一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用，属于单克隆抗体技术领域。本发明专利技术针对肝螺杆菌CdtB蛋白检测空白的问题，用具有良好免疫原性的肝螺杆菌CdtB第19位至273位氨基酸区域经重组表达免疫动物，筛选得到分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D9，保藏编号为CCTCCNO：C2021140。杂交瘤细胞株2D9分泌的肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体可特异性结合肝螺杆菌CdtB蛋白，具具有亲和力高、特异性好的特点，且为小鼠IgG1亚型，为利用免疫学检测方法检测或诊断肝螺杆菌的感染提供了基础，为肝螺杆菌相关疾病的研究、新型诊断试剂的研制提供有力的研究基础。研究基础。研究基础。

【技术实现步骤摘要】
一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用


[0001]本专利技术属于单克隆抗体
，具体涉及一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用。

技术介绍

[0002]肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)是一种小鼠病原体，可在近交系和基因工程小鼠中诱导慢性活动性肝炎、肝细胞癌、结肠炎和炎症性肠病。虽然该菌的自然宿主是鼠类，但近年来，从原发性肝癌患者组织中检测到针对肝螺杆菌16s rRNA的特异性片段，提示着人类肝胆疾病可能与肝螺杆菌感染存在一定的关系。从遗传学上看，肝螺杆菌与人类细菌性病原体幽门螺杆菌和空肠弯曲杆菌密切相关。因此，肝螺杆菌常被用于制备研究人类相关的动物模型，解析其致病机理。
[0003]对肝螺杆菌致病机理研究主要集中在外膜蛋白，结构蛋白和毒力因子。已发现多种致病性革兰氏阴性菌可产生细胞致死性肿胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)，包括弯曲杆菌、大肠杆菌、嗜血杆菌、伤寒沙门氏菌和志贺氏菌，该毒素能通过损伤DNA和阻断细胞周期，最终导致细胞肿胀、死亡。肝螺杆菌CDTs是易感鼠胃肠道持续感染和引起黏膜炎症或肝损伤的必需因子。
[0004]肝螺杆菌的细胞致死性肿胀毒素属于AB2型毒素。AB2三聚体由一个活性亚基(CdtB)和两个结合亚基(CdtA和CdtC)组成。活性亚基CdtB具有类DNaseI活性，而CdtA和CdtC是将CdtB传递进入靶细胞的结合蛋白。将CdtB转移到细胞核会对DNA产生基因毒性效应，引发DNA断裂，导致细胞周期停止和最终的细胞死亡。同时，作为肝螺杆菌的主要毒力因子，CdtB还可以刺激肠道和肝脏炎症的发生，引发肝纤维化和肝硬化。
[0005]对于肝螺杆菌的检测，最常见的方法包括PCR、免疫印迹技术、免疫组化法等。无论采用何种免疫学检测方法，都需要特异、敏感的检测抗体。现在国内外都没有出现肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的报道。因此，需要制备亲和力、特异性好的单克隆抗体，为肝螺杆菌相关疾病的研究、新型诊断试剂的研制提供有力的研究基础。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，具有较强的特异性和敏感性，适用于免疫学检测。
[0007]本专利技术的目的还在于提供一种分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0008]本专利技术的目的还在于提供一种基于免疫学检测的试剂盒，为肝螺杆菌相关疾病的诊断和检测提供基础。
[0009]本专利技术提供了一种分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D9，保藏编号为CCTCC NO：C2021140。
[0010]本专利技术提供了一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，由所述杂交瘤细胞株2D9分泌得到。
[0011]优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体为小鼠IgG1亚型。
[0012]优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体与肝螺杆菌CdtB蛋白特异性结合。
[0013]优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0014]优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白为利用重组原核表达载体进行重组表达获得的肝螺杆菌CdtB重组蛋白；
[0015]所述重组原核表达载体包括pET
‑
NUSA
‑
6His
‑
TEV
‑
CdtB载体。
[0016]本专利技术提供了一种基于免疫学检测技术的肝螺杆菌诊断和/或检测用试剂盒，包括所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体。
[0017]优选的，包括肝螺杆菌CdtB蛋白；
[0018]所述肝螺杆菌CdtB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0019]优选的，所述试剂盒为ELISA检测试剂盒；
[0020]所述ELISA检测试剂盒包括包被肝螺杆菌CdtB重组蛋白的酶标板和所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体。
[0021]本专利技术提供了所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体和/或肝螺杆菌CdtB重组蛋白在制备免疫诊断和/或免疫检测肝螺杆菌的试剂盒中的应用；
[0022]所述肝螺杆菌CdtB重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0023]优选的，所述免疫检测包括以下检测技术中的一种或几种：ELISA检测、蛋白免疫印迹、免疫荧光检测和免疫组化检测。
[0024]本专利技术提供了一种分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D9，保藏编号为CCTCC NO：C2021140。所述杂交瘤细胞株2D9是由肝螺杆菌CdtB蛋白作为抗原免疫动物产生的脾细胞与SP2/0细胞经过融合、杂交筛选获得。所述杂交瘤细胞株2D9经过3次亚克隆后稳定分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，且所述抗体能够与肝螺杆菌CdtB蛋白抗原发生特异性亲和反应，亲和性较高。
[0025]同时，本专利技术提供的杂交瘤细胞株2D9经过传代40～50代后，分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的能力依旧稳定，说明本专利技术获得了一株稳定分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
附图说明
[0026]图1为为实施例1中肝螺杆菌CdtB基因的PCR扩增电泳图；M:DL5000；1:CdtB基因的扩增；
[0027]图2为实施例1中重组质粒pET
‑
6His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB酶切验证图；M:DL2000；1:BamHI+HindIII酶切；
[0028]图3为实施例1中重组菌BL21(pET
‑
His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB)的SDS
‑
PAGE验证图；1：未经IPTG诱导的BL21(pET
‑
6His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB)裂解液；2：经IPTG诱导的BL21(pET
‑
6His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB)裂解液；3：未经IPTG诱导的BL21(pET
‑
6His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB)裂解液上清；4：经IPTG诱导的BL21(pET
‑
6His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB)IPTG裂解液上清；5：未经IPTG诱导的BL21(pET
‑
6His
‑
NUSA
‑
TEV
‑
CdtB)重组菌裂解液沉淀；6：经IPTG诱导的BL21(pET
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D9，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：C2021140。2.一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株2D9分泌得到。3.根据权利要求2所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体为小鼠IgG1亚型。4.根据权利要求2或3所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体与肝螺杆菌CdtB蛋白特异性结合；所述肝螺杆菌CdtB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。5.根据权利要求4所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述肝螺杆菌CdtB蛋白为利用重组原核表达载体进行重组表达获得的肝螺杆菌CdtB重组蛋白；所述重组原核表达载体包括pET
‑
NUSA
‑
6His
‑
TEV
...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱立麒，张琼杰，张泉，钱淼，金珊昊，李辉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：