一种平足蛋白拮抗多肽及其衍生物和应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种平足蛋白拮抗多肽及其衍生物和应用。本发明专利技术公开了一种平足蛋白拮抗多肽，其氨基酸残基序列如SEQ ID No:1所示。本发明专利技术公开的平足蛋白拮抗多肽衍生物为所述平足蛋白拮抗多肽氨基酸的侧链基团、氨基端或羧基端进行常规修饰得到的产物，或为所述的平足蛋白拮抗多肽连接标签得到的产物。本发明专利技术公开的平足蛋白拮抗多肽及其衍生物能够特异性结合PDPN，阻断其下游信号通路，从而抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞发生凋亡，为肿瘤等提供有效的治疗小分子药物，能够在医学与生物学领域得到广泛的应用。够在医学与生物学领域得到广泛的应用。够在医学与生物学领域得到广泛的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种平足蛋白拮抗多肽及其衍生物和应用


[0001]本专利技术涉及生物技术和生物医药领域，具体涉及一种平足蛋白拮抗多肽及其衍生物和应用。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤(tumor)的发病率在全世界疾病发展中处于优先地位，严重威胁人类的健康。黑色素瘤，是一种恶性程度极高的癌型，发病率和死亡率在全球范围内差别很大。2012年黑色素瘤的调查数据显示，黑色素瘤发病率从东南亚的0.2/10万人年到美洲的7.7/10万人年不等。
[0003]黑色素瘤是一种源于黑色素细胞的癌症，黑色素细胞是皮肤中正常产生色素的细胞类型，黑色素细胞起源于发育过程中的神经嵴。黑色素细胞从神经嵴前体分化、存活和迁移在很大程度上依赖于经典的Wnt信号通路(通过β
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catenin)、c
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kit受体酪氨酸激酶和下游转录因子，如MITF。黑色素细胞恶性转化为黑色素瘤是一个需要外源性和内源性触发因素以及肿瘤内在因素和免疫相关因素相互作用的结果。黑色素瘤发生的先决条件是在内外因素(种族与遗传、基因突变、外在创伤刺激、紫外线等)的影响下，黑色素细胞出现过度增殖和异常分化后，发展成为恶性黑色素瘤。大多数癌症通过调节这一过程的信号通路并持续激活来获得这种恶性增殖的能力。
[0004]对于黑色素瘤的患者，其黑色素细胞中BRAF基因的突变频率比正常人高出700倍。在大约50％的黑色素瘤病例中检测到BRAF突变，这是黑色素瘤中最常见的遗传变化。这种突变的高频率和黑素瘤细胞对BRAF“成瘾”使其成为极好的治疗靶标。到目前为止，两种针对BRAF的药物维莫非尼(vemurafenib)和达帕菲尼(dabrafenib)已被美国食品药品管理局(FDA)接受，并且是患有BRAF突变的晚期黑色素瘤患者的标准治疗方案。但接受靶向治疗的患者的平均总生存期(OS)为14个月，而黑色素瘤的一线化疗药物达卡巴嗪则为9个月。治疗结束后肿瘤的快速复发归因于黑色素瘤对BRAF抑制剂的内在或获得性耐药。为了克服靶向药物的耐药性，2013年批准了另一种MAPK途径抑制剂曲美替尼(MEK抑制剂)。与BRAF抑制剂单药治疗相比，BRAF和MEK抑制剂(达布拉非尼和曲美替尼或维拉非尼和考比替尼)的联合用药显示出更久的存活周期。
[0005]除了基因突变，免疫逃逸也是恶性细胞不断发展的另一种标志，是癌细胞逃避宿主免疫反应的一种策略。由于特异性趋化因子产生失败而导致淋巴细胞T募集受损，以及由于T细胞无反应性导致的这些细胞活化受到抑制，被调节性T细胞抑制或负调节受体的连接。后一种机制涉及在T细胞上表达细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA
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4)和程序性细胞死亡1(PD
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1)蛋白，和程序性死亡配体
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1，
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2(PD
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L1，
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2)在黑色素瘤细胞上。FDA已经批准了两种针对T细胞上PD
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1分子的药物用于晚期黑素瘤治疗：尼古鲁单抗和派姆单抗。由于它们在临床试验中的表现优于伊匹木单抗，因此它们已成为黑色素瘤免疫治疗的首选药物。两者的总反应率(ORR)和功效均相似。接受尼古鲁单抗治疗的患者中几乎有60％可以存活2年。FDA批准用于黑色素瘤治疗的另一种免疫疗法是talimogene laherparepvec(T
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VEC)。
它是一种工程改造的溶瘤性单纯疱疹1型病毒，其中的神经毒性因子被粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)。T
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VEC直接注射到黑色素瘤肿瘤(区域或皮肤转移)中，从而诱导黑色素瘤细胞死亡，并通过局部产生GM
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CSF产生，GM
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CSF将抗原呈递细胞募集到肿瘤微环境中，增强树突状细胞功能，并促进细胞毒性T细胞应答肿瘤相关抗原。在临床试验中，T
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VEC的客观反应率为25％，16％的患者反应持久。
[0006]Podoplanin(PDPN)又称为平足蛋白，是一种跨膜糖蛋白，主要表达于淋巴管内皮细胞，被作为淋巴管内皮和淋巴管生成标志物广泛使用。PDPN的结构是由三部分组成，胞外区是由162个氨基酸组成，含有大量的丝氨酸、苏氨酸残基，其中PLAG结构域，位于氨基酸序列的29
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54个氨基酸之间，这种序列在物种之间高度保守，PLAG区由三个重复序列组成，其中主要起作用的是PLAG3。PDPN，其主要配体表达在血小板的表面，肿瘤细胞表达的PDPN可与血小板表明的C型凝集素受体(CLEC
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2)结合，诱导血小板活化凝集，凝集的血小板可包裹在肿瘤细胞周围，在肿瘤细胞与免疫细胞之间形成一道屏障，让肿瘤细胞免受免疫细胞的攻击。另外，血小板与肿瘤细胞结合后，激活的血小板也可能会分泌许多细胞因子，来影响肿瘤微环境当中肿瘤细胞和免疫细胞的活性。近年来研究发现，PDPN蛋白也表达于一些恶性肿瘤组织，包括黑色素瘤、肺鳞癌、乳腺癌、脑胶质瘤等，PDPN在多种肿瘤细胞表面表达上调，并且与肿瘤的发生发展及侵袭转移有密切关系，PDPN蛋白在不同恶性肿瘤中的表达差异对于恶性肿瘤的诊断、治疗及预后有着良好的临床指导意义。目前，以PDPN蛋白为结合位点，用于预防和/或治疗恶性肿瘤的生物类多肽药物报道甚少。
[0007]1985年由Smith等人提出噬菌体展示技术(phage display techniques,PDT)；1988年，噬菌体展示肽库首次构建成功；从1990年至今，噬菌体展示肽库得到快速发展和应用。噬菌体展示技术的原理是将外源DNA通过基因工程技术克隆到适当的噬菌体载体上，使外源DNA片段对应的表达产物融合在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，呈现在噬菌体表面，被展示的多肽或蛋白可保持相对的空间结构和生物活性；然后利用靶分子，采用适当的淘洗方法洗去非特异结合的噬菌体，最终从噬菌体文库中筛选出能结合靶分子的目的噬菌体；外源多肽或蛋白质表达在噬菌体的表面，而其编码基因作为噬菌体基因组中的一部分可通过噬菌体DNA序列测序出来。该技术的显著特点是建立了基因型和表现型之间的对应关系。噬菌体展示技术适合用于全人源抗体药物的制备。治疗类风湿关节炎的抗肿瘤坏死因子α的Humira是第一个应用噬菌体抗体库技术生产的并被美国食品药品管理局批准的全人源抗体药物。到2014为止，被美国食品药品管理局批准的应用噬菌体抗体库技术生产的抗体有6个，且同时有30种以上的相关药物处于临床试验阶段。除筛选制备型抗体外，噬菌体抗体库技术也能被用于筛选相应抗原。噬菌体展示技术抗体库因具有高库容、高效方便以及灵活筛选等优势，在生命科学的许多领域得到广泛应用，尤其在肿瘤诊断和肿瘤抗体药物制备等领域，可以作为筛选肿瘤表面抗原的靶向抗体工具。

