重组人胶原蛋白多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组人胶原蛋白多肽及其应用。本发明专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示或者与SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的氨基酸序列。本发明专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽可以用于抑制血管内皮细胞的生长，可以促进细胞增殖和促进细胞粘附。附。附。

【技术实现步骤摘要】
重组人胶原蛋白多肽及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种重组人胶原蛋白多肽及其 应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是动物体内含量最为丰富的蛋白质之一，广泛地分布在哺乳动 物的皮肤、骨骼、肌腱、韧带、软骨和血管之中，它是结缔组织的主要蛋白 成分，也是细胞外基质的重要组成成分。人体中胶原蛋白含量占总蛋白的 25％～30％，并且富含人体需要的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸。胶 原蛋白这种结构性蛋白起着保护机体、支撑器官的重要作用。这使得胶原蛋 白在医药、食品、美容以及生物材料等方面有很广泛的应用，近年来一直是 大家研究的热点。
[0003]胶原蛋白广泛存在于细胞外基质，其结构为三股多肽链缠绕形成的三螺 旋。胶原蛋白的类型因其三条α链的组合不同而各不相同。到目前为止，已 经发现了遗传学上截然不同的胶原蛋白类型有26种。大致可以分为以下几 类：纤维形成胶原、基底膜胶原、微纤维胶原、锚原纤维、跨膜区胶原、未 完全定性胶原。其中主要的类型有：I型胶原蛋白，其三螺旋组成主要是α1、 α2链，在骨骼、肌腱、皮肤、角膜和韧带中含量最高；II型胶原蛋白，其三 螺旋组成是[α1(II)]2，存在于透明软骨、玻璃体和椎间盘等组织中；III型 胶原蛋白，其三螺旋组成是[α1(III)]3，主要分布在胚胎、胃肠道、牙周膜； IV型胶原蛋白，其三螺旋组成形式是[α1(IV)]3，[α1(IV)]2α2(VI)，[α2(I)]3， 是基底膜组成成分，羟赖氨酸含量特别多，含糖量比较高，既含有4
‑/>羟脯氨 酸又含有3
‑
羟脯氨酸。
[0004]胶原蛋白是基底膜、骨骼、软骨等结构的支架，可以用于烧伤、创伤和 眼角膜疾病的治疗。胶原蛋白在伤口愈合、器官发育和组织修复等方面扮演 着重要角色，临床上的应用包括：美容整形用的医用胶原注射剂，烧伤、创 伤治疗的胶原膜，创伤止血的胶原蛋白止血海绵等。胶原蛋白是皮肤细胞外 基质的重要组成成分，具有保湿、补充皮肤胶原、抗衰老等方面的功效。由 于胶原蛋白具有以上生物学功能，所以胶原蛋白在医药卫生领域(如止血、 美容、药物传递、创伤修复、药物缓释等)有着广泛的应用。
[0005]目前胶原蛋白主要来源方式是从动物皮肤、骨头、等组织中采用酸、碱 性水解和酶水解的方法提取得到。由于来源于动物组织，对于动物源疾病或 者人传染疾病有交叉感染的风险。随着基因工程技术的日益成熟，采用分子 生物学方法制备重组胶原蛋白逐渐替代了从动物组织中提取胶原蛋白的趋 势。在原核或真核表达系统中生产的重组胶原蛋白具有比较好的细胞粘附性、 组织相容性、皮肤透过性、稳定性、可促细胞形成和生长，与传统动物胶原 蛋白相比较有其独特的优越性(无病毒隐患、水溶性、低排异反应等)。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供了一种重组人胶原蛋白多肽，所述的重组人胶原 蛋白多肽可用于抑制血管生长因子，调节内皮细胞可塑性、制备促细胞生长 剂、制备促细胞粘附剂中。可广泛应用于生物化工以及化妆品领域。
[0007]本专利技术具体技术方案如下：
[0008]1.一种重组人胶原蛋白多肽，所述重组人胶原蛋白多肽的氨基酸序列如 SEQ ID NO:2所示或者是与SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的氨基酸序列。
[0009]2.一种核酸分子，其中，所述核酸分子编码项1所述的重组人胶原蛋白 多肽，优选所述核酸分子用标签标记，进一步优选，所述标签为6*His、GST、 MBP或SUMO。
[0010]3.一种载体，其中，所述载体包含项2所述的核酸分子，优选所述载体 为pPIC9k、pPICZαA、pGAPZA、pHIL
‑
S1或pYAM75P。
[0011]4.一种宿主细胞，其包含项3所述的载体。
[0012]5.根据项4所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为酵母宿主细胞，优 选为毕赤酵母，进一步优选为巴斯德毕赤酵母。
[0013]6.一种制备项1所述重组人胶原蛋白多肽的方法，其包含下述步骤：
[0014]将项5或6所述的宿主细胞进行表达，然后进行分离纯化得到。
[0015]7.根据项6所述的方法，其中，所述分离纯化的方法为Ni
‑
镍亲和层析 法、还原型谷胱甘肽亲和层析法、麦芽糖亲和层析法或SUMO亲和层析法
