一种抗炎多肽及合成方法技术

本发明专利技术公开了一种抗炎多肽，其包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的多肽或其多肽的活性片段或类似物或衍生物。本发明专利技术采用上述的一种抗炎多肽及合成方法，安全无毒，可以有效的抑制炎症因子表达。效的抑制炎症因子表达。效的抑制炎症因子表达。

【技术实现步骤摘要】
一种抗炎多肽及合成方法


[0001]本专利技术涉及抗炎多肽
，尤其是涉及一种抗炎多肽及合成方法。

技术介绍

[0002]炎症是机体组织对损伤性刺激的一种防御性反应，是有害刺激和条件引起的适应性反应，例如感染和组织损伤。持续性炎症已成为多种疾病的关键病理基础，包括关节炎、炎症性肠病、动脉粥样硬化、肥胖和糖尿病等。几十年来，医学治疗试图通过拮抗负责引起炎症反应的酶、受体、基因或细胞因子的药物来抑制炎症反应。
[0003]炎症的消退被认为是一种主动和严格的调节过程，是由特定的抗炎介质控制，能够抑制炎性细胞因子的表达和清除凋亡细胞和微生物。目前，抑制炎症介质的合成或活性已成为治疗炎症的主流，而市售的抗炎药物常常伴有副作用，甚至有较严重的不良反应，如降低组织器官免疫修复能力和损伤机体等，因此，研发高效、安全、针对性强的新型抗炎药物具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种抗炎多肽及合成方法，安全无毒，可以有效的抑制炎症因子表达。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了一种抗炎多肽，抗炎多肽包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的多肽或其多肽的活性片段或类似物或衍生物。
[0006]优选的，所述多肽、类似物或衍生物的氨基酸序列具有与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列至少84.6％的相同性。
[0007]优选的，所述多肽、类似物的氨基酸序列在第7位氨基酸为丝氨酸或甘氨酸。
[0008]优选的，所述多肽、类似物的氨基酸序列在第10位的氨基酸为谷氨酰胺。
[0009]一种抗炎多肽的合成方法，步骤如下：
[0010]S1、去除芴甲氧羰酰(Fmoc)保护基团：选择合适的改性树脂合成目标肽，首先在反应器中加入20％的哌啶/二甲基甲酰胺(pip/DMF)溶液，使树脂充分浸润，然后将反应器放在摇杆上进行摇动；
[0011]S2、清洗：将反应器中溶液弃去后，在反应器中加入DMF没过树脂，然后将反应器放在摇杆上摇动，弃去滤液，清洗过程重复三次；
[0012]S3、检测树脂：将检测试剂A、B和一个树脂点放入同一个试管中，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，如果树脂的颜色发生变化，说明Fmoc基团被成功去除；
[0013]S4、耦合：将准备好的氨基酸溶液加入树脂中，然后将N,N'
‑
二异丙基碳二亚胺/二甲基甲酰胺(DIC/DMF)溶液加入到反应器中，反应器被放在摇杆上摇动；
[0014]S5、检测树脂：将检测试剂A和B以及一个树脂点放入一个试管，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，如果树脂的颜色没有变化，说明氨基酸的偶联成功；
[0015]S6、清洗：对偶联后的树脂进行清洗，方法同步骤S2；
[0016]S7、耦合：选择合适的氨基酸溶液继续进行耦合，重复步骤S4
‑
S7；
[0017]S8、检测：使用高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)方法检测多肽的纯度和分子量。
[0018]因此，本专利技术采用上述一种抗炎多肽及合成方法，安全无毒，可以有效的抑制炎症因子表达。
[0019]下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
[0020]图1是多肽的HPLC谱图和相应的峰值；
[0021]图2是多肽的MS谱图和相应的峰值；
[0022]图3是不同浓度的PEP02对人类永生化角质形成细胞(HACAT)细胞的活性、毒性检测；
[0023]图4是一定浓度的PEP02对HACAT细胞炎症模型中炎症因子的影响。
