一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条、检测卡及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条、检测卡及其应用，通过在试纸条中的结合垫和层析膜之间增加阻流片，可以控制样本在结合垫上的流动时间；并在此基础上，设计了一种磷脂酶A2侧向层析检测卡，其壳体上设有液流控制开关，阻流片的活动端通过壳体上的液流控制开关而穿出，液流控制开关可以在荧光微球标记抗体和待测物的识别反应完成后启动后续的分析过程。通过实验发现，采用本发明专利技术侧向层析装置设计的磷脂酶A2检测卡，相比常规的侧向免疫层析检测卡的检测限更低，荧光信号更强，预示其具有广阔的临床应用前景。其具有广阔的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条、检测卡及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条、检测卡及其应用。

技术介绍

[0002]磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)是一种能催化磷脂甘油分子上二位酰基的水解酶，亦是花生四烯酸(AA)、前列腺素及血小板活化因子(PAF)等生物活性物质生成的限速酶，所产生的脂质介质在炎症和组织损伤时膜通道的活化、信息传递、血流动力学及病理生理过程中，以及在调节细胞内外代谢中起关键性作用。在急性胰腺炎、脓毒休克、创伤及多脏器功能衰竭(MSOF)患者血清中PLA2活性升高。在多发性创伤时，PLA2活性变化或许是导致MSOF组织损伤过程中的早期信号参数。
[0003]侧向层析分析试纸(Lateral flow assay strip，LFAS)，是以微孔层析膜为固相载体，通过各种信号物标记抗原或者抗体，基于毛细管作用进行抗原抗体反应对待测样品进行检测分析技术。自1980年代初期专利技术以来，已经得到了市场的广泛认可和应用。基本原理是样品中的液体在纸的毛细作用力驱动下在膜上运动，样品中的分析物与LFAS各组成部分进行混合，完成反应，形成检测信号，最后通过专门的分析仪或者肉眼对检测结果进行判读。具有反应快速、操作简便、分析简单的优点。
[0004]现有的LFAS是将样品垫、结合垫、层析膜(包含检测线和质控线)和吸水纸几部分按次序固定在塑料底板上，然后置于数量卡壳内组成完成。在吸水纸提供的毛细层析力的作用下，样本加入样品垫进行样本的前期处理，然后与结合垫上包被的信号探针进行反应，最后到达层析膜并在层析膜上发生特异性的识别反应形成特异性检测信号，通过信号的强弱变化显示出样本中待测物的浓度。传统的LFAS的分析过程是加入样本到信号的产生，中间不存在隔断，为一步反应。但是在一些物质检测过程中，信号探针和待测物的结合能力有限，更长的结合时间能有效的提高检测方法的灵敏度。为了提高待测物与信号探针的结合时间，往往是将LFAS的结合垫部分单独拿出，增加一个样本反应皿，将信号探针置于皿中。检测的整体过程分为两步完成，第一步将样本置于样本反应皿中，等待一定时间，第二步将反应完全完成后的液体从样本反应皿中取出，加入到LFAS，最后完成检测分析。两步分析虽然解决了信号探针与待测物结合能力弱带来的低灵敏度问题，但是两步操作增加了操作的复杂性，增加了操作误差的可能性，并且使得整个检测系统更加繁琐、试纸条的制作成本更高。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的目的之一在于提供一种可进行液流控制的磷脂酶A2侧向层析检测试纸条。
[0006]包括如下技术方案：
[0007]一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，其包括底板以及沿待检测样品流动方向依次
相互搭接地设置在底板上的样品垫、结合垫、阻流片、层析膜和吸水纸；所述结合垫上具有标记抗体，所述标记抗体为荧光微球标记的磷脂酶A2鼠源单克隆抗体
‑
1；所述层析膜上设有相间隔的由磷脂酶A2的鼠源单克隆抗体
‑
2包被形成的检测线和由羊抗鼠IgG包被形成的质控线；所述阻流片包括固定端以及与所述固定端相对设置活动端，所述固定端为阻流片沿试纸条各部位搭接方向并搭接于底板上的一端，其中固定端与结合垫和/或层析膜存在重叠。
[0008]本专利技术的目的之一还在于提供一种磷脂酶A2侧向层析检测卡。
[0009]包括如下技术方案：
[0010]一种磷脂酶A2侧向层析检测卡，其包括上述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条和壳体，所述壳体上设有加样孔、液流控制开关和可视窗。
[0011]本专利技术的目的之一还在于提供一种磷脂酶A2的检测方法。
[0012]包括如下技术方案：
[0013]将待测样本加入上述脂酶A2侧向层析检测卡的加样孔中；
[0014]5min后拔出上述脂酶A2侧向层析检测卡的阻流片，按压其液流控制开关，5min后使用荧光读取仪记录检测线和质控线荧光信号；
[0015]根据荧光信号判读检测结果。