技术实现思路

[0008]为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种由噬菌体展示库筛选得到的PDPN拮抗多肽，该拮抗多肽与受体PDPN具有特异性高亲和力，能够通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种平足蛋白拮抗多肽，其特征在于，所述平足蛋白拮抗多肽的氨基酸残基序列如SEQ ID No:1所示。2.一种平足蛋白拮抗多肽衍生物，其特征在于，所述平足蛋白拮抗多肽衍生物为权利要求1所述的平足蛋白拮抗多肽氨基酸的侧链基团、氨基端或羧基端进行常规修饰得到的产物；或为权利要求1所述的平足蛋白拮抗多肽连接标签得到的产物；所述常规修饰为氨基化、酰胺化、羟基化、羧基化、羰基化、烷基化、乙酰化、磷酸化、酯化、糖基化、环化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇修饰和固定化修饰中的一种以上；所述标签为His6标签、GST标签、EGFP标签、MBP标签、Nus标签、HA标签、IgG标签、FLAG标签、c
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Myc标签和ProfinityeXact标签中的一种以上。3.编码权利要求1所述的平足蛋白拮抗多肽或权利要求2所述的平足蛋白拮抗多肽衍生物的多聚核苷酸。4.含有权利要求3所述多聚核苷酸的载体。5.含有权利要求4所述载体的宿主细胞或宿主菌。6.一种药物组合物，包含权利要求1所述平足蛋白拮抗多肽和/或权利要求2所述平足蛋白拮抗多...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄来强，冯春燕，代小勇，王坤，王丽君，林高扬，董璐，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：