一种制备慢病毒的方法及装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及慢病毒制备领域，具体涉及一种制备慢病毒的方法及装置。本发明专利技术公开了一种制备慢病毒的装置，通过增设装有培养基的储液袋，不需要从细胞工厂泵入培养基，使得转染复合物与培养基混合在储液袋中进行，进一步充分混合，提高了操作效率，并能起到一定的缓存作用。另外，还设置了废液容器，形成一套封闭的混合装置，降低了环境污染的风险。降低了环境污染的风险。降低了环境污染的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种制备慢病毒的方法及装置


[0001]本专利技术涉及慢病毒制备领域，具体涉及一种制备慢病毒的方法及装置。

技术介绍

[0002]磷酸钙法制备慢病毒，较普遍的方式为在一个容器内，将去离子水、氯化钙、质粒混合后，向内缓慢加入HBS溶液，同时通过磁力搅拌的方式使其混合均匀，形成含磷酸钙
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DNA复合物，然后将转染复合物加入细胞工厂中，通过晃动细胞工厂将内部培养基与转染复合物混匀。由于混合转染试剂形成磷酸钙
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DNA复合物的过程，是开放的环境(生物安全柜内，容器敞口)，添加质粒等原料的时候，容易引入微生物，存在污染风险。转染复合物需转移进细胞工厂内与培养基混匀，此步有两种方式，一种为将转染混合液直接加入细胞工厂中，通过缓慢晃动细胞工厂，达到转染复合物与培养基混合均匀的目的，因细胞工厂结构特殊，转染复合物与培养基可能存在混合不均匀的情况，造成细胞工厂内每一层转染复合物分布不均，同时，因慢病毒制备使用的生产细胞为HEK293T细胞，贴壁性不强，摇晃混合转染复合物与培养基，可能会导致细胞脱落，影响质粒的转染效率。另一种方式为将转染复合物加入到一个简单的换液装置中，然后将细胞工厂与此装置连通，将细胞工厂内培养基通过蠕动泵泵入装置内与转染复合物混合均匀后再泵回至细胞工厂内。此方式的缺点为转染试剂转移至换液装置的过程也是开放的环境(生物安全柜内)，存在一定的污染风险。
[0003]专利CN201822035919.0公开了一种便于批量包装慢病毒的混合器，混合器本体设有两个储液腔体，分别是A液贮液瓶和B液贮液瓶，A液贮液瓶和B液贮液瓶之间设有连通结构，所述的连通结构上设有控制装置，所述的连通结构为软管，A液贮液瓶一侧设有固定装置，B液贮液瓶底部设有振动结构，所述的B液贮液瓶内设有注射针，B液贮液瓶顶部设有进针口，注射针一端连接软管，注射针通过进针口进入B液贮液瓶，注射针另一端为出液口，出液口设置在B液贮液瓶底部，出液口倾斜设置。优点在于不但节约了包装慢病毒时A液与B液混合时操作的劳动强度与时间，而且还适用于批量慢病毒的包装；另有加工简单，可反复使用，成本低廉，便于推广等优点。但是，该混合器只能用于包装慢病毒的A液和B液的混合，并没有提供混合后导入培养容器中的过程；B液贮液瓶没有设置出液口，当A液和B液混合完成后，将混合液转入培养容器中时只能打开盖子，取出混合液，容易造成污染；该混合式设置有两个贮液瓶，人员需要对两个贮液瓶进行观察和处理，同样需要付出较多劳动力；A液贮液瓶上连接加压设备，B液贮液瓶上有排压口，容易造成液体充满B液贮液瓶将液体压出；另外，该混合器也未有收集废弃液的部件，未能形成一套封闭的混合装置，避免造成污染。
[0004]专利CN202021193441.5公开了一种用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器及混合器，其能简化病毒制备的流程，将转染试剂的合成步骤与转染试剂和培养基混合的步骤简化至在同一个装置内完成的同时降低了污染风险，且能使转染试剂与培养基能更充分的混合。其直接与细胞培养容器连接，未有起到缓冲和暂停作用的中间装置，并且其中的细胞工厂连通器只是采用的单通道接头，采用单通道接头容易导致质粒混合液形成一股速度较快的流量将黏附于细胞工厂壁上的细胞脱落，严重影响细胞的转染成功率，并且该技术中
也没有使用废液罐装置，每次需要人工收集废液，并且污染物也容易从废液管中进入整个制备装置中，没有形成完全意义的封闭状态。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述问题，提供了一种制备慢病毒的装置，通过增设装有培养基的储液袋，使得转染复合物与培养基混合在储液袋中进行，进一步充分混合，提高了操作效率，并能起到一定的缓存作用；另外，本专利技术装置还设置了废液容器，形成一套封闭的混合装置，降低了环境污染的风险；并且该装置中的细胞工厂连通器采用了一分多转接头，极大的提高了细胞的转染率。
[0006]本专利技术目的之一在于提供一种制备慢病毒的装置，各部件可拆卸组装，方便慢病毒的培养制备，具体技术方案如下：
