桑花叶型矮缩相关病毒MMDaV侵染性克隆载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种桑花叶型矮缩相关病毒MMDaV侵染性克隆载体及其构建方法和应用。在获得桑花叶型矮缩相关病毒基因组全序列的基础上，将2.0个正向重复的桑花叶型矮缩相关病毒全长基因组构建在植物表达载体pBinPLUS上，通过电击的方法转入农杆菌菌株，获得以农杆菌介导的对植物有侵染能力的病毒载体。采用本发明专利技术提供的侵染性克隆载体能在本氏烟上引起坏死反应，操作简单，重复性好；利用本发明专利技术提供的侵染性克隆载体可有效用于植物抗病反应分析。侵染性克隆载体可有效用于植物抗病反应分析。侵染性克隆载体可有效用于植物抗病反应分析。

【技术实现步骤摘要】
桑花叶型矮缩相关病毒MMDaV侵染性克隆载体及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种单链DNA病毒，双生病毒科，桑花叶型矮缩相关病毒(Mulberry mosaic dwarf
‑
associated virus,MMDaV)的侵染性克隆构建。

技术介绍

[0002]桑花叶型矮缩相关病毒(Mulberry mosaic dwarf
‑
associated virus,MMDaV)是严重影响桑树的生长和桑叶产量的一种单组份双生病毒，该病害发生时，桑树呈现矮化、叶片黄化皱缩、等症状。MMDaV的基因组是大小为2952nt的单链环状DNA分子，病毒链含有5个ORF(V1、V2、V3、V4和V5)：V1可能编码衣壳蛋白，V2编码的蛋白为RNA沉默抑制子，V3、V4和V5的序列与已知的双生病毒序列的同源性很低，其编码的蛋白的功能还不明确；互补链含有2个ORF(C1和C1：C2)，其编码的蛋白可能与病毒的复制有关。MMDaV的病毒链与互补链之间为基因间隔区，含有病毒复制和转录的起始位本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种桑花叶型矮缩相关病毒MMDaV的侵染性克隆载体，其特征在于：将两个拷贝的MMDaV全长序列融合到pBinPLUS载体制备得到，所述MMDaV全序列如SEQ ID No:6所示。2.根据权利要求1所述的桑花叶型矮缩相关病毒MMDaV的侵染性克隆载体的制备方法，其特征在于，包括以下的步骤：(1)植物总DNA的提取：采用CTAB方法从采集的感染MMDaV的桑树中提取植物基因组总DNA；(2)MMDaV全长序列的克隆和测序：利用PCR扩增体系，以含有MMDaV病毒的桑树DNA为模板，以MMDaV FL/SalI
‑
F和MMDaV FL/KpnI
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R为引物进行PCR扩增，PCR产物插入到pEasy
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T1载体上，筛选得到pEasy T1
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MMDaV
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PL；以MMDaV FL/KpnI
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F和MMDaV FL/KpnI
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R为引物扩增目的片段，将PCR产物插入到pEasy
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T1载体上，筛选得到pEasy T1
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MMDaV
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FL；所述引物MMDaV FL/SalI
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F、MMDaV FL/KpnI
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F和MMDaV FL/KpnI
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R的基因序列分别为SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3；(3)pBinPLUS
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M...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨秀玲，周雪平，孙少双，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：