH对卵巢储备功能及卵泡发育发挥着重要的作用，能够反映整个生命周期的卵泡活性。女性AMH水平随着卵巢储备功能的变化而变化，AMH水平越高，说明卵泡数量越多，卵巢储备功能强，女性生育能力就较强。而随着年龄及各种因素逐渐消耗，AMH浓度也会随之降低，就代表着卵巢储备功能降低，也预示着女性生育力的减弱，直到绝经后无法测出。因此，检测AMH水平可以预测女性生育能力。
[0004]临床上，血清AMH水平的检测除了可用于卵巢功能储备的评估，还可用于控制性超排卵(COH)效果的预测、卵巢过度刺激(OHSS)的预测、多囊卵巢综合征(PCOS)的诊断和预后、卵巢颗粒细胞瘤的诊断和管理、男性性早熟和青春期延迟的诊断和鉴别诊断、男童的隐睾症和无睾症的诊断和儿童双性状态的鉴别诊断。AMH的检测具有广阔的市场前景，其诊断试剂盒市场开发潜力巨大。目前人AMH检测试剂盒国内以深圳市亚辉龙生物科技有限公司和广州市康润生物科技有限公司生产的抗缪勒氏管激素(AMH)定量检测试剂盒(酶联免疫法)为主，进口以贝克曼的AMH Gen II Assay和罗氏的电化学发光检测Elecsys AMH为主。针对上述现状，专利技术人认为，上述检测抗体均为传统的鼠源抗体，存在半衰期段、人源化之后抗原抗体亲和力减弱的缺陷，作为一种检测试剂的假阳性概率较高，无法满足临床检测血清中AMH的要求。

技术实现思路

[0005]针对上述研究背景，本专利技术目的在于提供一种能够满足临床检测的AMH相关抗体，基于该目的，本专利技术联想到提供一种AMH的纳米抗体，所述纳米抗体优选为AMH的骆驼源抗体。所述骆驼源单独克隆表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体为2.5nm，长4nm，分子量只有15KDa，此也被称作纳米抗体(Nanobody,Nb)。VHH可溶性极高，不易聚集，能耐高温、强酸、强碱等致变性条件，适合于原核表达和各种真核表达系统，广泛用于开发治疗性抗体
药物、诊断试剂、亲和纯化基质和科学研究等领域。
[0006]基于上述技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面，提供一种AMH的纳米抗体，所述纳米抗体的序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008]本专利技术提供的上述纳米抗体相比传统单克隆抗体具有更小的尺寸，并且具有良好的结合特异性，作为检测抗体相比现有的鼠源抗体更加稳定，亲和力得到显著的提升。
[0009]专利技术第二方面，提供编码第一方面所述纳米抗体的基因序列，或由于密码子简并性能够翻译的到第一方面所述纳米抗体氨基酸序列的基因序列。基于该基因序列，本领域技术人员可通过常规的基因工程手段获得第一方面所述纳米抗体，另外，本专利技术还提供一种基于动物免疫手段获取上述纳米抗体的方法。
[0010]因此，本专利技术第三方面，提供第一方面所述AMH纳米抗体的抗原蛋白，所述纳米抗体的抗原结合片段如SEQ ID NO:3所示，或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:3所示序列。
[0011]本专利技术第四方面，提供第一方面所述AMH纳米抗体的制备方法，所述制备方法包括动物免疫后获取抗体血清，通过反转录方式获取抗体序列并构建表达菌株。
[0012]本专利技术第五方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包括第一方面所述AMH的纳米抗体和/或SEQ ID NO:3所示的多肽。
[0013]本专利技术第六方面，提供一种药物，所述药物具有靶向基团修饰述靶向基团包括第五方面所述药物组合物。
[0014]本专利技术第七方面，提供一种检测试剂盒，所述检测试剂盒中包括第一方面所述AMH纳米抗体或第三方面所述AMH纳米抗体的抗原结合蛋白。
[0015]本专利技术第八方面，提供第七方面所述检测试剂盒在生殖领域的应用。
[0016]以上一个或多个技术方案的有益效果是：
[0017]1、本专利技术提供的AMH纳米蛋白具有分子量小、特异性良好的特点，基于该特性，所述纳米蛋白作为检测抗体能够有效降低假阳性的概率，作为药物靶向基团不会显著增加药物的分子量，影响药物的生物利用度，其制备工艺简单，适用于临床检索。
[0018]2、本专利技术提供的AMH抗原蛋白的制备方法中，根据AMH含有二硫键和糖基化位点，因此选择可进行二硫键配对及具有糖基化修饰能力的毕赤酵母表达系统制备抗原蛋白，通过添加标签减少了后续纯化步骤，能够分离得到纯度大于95％的重组抗原蛋白，并且结构稳定，特异性良好。
附图说明
[0019]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0020]图1为实施例3中所述PCR鉴定AMH纳米抗体表达质粒电泳图；
[0021]图2为实施例4中AMH纳米抗体表达质粒的测序结果图；
[0022]图3为实施例5中纯化包被纳米抗体电泳结果图；
[0023]图4为实施例6中AMH的ELISA方法检测的标准曲线。
具体实施方式
[0024]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0025]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0026]正如
技术介绍
所介绍的，血清AMH水平的检测对于多种疾病的诊断具有重要的意义，目前基于抗原抗体结合效应进行检测的抗体多为鼠源抗体，存在临床应用不稳定的缺陷。为了解决如上的技术问题，本专利技术提出了一种AMH的纳米抗体。
[0027]本专利技术第一方面，提供一种AMH的纳米抗体，所述纳米抗体的序列如SEQ ID NO:1所示。
[0028]优选的，所述纳米抗体中，没有Fc段，CDR3区比传统抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种AMH的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的序列如SEQ ID NO:1所示。2.如权利要求1所述AMH的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体中，没有Fc段，CDR3区比传统抗体更长，其CDR区的5个氨基酸为亲水性氨基酸。3.如权利要求1所述AMH的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体还包括其修饰后的物质，所述修饰包括但不限于聚乙二醇、抗生物素蛋白、链霉亲和素、各种分子，例如生物素、放射性同位素、荧光剂、酶、细胞毒性物质、抗肿瘤剂以及用它们修饰的第二抗体；所述放射性同位素的例子包括
18
F，
15
O，
13
N，
11
C，
82
Rb，
68
Ga，
198
Au，
199
Au，
32
P，
33
P，
125
I，
131
I，
123
I，
90
Y，
186
Re，
188
Re，
62
Cu，
64
Cu，
67
Cu，
47
Sc，
103
Pb，
109
Pb，
212
Pb，
71
Ge，
77
As，
105
Rh，
113
Ag，
119
Sb，
131
Cs，
143
Pr，
161
Tb，
177
Lu，
191
Os，
193
Pt，
197
Hg；所述螯合剂，为DTPA、DOTA或DFO；所述荧光剂为FITC、罗丹明，藻红蛋白、藻蓝蛋白，别藻蓝蛋白，OPA或氟胺；所述酶的实例包括辣根过氧化物酶、β
‑
半乳糖苷酶、萤光素酶和碱性磷酸酶；所述细胞毒性物质的实例包括白喉A链、铜绿假单胞菌外毒素A，百日咳毒素、蓖麻毒蛋白A链、modesin毒素，α
‑
sarcin，diandian，curcin，cro...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜国胜，高伟，王希娣，张丹凤，任海山，陈梅英，
申请(专利权)人：姜国胜，
类型：发明
国别省市：