[0007]一种制备慢病毒的装置，包括混合容器和细胞培养容器，所述混合容器置于磁力搅拌器上，所述混合容器通过带有泵的第一管道与储液袋连接，所述储液袋通过带有止流装置的第二管道与细胞培养容器连接，所述细胞培养容器通过带有单向阀的第三管道连接废液容器。
[0008]具体的，所述混合容器和第一管道之间设置泵。
[0009]具体的，所述混合容器、储液袋，细胞培养容器和废液容器为可拆卸组装。
[0010]具体的，所述混合容器由试剂瓶和转接瓶盖组成，所述转接瓶盖上的第一接头、空气滤头和第二接头分别连接第一导管、第二导管和第三导管贯穿所述转接瓶盖，所述第一导管置于试剂瓶的底端设置沉头，所述试剂瓶的底部设置有磁力搅拌子。
[0011]具体的，所述试剂瓶为1
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20L的高硼硅玻璃试剂瓶。
[0012]具体的，空气滤头为0.22μm空气滤器。
[0013]具体的，所述储液袋包括第三接头、第四接头和第五接头，所述第三接头与第一接头通过带有泵的第一管道连接，所述第四接头通过带有止流装置的第二管道与所述细胞培养容器连接。
[0014]具体的，所述细胞培养容器由细胞工厂、细胞工厂连通器和蠕动泵构成，所述细胞工厂连通器将细胞工厂与蠕动泵连接，所述细胞工厂连通器通过三通转化头分别与所述储液袋和废液容器连接。
[0015]具体的，所述细胞工厂连通器为一分多转接头，所述蠕动泵为多通道蠕动泵。
[0016]具体的，所述细胞工厂连通器连接n个细胞工厂，n为整数，优选为1～8个细胞工厂。
[0017]具体的，所述储液袋和所述三通转化头之间的第二管道上设置有止流阀。
[0018]具体的，所述止流装置为止流阀。
[0019]具体的，所述废液容器和所述三通转化头之间的第三管道上设置有单向阀。
[0020]本专利技术中的细胞工厂连通器可以为一分2,1分4，一分多或者几个一分多连通器串联的细胞工厂连通器。
[0021]本专利技术目的之二在于提供一种制备慢病毒的方法，主要将转染复合物和培养基置于储液带中进行均匀混合，具体技术方案如下：
[0022]一种制备慢病毒的方法，将混合得到的转染复合物泵入装有培养基质的储液袋
中，将混合了培养基质的转染复合物泵入细胞培养器中进行慢病毒培养。
[0023]具体的，所述细胞培养器中产生的废液和输液袋中多余的混合了培养基质的转染复合物可排除至废液罐中。
[0024]具体的，所述储液袋中的培养基为2％DMEM。
[0025]具体的，所述细胞培养器在37℃，5％CO2的条件下培养40
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48h获得慢病毒。
[0026]本专利技术的有益之处在于：
[0027]1、将转染复合物和培养基的混合从细胞工厂转移至了储液袋，使得其混合更充分，并且能起到一定的缓存作用，使得整个操作更加安全，提高了操作效率。
[0028]2、本装置中设置了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备慢病毒的装置，包括混合容器(1)和细胞培养容器(3)，其特征在于，所述混合容器(1)通过第一管道(20)与储液袋(2)连接，所述储液袋(2)通过带有止流装置的第二管道(30)与细胞培养容器(3)连接，所述细胞培养容器(3)通过第三管道(40)连接废液容器(4)。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述混合容器(1)和第一管道(20)之间设置泵(201)。3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述混合容器(1)、储液袋(2)，细胞培养容器(3)和废液容器(4)为可拆卸组装。4.根据权利要求3所述的装置，其特征在于，所述混合容器(1)由试剂瓶(11)和转接瓶盖(13)组成，所述转接瓶盖(13)上的第一接头(14)、空气滤头(15)和第二接头(16)分别连接第一导管(18)、第二导管(19)和第三导管(110)贯穿所述转接瓶盖(13)，所述第一导管(18)置于试剂瓶(11)的底端设置沉头(12)，所述试剂瓶(11)的底部设置有磁力搅拌子(17)。5.根据权利要求4所述的装置，其特征在于，所述储液袋(2)包括第三接头(211)、第四接头(212)和第五接头(213)，所述第三接头(211)与第一接头(14)通过带有泵(201)的第一管道(20)连接，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄一，杨周琴，杨智，张茜真，沈俊杰，晏波波，郑姣，李运燕，王玲琳，王戬，
申请(专利权)人：重庆精准生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：