一种抗N末端脑钠肽前体的重组抗体制造技术

本发明专利技术涉及一种包含N末端脑钠肽前体抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人N末端脑钠肽前体蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于N末端脑钠肽前体蛋白的检测领域。测领域。测领域。

【技术实现步骤摘要】
一种抗N末端脑钠肽前体的重组抗体


[0001]本专利技术涉及免疫
，具体而言，涉及一种抗N末端脑钠肽前体的重组抗体。

技术介绍

[0002]1988年日本学者Sudoh首次从猪脑内分离得到一种具有强有力的利尿、扩血管和降压作用的多肽，将其命名为脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)。BNP分布在心脏含量最高，但心肌细胞首先合成的是含有108个氨基酸的proBNP(BNP前体)，当心肌细胞受到刺激后，proBNP在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、具有活性的B型利钠肽(BNP)，两者来源相同并且等摩尔分泌释放进入血循环。
[0003]当心脏容量负荷增加或心脏功能受损时，N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)与BNP的指标浓度会异常升高，其中NT-proBNP相对BNP生物稳定性较好，半衰期较长(120min)，浓度相对较稳定，有效检测时间长，血液中含量相对比BNP高约16～20倍，因此检测相对容易，并且血浆标本在体外的稳定性长(>48h)，是诊断心力衰竭和评价心脏功能的最佳心肌标志物。
[0004]正常的人血液中NT-proBNP含量一般低于0.3ng/mL。当心脏功能受损，心肌扩张时，NT-proBNP会快速合成并大量分泌释放进入到人体血液中。在发现一些相关早期病症的时候，准确、灵敏、高效稳定地测定血液中NT-proBNP的量，能给早期心功能不全、心衰、呼吸困难的心源性及非心源性心衰治疗及预后监测、急性冠状动脉综合征的分级等方面提供快速、准确的早期诊断依据。目前用于检NT-proBNP含量的方法主要有金标定性试验、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光法(CMIA)，但是这些测量方法都需要针对于NT-proBNP的特异性单克隆抗体，而传统的临床诊断使用的都是鼠源的单克隆抗体。
[0005]长期以来，杂交瘤技术生产的鼠单克隆抗体被广泛的应用于科研、临床诊断和治疗。但由于杂交瘤方式生产采用小鼠腹腔诱生，受小鼠个体影响特别大，生产不稳定、批间差大、含小鼠自身抗体纯化难度大，而本专利技术涉及的重组抗体采用重组抗体技术，可完全解决上述问题。
[0006]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术涉及一种新颖的包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。
[0008]其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性，且与NT-proBNP具有K
D
≤9.63E-9mol/L的亲和力；
[0009]互补决定区CDR-VH1为G-X1-T-X2-S-X3-Y-T-M-S，其中，
[0010]X1是F或A，X2是L、V或I，X3是R或K；
[0011]互补决定区CDR-VH2为X1-I-X2-S-G-X3-G-N-T-X4-Y-P-D-S-V-K-G，其中，
[0012]X1是L、V或I，X2是T或S，X3是N或GG，X4是F或A；
[0013]互补决定区CDR-VH3为S-X1-Y-X2-Y-D-G-X3-W-F-A，其中，X1是K或R，X2是F、A或G，X3是F或A；
[0014]互补决定区CDR-VL1为R-S-X1-K-S-L-X2-H-S-X3-G-N-T-Y-X4-L-Y，其中，
[0015]X1是Q、N、R或K，X2是I或L，X3是Q或N，X4是I、V或L；
[0016]互补决定区CDR-VL2为R-M-X1-N-X2-A-S，其中，
[0017]X1是T或S，X2是L、V或I；
[0018]互补决定区CDR-VL3为M-Q-X1-L-E-X2-P-L-X3，其中，
[0019]X1是Q、H或N，X2是W、Y或F，X3是S或T。
[0020]一个重要优点在于，所述结合蛋白活性强，与NT-proBNP具有很高的亲和力，适用于NT-proBNP的含量检测，特别是人NT-proBNP的含量检测。同时本专利技术通过重组方式得到的结合蛋白个体差异小、批间差异小、质量稳定，更利于其质量控制和检测稳定性。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为本专利技术一个实施例1中抗NT-proBNP的单克隆抗体电泳图。
具体实施方式
[0023]本专利技术可通过后续对于本专利技术一些实施方案描述以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。
[0024]在进一步叙述本专利技术之前，应明了本专利技术不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的用语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制，因为本专利技术的范围将会被仅仅界定在所附的权利要求中。
[0025]除非本文另有定义，连同本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。
[0026]一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。
[0027]为了本专利技术可以更容易地理解，选择的术语在下文定义。
[0028]术语“氨基酸”表示天然存在或非天然存在的梭基α-氨基酸。术语“氨基酸”用在本申请中可以包括天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸包括丙氨酸(三字母密码：A1a，单字母密码：A)，精氨酸(Arg，R)，天冬酰胺(Asn，N)，天冬氨酸(Asp，D)，半胱氨酸(Cys，c)，谷氨酰胺(G1n，Q)，谷氨酸(G1u，E)，甘氨酸(G1y，G)，组氨酸(His，H)，异亮氨酸(I1e，I)，亮氨酸(Leu，L)，赖氨酸(Lys，K)，甲硫氨酸(Met，M)，苯丙氨酸(Phe，F)，脯氨酸(Pro，P)，丝氨酸(Ser，S)，苏氨酸(Thr，T)，色氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与proBNP具有KD≤9.63E-9mol/L的亲和力；互补决定区CDR-VH1为G-X1-T-X2-S-X3-Y-T-M-S，其中，X1是F或A，X2是L、V或I，X3是R或K；互补决定区CDR-VH2为X1-I-X2-S-G-X3-G-N-T-X4-Y-P-D-S-V-K-G，其中，X1是L、V或I，X2是T或S，X3是N或GG，X4是F或A；互补决定区CDR-VH3为S-X1-Y-X2-Y-D-G-X3-W-F-A，其中，X1是K或R，X2是F、A或G，X3是F或A；互补决定区CDR-VL1为R-S-X1-K-S-L-X2-H-S-X3-G-N-T-Y-X4-L-Y，其中，X1是Q、N、R或K，X2是I或L，X3是Q或N，X4是I、V或L；互补决定区CDR-VL2为R-M-X1-N-X2-A-S，其中，X1是T或S，X2是L、V或I；互补决定区CDR-VL3为M-Q-X1-L-E-X2-P-L-X3，其中，X1是Q、H或N，X2是W、Y或F，X3是S或T；优选的：所述互补决定区CDR-VH1中，X1是F；所述互补决定区CDR-VH2中，X4是F；所述互补决定区CDR-VH3中，X1是R；所述互补决定区CDR-VL1中，X2是L；所述互补决定区CDR-VL2中，X1是S；所述互补决定区CDR-VL3中，X3是T；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是L；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是V；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是I；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X3是R；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X3是K；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是L；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是V；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是I；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是T；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是S；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X3是N；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X3是GG；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是F；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是A；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是G；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X3是F；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X3是A；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是Q；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是N；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是R；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是K；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X3是Q；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X3是N；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X4是I；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X4是V；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X4是L；优选的，所述互补决定区CDR-VL2中，X2是L；优选的，所述互补决定区CDR-VL2中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔鹏，何志强，孟媛，钟冬梅，叶庆妮，覃婷，游辉，王晨，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：