[0016]8.项1所述的重组人胶原蛋白多肽或项2或3所述的核酸分子所编码的 重组人胶原蛋白多肽或由项4或5所述的载体所表达的重组人胶原蛋白多肽 或由项6或7所述的宿主细胞生产的重组人胶原蛋白多肽在生物化工或化妆 品中的应用。
[0017]9.一种抑制血管内皮细胞生长的活性剂或促细胞增殖剂或促细胞粘附 剂，其包含项1所述的重组人胶原蛋白多肽或项2或3所述的核酸分子所编 码的重组人胶原蛋白多肽或由项4或5所述的载体所表达的重组人胶原蛋白 多肽或由项6或7所述的宿主细胞生产的重组人胶原蛋白多肽。
[0018]10.项1所述的重组人胶原蛋白多肽或项2或3所述的核酸分子所编码 的重组人胶原蛋白多肽或由项4或5所述的载体所表达的重组人胶原蛋白多 肽或由项6或7所述的宿主细胞生产的重组人胶原蛋白多肽在制备抑制血管 内皮细胞生长的活性剂、促细胞增殖剂或促细胞粘附剂中的应用。
[0019]专利技术的效果
[0020]本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽，可以用于抑制血管内皮细胞的生长， 可以促进细胞增殖和促进细胞粘附。
附图说明
[0021]图1是毕赤酵母表达载体和重组人胶原蛋白多肽表达载体示意图。
[0022]图2是所得到的重组胶原蛋白表达以及纯化示意图，其中，M是蛋白 Marker，1为重组蛋白表达，2为空载体表达，3为流穿，4为NTA
‑
10mM 洗杂，5为NTA
‑
40mM洗杂，6为NTA
‑
200mM洗脱，7为超滤浓缩后蛋白。
[0023]图3
‑
1是本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽与市售胶原蛋白对血管内皮 细胞抑制作用的示意图。
[0024]图3
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2是本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽对血管内皮细胞抑制率的示 意图。
[0025]图4
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1是本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽与市售胶原蛋白促细胞增殖 作用的示意图。
[0026]图4
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2是本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽促细胞增殖的示意图。
[0027]图5
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1是本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽与市售胶原蛋白促细胞粘附 作用的示意图。
[0028]图5
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2是本专利技术所述的重组人胶原蛋白多肽促细胞粘附的示意图。
具体实施方式
[0029]下面结合附图所描述的实施方式对本专利技术做以详细说明，其中所有附图 中相同的数字表示相同的特征。虽然附图中显示了本专利技术的具体实施例，然 而应当理解，可以以各种形本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人胶原蛋白多肽，所述重组人胶原蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示或者是与SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的氨基酸序列。2.一种核酸分子，其中，所述核酸分子编码权利要求1所述的重组人胶原蛋白多肽，优选所述核酸分子用标签标记，进一步优选，所述标签为6*His、GST、MBP或SUMO。3.一种载体，其中，所述载体包含权利要求2所述的核酸分子，优选所述载体为pPIC9k、pPICZαA、pGAPZA、pHIL
‑
S1或pYAM75P。4.一种宿主细胞，其包含权利要求3所述的载体。5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为酵母宿主细胞，优选为毕赤酵母，进一步优选为巴斯德毕赤酵母。6.一种制备权利要求1所述重组人胶原蛋白多肽的方法，其包含下述步骤：将权利要求5或6所述的宿主细胞进行表达，然后进行分离纯化得到。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述分离纯化的方法为Ni
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【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，范翠英，段志广，贺婧，严建亚，
申请(专利权)人：陕西巨子生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：