[0016]本专利技术的专利技术人设计了一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，通过在试纸条中的结合垫和层析膜之间增加阻流片，可以控制样本在结合垫上的流动时间；并在此基础上，设计了一种磷脂酶A2侧向层析检测卡，其壳体上设有液流控制开关，阻流片的活动端通过壳体上的液流控制开关而穿出，液流控制开关可以在荧光微球标记抗体和待测物的识别反应完成后启动后续的分析过程。通过实验发现，采用本专利技术可液流控制的磷脂酶A2侧向层析检测卡进行磷脂酶A2检测时，相比常规的侧向免疫层析检测卡，其检测限更低，荧光信号更强；与样品池侧向免疫层析检测卡相比检测线性范围基本一致，并且本专利技术可液流控制的磷脂酶A2侧向层析检测卡操作更简便，还能有效避免样品池侧向免疫层析检测卡因外置反应皿而增加的操作误差和制作成本，预示其具有广阔的临床应用前景。
附图说明
[0017]图1为实施例1中本专利技术可液流控制的磷脂酶A2侧向层析检测卡示意图，其中A为磷脂酶A2侧向层析检测试纸条示意图；B为磷脂酶A2侧向层析检测卡的外壳上盖示意图；C为磷脂酶A2侧向层析检测卡的未盖外壳上盖示意图；D为磷脂酶A2侧向层析检测卡组装后示意图；
[0018]其中标记说明为：1、样品垫；2、结合垫；3、阻流片；4、层析膜；5、检测线；6、质控线；7、吸水垫；8、底板；9、卡壳；10、液流控制开关。
[0019]图2为对比例1中采用常规侧向免疫层析检测卡制备的磷脂酶A2检测卡的示意图，其中A为常规侧向免疫层析试纸条示意图；B为常规侧向免疫层析检测卡的外壳上盖示意图；C为常规侧向免疫层析检测卡的未盖外壳上盖示意图；D为常规侧向免疫层析检测卡的组装后示意图；
[0020]其中标记说明为：1、样品垫；2、结合垫；3、层析膜；4、检测线；5、质控线；6、吸水垫；7、底板；8、卡壳。
[0021]图3为对比例2中采用样品池侧向免疫层析检测卡制备的磷脂酶A2检测卡的示意图，其中A为样品池侧向免疫层析试纸条示意图；B为样品池侧向免疫层析检测卡的外壳上盖示意图；C为样品池侧向免疫层析检测卡的未盖外壳上盖示意图；D为样品池侧向免疫层析检测卡的组装后示意图；
[0022]其中标记说明为：1、反应池；2、样品垫；3、空白结合垫；4、层析膜；5、检测线；6、质控线；7、吸水垫；8、底板；9、卡壳。
[0023]图4为实施例2中三种检测卡分别用0、10、50、100、250、500、1000ng/mL标准磷脂酶A2溶液检测的检测线荧光强度对比统计图；
[0024]图5为实施例2中本专利技术可液流控制的磷脂酶A2侧向层析检测卡用0、10、50、100、250、500ng/mL标准磷脂酶A2溶液检测结果图，其中A为原始曲线图，B为拟合后的标准曲线图。
[0025]图6为实施例2中采用常规侧向免疫层析检测卡制备的磷脂酶A2检测卡的检测结果图，其中A为原始曲线图，B为拟合后的标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，其特征在于，所述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条包括底板以及沿待检测样品流动方向依次相互搭接地设置在底板上的样品垫、结合垫、阻流片、层析膜和吸水纸；所述结合垫上具有标记抗体，所述标记抗体为荧光微球标记的磷脂酶A2鼠源单克隆抗体
‑
1；所述层析膜上设有相间隔的由磷脂酶A2的鼠源单克隆抗体
‑
2包被形成的检测线和由羊抗鼠IgG包被形成的质控线；所述阻流片包括固定端以及与所述固定端相对设置活动端，所述固定端为阻流片沿试纸条各部位搭接方向并搭接于底板上的一端，其中固定端与结合垫和/或层析膜存在重叠。2.根据权利要求2所述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，其特征在于，所述阻流片为疏水型薄膜，所述疏水性薄膜的材质包括但不限于聚乙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯醇、聚丙烯、聚丙烯酸、聚丁烯、聚异丁烯、聚砜、聚甲醛、聚酰胺、聚碳酸酯、聚乳酸、聚四氟乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、环氧树脂、酚醛树脂、聚氨酯。3.根据权利要求1
‑
2任一项所述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，其特征在于，所述阻流片的固定端与结合垫和层析膜存在重叠，其与结合垫重叠1mm
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3mm，并与层析膜重叠2mm
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5mm。4.根据权利要求3所述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，其特征在于，所述阻流片沿待测样品流动方向的长度为15mm
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25mm。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条，其特征在于，所述磷脂酶A2侧向层析检测试纸条中，所述荧光微球标记的磷脂酶A2鼠源单克隆抗体
‑
1浓度为0.05mg/ml
‑
0.15mg/ml；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹东林，肖威，方晓林，杨华文，林茂锐，张熙，
申请(专利权)人：广东省第二人民医院广东省卫生应急医院，
类型：发明
国别省市：