一种枸杞品种耐盐性的评价方法技术

本发明专利技术提供一种枸杞品种耐盐性的评价方法，涉及枸杞逆境适应性评价领域。该方法包括：将待评价的枸杞品种的幼苗分别扦插在不加NaCl的培养基和添加NaCl的培养基中进行培养，作为对照组和实验组；分别取对照组和实验组培养后幼苗的叶片，检测叶片中脂质分子的含量，得出实验组相对于对照组含量发生显著变化的脂质分子的种类；根据含量发生显著变化的脂质分子的种类数目和/或其含量变化大小来评价枸杞品种的耐盐性，其中，含量发生显著变化的脂质分子的种类数目越少，含量变化越小，则枸杞品种的耐盐性越高。基于脂质分子的含量分析可以精准地反映不同枸杞品种之间的耐盐性高低，对于枸杞的抗逆育种工作具有重要的指导意义。对于枸杞的抗逆育种工作具有重要的指导意义。对于枸杞的抗逆育种工作具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】
一种枸杞品种耐盐性的评价方法


[0001]本专利技术涉及枸杞逆境适应性评价领域，具体涉及一种枸杞品种耐盐性的评价方法。

技术介绍

[0002]枸杞，多年生落叶灌木，属于药食同源物种，分布于中国宁夏、甘肃、青海、新疆、西藏等地区。枸杞的果实和叶片均含有丰富的营养成分和功效物质，是一味常用的中药材，同时也是非常重要的保健功能食品。近年来关于枸杞的育种、种植以及功效成分的研究等得到了广泛的关注。
[0003]盐碱土是指在自然因素和人为因素作用下，集聚大量可溶性盐的土壤。目前，土壤盐碱化是制约农业生产和经济发展的关键因素。枸杞属植物具有较强的耐盐碱和耐旱性，适宜在盐碱、干旱和沙荒地种植。枸杞作为中国西北地区植被恢复、荒漠化防治、盐碱地利用的先驱树种之一，改善其在盐碱地等极端环境下的生长状态，培育和筛选高耐盐性枸杞品种，具有重要的现实意义。
[0004]土壤中可溶性盐分过多对植物的不利影响称为盐害，而植物对盐害的耐受能力称为耐盐性。目前，现有技术中通常采用的是观察不同盐胁迫条件下幼苗生长发育状态以及利用种子萌发率来评价不同枸杞品种的耐盐性。以上方法虽然可以直观地展现出不同品种枸杞耐盐性的差异，但是对于枸杞耐盐性的评价比较粗略，缺乏精准的分析。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中评价枸杞品种耐盐性的方法比较粗略、缺乏精准分析的缺陷，从而提供一种新的枸杞品种耐盐性的评价方法。
[0006]本专利技术提供一种枸杞品种耐盐性的评价方法，包括：
[0007]将待评价的枸杞品种的幼苗分别扦插在不加NaCl的培养基和添加NaCl的培养基中进行培养，作为对照组和实验组；
[0008]分别取对照组和实验组培养后幼苗的叶片，检测叶片中脂质分子的含量，得出实验组相对于对照组含量发生显著变化的脂质分子的种类；
[0009]根据含量发生显著变化的脂质分子的种类数目和/或其含量变化大小来评价枸杞品种的耐盐性，其中，含量发生显著变化的脂质分子的种类数目越少，含量变化越小，则枸杞品种的耐盐性越高。
[0010]进一步的，在所述添加NaCl的培养基中，NaCl的浓度为100～200mmol/L，优选为150mmol/L。
[0011]进一步的，所述培养基为MS培养基。
[0012]进一步的，所述待评价的枸杞品种的幼苗，其获取方法包括：
[0013]剪取枸杞树新发的嫩枝，消毒处理后扦插在培养基上，于温室培养生长3～4周，优选为3周，再次剪取嫩枝进行无菌扩繁，剪取长度、茎粗一致的嫩枝幼苗用作所述待评价的
枸杞品种的幼苗。
[0014]进一步的，所述培养是在温室中培养，光周期为10h光照和14h黑暗，温度25℃，湿度50～70％，培养21天。
[0015]进一步的，通过t检验得出实验组相对于对照组含量发生显著变化的脂质分子的种类。
[0016]进一步的，检测叶片中的脂质分子含量的方法包括预处理和仪器检测，其中，所述预处理包括：
[0017](1)取叶片研磨后的粉末加入预热好的异丙醇，加热，加入全脂内标物、三氯甲烷和超纯水，涡旋，离心，取上清液1；
