一种同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法技术

本发明专利技术提供了一种同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法，属于分析技术领域。本发明专利技术方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%甲酸

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法


[0001]本专利技术涉及分析
，具体涉及同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法。

技术介绍

[0002]随着经济的快速发展，人们生活水平的不断提高，各种疾病的混合感染也越来越常见，药物的广泛使用以及大量滥用，导致各种药物残留也越来越严重，也愈来愈受到人们的重视。在目前对兽药残留及其制剂检测中多以单一药物含量测定，在进行多种不同类型的化合物的含量测定时，则需分别进行检测，从而存在操作繁琐、耗时耗力等缺点。
[0003]日常养殖生产中，呼吸道疾病最为常见，而畜禽专用抗生素中治疗呼吸道疾病通常选用替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠等治疗，替米考星是由泰乐菌素半合成的大环内酯类畜禽专用抗生素，对畜禽呼吸道疾病如胸膜肺炎、巴氏杆菌病、鸡霉形体病、霉形体及螺旋体等均有抑制作用。氟苯尼考是动物专用抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、牛羊及禽的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著。磺胺间甲氧嘧啶钠是体内外抗菌作用最强的磺胺药，对大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都有较强抑制作用，主要用于敏感菌、弓形体、附红细胞体所引起的各种疾病(如高热病、链球菌病、弓形虫病、附红细胞体病、传染性胸膜肺炎、巴氏杆菌性肺炎等)及其混合感染。
[0004]目前也存在一些同时测定几种药物的方法，如CN106226433A一种氟苯尼考溶液中替米考星残留量的测定方法，但只能同时测定两种方法，并且对仪器设备的要求高，在一些生产型企业中并不适用，目前的专利技术方法同时解决了替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠三种抗生素的测定，也满足日常生产企业的检测仪器设备。该方法主要难度在于流动相的比例及流速的设定与筛选，替米考星在流动相中对乙腈的比例比较敏感，乙腈比例或流速过高或过低都会导致替米考星难于洗脱，导致峰型宽大或低矮，且影响替米考星反式异构体(两个不完全分开的峰)与替米考星顺式异构体两者的保留时间，不能完全分开，从而不能准确测定其含量，因此在色谱条件的筛选中要严格控制其流速及比例。磺胺间甲氧嘧啶钠及其制剂在目前含量测定中通常选用滴定方法，该方法对于低含量及辅料物质干扰影响大，测定不准确，同时在一些复方制剂中滴定方法不适用。由于在该色谱条件中适合对氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠的洗脱分析，遂将目前治疗呼吸道疾病畜禽专用抗生素进行同时测定。因此，一种同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法，能及时有效的解决实际问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种操作简单，成本低的能同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法。
[0006]同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法，包
括以下步骤：
[0007]步骤1)样品处理：将采集的肉品加入提取液中，研磨后取上清液，固相萃取柱萃取，提取液进行提取，过滤，得到供试品溶液；
[0008]步骤2)待测样品测试分析：取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中各抗生素的含量；色谱条件如下：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，以无机相和有机相的混合溶液作为流动相，无机相与有机相的体积比为65～90︰10～35，流速0.4～0.8mL/min，检测波长为 200～300nm，柱温：25～40℃。
[0009]优选的，研磨后12000r/pm离心获得上清液；
[0010]优选的，固相萃取柱为5μm；
[0011]优选的，过滤设备孔径为0.22μm。
[0012]具体的，所述无机相为0.1％V/V甲酸溶液。
[0013]其中，所述有机相为甲醇、乙腈、正丁醇、正丙醇或异丙醇。
[0014]优选的，所述无机相为0.1％V/V甲酸溶液，所述有机相为乙腈。
[0015]进一步的，所述流速如下：0～15min的流速为0.8mL/min，15～25min的流速为0.6mL/min，25～52min的流速为0.4mL/min。
[0016]具体的，所述洗脱方式如下：0～3min无机相与有机相的体积比为85︰15， 3～15min无机相与有机相的体积比为85︰15，15～16min无机相与有机相的体积比为65︰35，16～25min无机相与有机相的体积比为65︰35，25～26min无机相与有机相的体积比为90︰10，26～51min无机相与有机相的体积比为90︰ 10，51～52min无机相与有机相的体积比为85︰15。
[0017]进一步的，所述检测波长如下：0～15min的检测波长为270nm，15～25min 检测波长为224nm，25～52min的检测波长为280nm。
[0018]优选的，所述柱温为35℃。
[0019]进一步的，本专利技术方法在样品测试前还包括标准曲线绘制，其操作如下：称取替米考星、氟苯尼考、磺胺间甲氧嘧啶钠，用流动相溶解，滤去杂质，分别配置成250.00、125.00、50.00、25.00、12.50、5.00、1.25μg
·
mL
‑1的不同浓度对照品溶液，相同色谱条件进行测定，以浓度X为横坐标，峰面积y为纵坐标，作图绘制标准曲线，得到的替米考星和氟苯尼考的线性回归方程与相关系数R。
[0020]具体的，所述替米考星的线性回归方程为y＝6
×
107x+44558，线性范围 5.23～245.20μg。
[0021]具体的，所述氟苯尼考的线性回归方程为y＝7
×
107x+19244，线性范围 3.26～251.00μg。
[0022]具体的，所述磺胺间甲氧嘧啶钠的线性回归方程为y＝6
×
107x+21586，线性范围4.23～251.40。
[0023]本专利技术的有益效果在于：
[0024]1)本专利技术提供的同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠类抗生素含量的高效液相色谱分析方法，以廉价易得的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％甲酸溶液
‑
乙腈为流动相进行洗脱，在52min内可实现替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠类抗生素的完好分离与定量分析；
[0025]2)本专利技术提供的同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠类抗生素含量的高效液相色谱分析方法的专属性强、精密度高、稳定性好、准确度高，操作简便，试剂与耗材价廉易得，适用于医药与食品行业中对产品中多种抗生素的质量控制与分析，可有效地节约检测成本与时间。
附图说明
[0026]图1为混合对照品溶液的色谱图。
[0027]图2组织样品色谱图。
具体实施方式
[0028]下面结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.同时测定替米考星、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶钠含量的液相色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1）样品处理：将采集的肉品加入提取液中，研磨后取上清液，固相萃取柱萃取，提取液进行提取，过滤，得到供试品溶液；步骤2）待测样品测试分析：取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中各抗生素的含量；色谱条件如下：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，以无机相和有机相的混合溶液作为流动相，无机相与有机相的体积比为65～90︰10～35，流速0.4～0.8 mL/min，检测波长为200～300nm，柱温：25~40℃；优选的，研磨后12000 r/pm离心获得上清液；优选的，固相萃取柱为5μm；优选的，过滤设备孔径为0.22μm。2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述无机相为0.1% V/V 甲酸溶液。3.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述有机相为甲醇、乙腈、正丁醇、正丙醇或异丙醇。4.如权利要求2或3所述方法，其特征在于，所述无机相为0.1% V/V甲酸溶液，所述有机相为乙腈。5.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述流速如下：0~15 min的流速为0.8 mL/min，15~25 min的流速为0.6 mL/min，25~52 min的流速为0.4 mL/min。6.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述洗脱方式如下：0~3 min 无机相与有机相的体积比为85︰15，3~15 min 无机相与有机相的体积比为85︰15，15~16min 无机相与有机相的体积比为65︰35，16~...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍涛，李成洪，唐达，邓余，付利芝，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：