一种基于核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法，属于分子生物学检测技术领域。本发明专利技术以纳米金为载体，合成DNA

【技术实现步骤摘要】
一种基于核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法


[0001]本专利技术公开了一种基于核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法，属于分子生物学检测


技术介绍

[0002]在传统的免疫测定中，由于标记物产生的可检测信号低，限制了免疫法的检测灵敏度。另外，标记物与抗体的结合率低也导致了较低的灵敏度，不能满足低浓度靶标的检测。尽管仪器分析方法(例如色谱法和质谱法)可以提高检测灵敏度，但它们不像免疫测定法那样方便和简单。因此，在免疫分析的基础上应用新技术提高检测灵敏度是值得研究的方向。
[0003]采用核酸信号放大技术的分子测定是最灵敏的检测方法之一。免疫分析和核酸信号放大相结合可以达到协同作用，不仅可以保留免疫分析法的简便性，而且可以通过DNA扩增技术提高方法的灵敏度。免疫
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PCR是最早的免疫
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核酸策略(I
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NAA)。由于PCR需要可变的温度过程和较高的专业要求，限制了其在生物活性物质的检测的应用。等温核酸信号放大技术由于条件温和，扩增效率高，已逐渐用于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备用于检测氯霉素的探针的方法，其特征在于，所述方法包括如下过程：(1)合成纳米金颗粒AuNP：将HAuCl4分散在水中配制成溶液，加热至沸腾，然后加入柠檬酸三钠，混匀反应，反应结束后，得到有橘红色溶液体系，即为纳米金颗粒分散液；(2)调节纳米金颗粒分散液的pH至8.5
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9.0，加入氯霉素单克隆抗体进行孵育，孵育结束后，获得含有抗体修饰的纳米金颗粒的分散液；记作AuNP
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抗体分散液；(3)将活化后的巯基修饰的Trigger DNA、PEG20000、PBS加入到所得AuNP
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抗体分散液中，混匀反应，获得AuNP
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抗体
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DNA分散液；(4)在所得AuNP
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抗体
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DNA分散液中加入BSA进行孵育，孵育结束后，固液分离，得到探针。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，每1mL纳米金颗粒分散液中加入18μg氯霉素单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有巯基修饰的Trigger DNA的序列为：5
’‑
GTTTTTAGGGATGTTACGTACGACTTATTTTTTTTTTTT
‑
SH
‑3’
。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，活化是指利用TCEP活化有巯基修饰的DNA；其中，TCEP与巯基修饰的DNA的摩尔比为100：1。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭亚辉，桑潘婷，姚卫蓉，钱和，谢云飞，于航，杨方威，成玉梁，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：