[0018](2)向步骤(1)取上清液1后余下的液体中加入含BHT的三氯甲烷和甲醇的混合液，涡旋，离心，取上清液2；
[0019](3)合并上清液1和上清液2并向其中加入KCl，涡旋，离心，取下清液，氮吹干，用异丙醇复溶，过滤，得到待测液，
[0020]优选的，在步骤(1)中，以每20mg叶片粉末的重量计，加入异丙醇3mL，全脂内标物100μL，三氯甲烷1.5mL，超纯水0.6mL；异丙醇的预热温度为75℃，加热时间为15min；全脂内标物的浓度为10μg/mL；涡旋时间为1h；
[0021]在步骤(2)中，混合液中三氯甲烷和甲醇的体积比为2：1，BHT的浓度为0.01％；重复提取3次，以每20mg叶片粉末的重量计，每次加入混合液的体积为4mL；涡旋时间为30min；
[0022]在步骤(3)中，KCl的浓度为1mol/L，以每20mg叶片粉末的重量计，加入KCl的体积为1mL；复溶加入的异丙醇的体积为1mL；用孔径0.22μm的有机滤膜进行过滤。
[0023]进一步的，所述仪器检测采用超高效液相色谱
‑
串联质谱联用方法，其中，
[0024]色谱系统：shimadzu UPLC LC
‑
30A；色谱柱：Phenomenex Kinete C18 column，100
×
2.1mm，2.6μm；进样量：1μL；流速：0.4mL/min；柱温：60℃；样品室温度：4℃；流动相A相：体积比为1：1：1的水、甲醇和乙腈的混合液，含5mmol/L醋酸铵；流动相B相：体积比为5：1的异丙醇和乙腈的混合液，含5mmol/L醋酸铵；梯度洗脱条件：0min
→
0.5min，A相：B相＝80:20，V/V；0.5min
→
1.5min，A相：B相＝60:40；1.5min
→
3.0min，A相：B相＝40:60；3.0min
→
13.0min，A相：B相＝80:20；13.0min
→
17.0min，A相：B相＝80:20；
[0025]质谱系统：AB Sciex TripleTOF 6600；ESI离子源：正模式；质谱采集的质量范围为m/z 100
‑
1200；质谱条件：帘气：35.000psi；离子源气体1：50.000；离子源气体2：50.00；离子喷雾电压：5500.00V；离子源温度：600℃。
[0026]进一步的，所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，还包括：
[0027]分别取对照组和实验组培养后幼苗的叶片，检测叶片中脱落酸和/或茉莉酸的含量；
[0028]根据实验组相对于对照组叶片中脱落酸和/或茉莉酸含量变化的显著性来评价枸杞品种的耐盐性，其中，脱落酸和/或茉莉酸的含量变化显著性越高，则枸杞品种的耐盐性越高。
[0029]进一步的，检测叶片中脱落酸或茉莉酸的含量的方法包括：
[0030](1)取叶片加液氮研磨成均匀的粉末；
[0031](2)向步骤(1)得到的粉末中加入内标物，并加入提取试剂进行提取，得提取液；
[0032](3)将步骤(2)得到的提取液浓缩、复溶、过滤，得到待测液；
[0033](4)将步骤(3)得到的待测液使用超高效液相色谱
‑
二级质谱联用法进行检测，通过内标法测定脱落酸或茉莉酸的含量，
[0034]优选的，在步骤(2)中，向步骤(1)得到的粉末中加入内标物，并加入所述提取试剂萃取、离心去除杂质，取上清液，即为所述提取液；检测脱落酸和茉莉酸时使用的提取试剂均为体积比为15:4:1的甲醇、水和甲酸的混合液；更优选的，以每100mg叶片粉末的重量计，加入脱落酸和/或茉莉酸的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，包括：将待评价的枸杞品种的幼苗分别扦插在不加NaCl的培养基和添加NaCl的培养基中进行培养，作为对照组和实验组；分别取对照组和实验组培养后幼苗的叶片，检测叶片中脂质分子的含量，得出实验组相对于对照组含量发生显著变化的脂质分子的种类；根据含量发生显著变化的脂质分子的种类数目和/或其含量变化大小来评价枸杞品种的耐盐性，其中，含量发生显著变化的脂质分子的种类数目越少，含量变化越小，则枸杞品种的耐盐性越高。