制备稳定细胞池的方法、蛋白表达方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种制备稳定细胞池的方法、蛋白表达方法及试剂盒。所提供的制备稳定细胞池的方法包括：将培养的昆虫细胞和嘌呤霉素混合，进行加压处理，以便获得含有所述昆虫细胞的细胞池，所述昆虫细胞能够表达目的蛋白。所提供的表达蛋白的方法，包括培养所述含有昆虫细胞的细胞池。应用所提供的细胞池能够稳定获得蛋白，适用于利用昆虫细胞对多种蛋白的稳定表达，从而可以应用于医疗、保健品、食品等多种领域，具有重要的价值。具有重要的价值。

【技术实现步骤摘要】
制备稳定细胞池的方法、蛋白表达方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种制备稳定细胞池的方法、蛋白表达方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]昆虫细胞是一种真核细胞，与原核细胞相比具有翻译后修饰的能力，能表达构象复杂的蛋白，并具有比较好的糖基化能力，而且能表达某些哺乳动物细胞中难表达的蛋白，具有工业化的潜力。S2细胞全称Drosophila Schneider 2cells，是一种源自果蝇胚胎的细胞，目前已有用于重组蛋白表达的报道。例如，TNFR-Fc是人肿瘤坏死因子受体的Fc融合蛋白，是一种重要的蛋白治疗药物。EGFP是绿色荧光蛋白的简称，是一种常用的检测表达水平的模式蛋白。
[0003]目前昆虫细胞多使用瞬时表达系统。瞬时表达系统存在的主要问题是工业化难度较高，大批量生产需要制备大量的表达载体质粒，不论是成本还是工作量都非常巨大。除此之外瞬时表达系统稳定性较差，存在批次间差异性，无法稳定提供质量均一的蛋白，不利于后续的工艺开发及质量分析，产品质量也无法保证。
[0004]因此还需要提供一种稳定的蛋白表达本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备稳定细胞池的方法，其特征在于，包括：将培养的昆虫细胞和嘌呤霉素混合，进行加压处理，以便获得含有所述昆虫细胞的细胞池，所述昆虫细胞能够表达目的蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嘌呤霉素的使用浓度为25～500微克每毫升，优选为50～200微克每毫升，更优选为75～150微克每毫升。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：向所述含有所述昆虫细胞的细胞池中添加表达促进剂，所述表达促进剂包括选自丁酸钠、二甲基亚砜中的至少一种。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述二甲基亚砜在所述含有所述昆虫细胞的细胞池中的体积分数为0.05～2％，优选为0.1％；所述丁酸钠在所述含有所述昆虫细胞的细胞池中的质量体积分数为1～4％，优选为2.5％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：将培养1～3天的昆虫细胞和嘌呤霉素混合，进行所述加压处理，所述加压处理的时间至少为10天，期间每2～3天传代一次，以便获得含有所述昆虫细胞的细胞池；优选地，所述加压处理的时间为12～28天，更优先地，所述加压处理的时间为12～21天。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述昆虫细胞中含有表达载体，所述表达载体上含有目的蛋白编码基因；任选地，所述昆虫细胞通过下述方法获得：将昆虫受体细胞培养液和转染试剂、含有目的蛋白编码基因的表达载体混...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡东宏，沈潇，赵振武，
申请(专利权)人：广州汉腾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：