具体实施方式
[0024]以下通过附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步说明。
[0025]实施例一
[0026]一种抗炎多肽，抗炎多肽为具有如表1所示的氨基酸序列的多肽。
[0027]如图1
‑
2所示，通过HPLC和MS检测证明本专利技术的多肽(以下称PEP02)的纯度为95.3％，分子质量为1622.92。
[0028]表1多肽的性质
[0029][0030]试验测试
[0031](一)多肽的溶解
[0032]将实施例一制备的多肽粉末(每管3mg)用1mL的灭菌水进行涡旋溶解，分装成多管。注意避免反复冻融，供后续使用。
[0033](二)人永生化角质形成细胞(HACAT)的培养与铺板
[0034]人类永生化角质形成细胞(HACAT)在37℃、5％CO2、含有10％FBS和1％PS的8mL完全培养基(DMEM)的25mm培养瓶中培养。将培养瓶中的液体倒净后，用5
‑
6mL含Ca
2+
、Mg
2+
的PBS缓冲液洗涤2
‑
3次。在培养瓶中加入1mL胰酶，并于37℃5％CO2培养箱中消化1
‑
2分钟，能够看到培养瓶底部有颗粒滑动后，在培养瓶中加入2mL 10％DMEM终止消化。
[0035]吹打细胞至大部分细胞从培养瓶表面脱落。将2mL细胞悬液加入15mL离心管中，1000xg离心3min。倒出上清液，重新加入2mL 10％DMEM重悬。吸取1μL细胞加在血细胞计数板玻片上，放在显微镜下计数，细胞数乘以1000，即得每毫升悬液细胞数。将细胞悬液稀释成适量浓度，使96孔板中每孔的细胞数为8000左右。将96孔板四周加入200μL PBS缓冲液或灭菌水。将稀释好的细胞悬液加入96孔板中，每孔100μL。将96孔板在37℃5％CO2培养箱中
培养24h。
[0036](二)CCK
‑
8细胞毒性/活性检测
[0037]将96孔板中液体吸出，依次每孔加入100μL的不同浓度含多肽溶液。在37℃，5％CO2培养箱中培养24h后再向每孔添加10μL CCK
‑
8溶液。在培养箱中培养1
‑
4h，使用酶标仪在450nm和690nm波长处测量光密度值。在不同浓度的多肽溶液下，各个波长的光密度值变化不大。
[0038]试验组为向正常HACAT细胞加入PEP02，终浓度依次为0.1、1、10、25、50、100(μg/mL)，作用24h，对照组中未加入PEP02，然后通过CCK
‑
8检测PEP02对HACAT细胞的活性、毒性影响。如图3，其中数据为三次生物学重复实验的值，通过对照组与试验组比较发现，PEP02此类多肽不会对正常人细胞活力有显著影响，并且对细胞没有显著的毒性。
[0039](三)构建炎症模型
[0040]HaCaT细胞将通过TNF
‑
α处理而建立炎症模型。将20mg/mL TNF
‑
α用10％DMEM稀释成20μg/mL。除空白对照组外，其他孔依次加入100μL 20μg/mL TNF
‑
α溶液。在37℃5％CO2培养箱中处理30min本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗炎多肽，其特征在于：抗炎多肽包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的多肽或其多肽的活性片段或类似物或衍生物。2.根据权利要求1所述的一种抗炎多肽，其特征在于：所述多肽、类似物或衍生物的氨基酸序列具有与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列至少84.6％的相同性。3.根据权利要求1所述的一种抗炎多肽，其特征在于：所述多肽、类似物的氨基酸序列在第7位氨基酸为丝氨酸或甘氨酸。4.根据权利要求1所述的一种抗炎多肽，其特征在于：所述多肽、类似物的氨基酸序列在第10位的氨基酸为谷氨酰胺。5.一种抗炎多肽的合成方法，其特征在于，步骤如下：S1、去除Fmoc保护基团：选择合适的改性树脂合成目标肽，首先在反应器中加入20％的pip/DMF溶液，使树脂充分浸润，然后将反应器放在摇杆上进行摇动；S2、清洗：将反应器中溶液弃...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱绍和，林豪杰，林诤怡，赵海懿，田雪晨，
申请(专利权)人：温州肯恩大学，
类型：发明
国别省市：