2.根据权利要求1所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，在所述添加NaCl的培养基中，NaCl的浓度为100～200mmol/L，优选为150mmol/L。3.根据权利要求1或2所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，所述培养基为MS培养基。4.根据权利要求1或2所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，所述待评价的枸杞品种的幼苗，其获取方法包括：剪取枸杞树新发的嫩枝，消毒处理后扦插在培养基上，于温室培养生长3～4周，优选为3周，再次剪取嫩枝进行无菌扩繁，剪取长度、茎粗一致的嫩枝幼苗用作所述待评价的枸杞品种的幼苗。5.根据权利要求1或2所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，所述培养是在温室中培养，光周期为10h光照和14h黑暗，温度25℃，湿度50～70％，培养21天。6.根据权利要求1或2所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，通过t检验得出实验组相对于对照组含量发生显著变化的脂质分子的种类。7.根据权利要求1或2所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，检测叶片中的脂质分子含量的方法包括预处理和仪器检测，其中，所述预处理包括：(1)取叶片研磨后的粉末加入预热好的异丙醇，加热，加入全脂内标物、三氯甲烷和超纯水，涡旋，离心，取上清液1；(2)向步骤(1)取上清液1后余下的液体中加入含BHT的三氯甲烷和甲醇的混合液，涡旋，离心，取上清液2；(3)合并上清液1和上清液2并向其中加入KCl，涡旋，离心，取下清液，氮吹干，用异丙醇复溶，过滤，得到待测液，优选的，在步骤(1)中，以每20mg叶片粉末的重量计，加入异丙醇3mL，全脂内标物100μL，三氯甲烷1.5mL，超纯水0.6mL；异丙醇的预热温度为75℃，加热时间为15min；全脂内标物的浓度为10μg/mL；涡旋时间为1h；在步骤(2)中，混合液中三氯甲烷和甲醇的体积比为2：1，BHT的浓度为0.01％；重复提取3次，以每20mg叶片粉末的重量计，每次加入混合液的体积为4mL；涡旋时间为30min；在步骤(3)中，KCl的浓度为1mol/L，以每20mg叶片粉末的重量计，加入KCl的体积为1mL；复溶加入的异丙醇的体积为1mL；用孔径0.22μm的有机滤膜进行过滤。8.根据权利要求7所述的枸杞品种耐盐性的评价方法，其特征在于，所述仪器检测采用超高效液相色谱
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串联质谱联用方法，其中，色谱系统：shimadzu UPLC LC
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30A；色谱柱：Phenomenex Kinete C18column，100
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2.1mm，2.6μm；进样量：1μL；流速：0.4mL/min；柱温：60℃；样品室温度：4℃；流动相A相：体积比为1：1：1的水、甲醇和乙腈的混合液，含5mmol/L醋酸铵；流动相B相：体积比为5：1的异丙醇和乙腈的混合液，含5mmol/L醋酸铵；梯度洗脱条件：0min
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【专利技术属性】
技术研发人员：秦小雅，尹跃，梁晓婕，赵建华，安巍，樊云芳，曹有龙，
申请(专利权)人：宁夏农林科学院枸杞科学研究所，
类型：发明
国别省市：