一种抗癌生物活性肽及合成方法技术

本发明专利技术公开了一种抗癌生物活性肽，活性肽包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明专利技术采用上述的一种抗癌生物活性肽，安全有效，效果明显。效果明显。效果明显。

【技术实现步骤摘要】
一种抗癌生物活性肽及合成方法


[0001]本专利技术涉及抗癌
，尤其是涉及一种抗癌生物活性肽及其合成方法。

技术介绍

[0002]癌症至今仍是世界上主要的死亡原因之一，癌症治疗的痛苦和医疗开支对癌症患者及其家属的身心健康及生活质量造成了严重威胁。目前临床上手术治疗主要适用于早期癌症患者，晚期患者则常采用化疗和放疗进行治疗，但是大部分的化疗药物疗效欠佳且对机体的损伤较大，故亟需寻求一种治疗癌症更为有效的方法。
[0003]多肽抗癌药物是近年来抗癌药物研发的热点，生物活性肽是一类对生物体具备特别生理作用的肽类化合物。一般由20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成，其功能也由氨基酸的组成顺序决定。生物活性肽的分子量小、靶向性高、毒性低，在癌症临床治疗上具有重要的研究价值及前景。但是，至今应用于临床的活性肽抗癌药物甚少，远不能满足抗癌药物市场日益增长的需求。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种抗癌生物活性肽及合成方法，安全有效，效果明显。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了一种抗癌生物活性肽，活性肽包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0006]一种抗癌生物活性肽的合成方法，步骤如下：
[0007]S1、去除芴甲氧羰酰(Fmoc)保护基团：选择合适的改性树脂合成目标肽，首先在反应器中加入20％的哌啶/二甲基甲酰胺(pip/DMF)溶液，使树脂充分浸润，然后将反应器放在摇杆上进行摇动；
[0008]S2、清洗：将反应器中溶液弃去后，在反应器中加入N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)没过树脂，然后将反应器放在摇杆上摇动，弃去滤液，清洗过程重复三次；
[0009]S3、检测树脂：将检测试剂A、B和一个树脂点放入同一个试管中，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，如果树脂的颜色发生变化，说明Fmoc基团被成功去除；
[0010]S4、耦合：将准备好的氨基酸溶液加入树脂中，然后将N,N'
‑
二异丙基碳二亚胺/二甲基甲酰胺(DIC/DMF)溶液加入到反应器中，反应器被放在摇杆上摇动；
[0011]S5、检测树脂：将检测试剂A和B以及一个树脂点放入一个试管，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，如果树脂的颜色没有变化，说明氨基酸的偶联成功；
[0012]S6、清洗：对偶联后的树脂进行清洗，方法同步骤S2；
[0013]S7、耦合：选择合适的氨基酸溶液继续进行耦合，重复步骤S4
‑
S7；
[0014]S8、检测：使用高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)检测活性肽的纯度和分子量。
[0015]因此，本专利技术采用上述一种抗癌生物活性肽及合成方法，安全有效，效果明显。
[0016]下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
[0017]图1是抗癌生物活性肽的HPLC谱图和相应的峰值；
[0018]图2是抗癌生物活性肽的MS谱图和相应的峰值；
[0019]图3是CCK
‑
8检测PEP01对人永生化角质HaCaT细胞增殖的影响；
[0020]图4是CCK
‑
8测定PEP01对黑色素瘤SK
‑
MEL
‑
103细胞增殖的影响；
[0021]图5是CCK
‑
8测定PEP01对宫颈癌HeLa
‑
S3细胞增殖的影响；
[0022]图6是CCK
‑
8测定PEP01对肺癌A549细胞增殖的影响；
[0023]图7是PEP01对细胞迁移能力的影响；
[0024]图8是PEP01对细胞划痕的伤口愈合的影响；
[0025]图9是细胞凋亡检测实验。
具体实施方式
[0026]以下通过附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步说明。
[0027]实施例一
[0028]一种抗癌生物活性肽，活性肽为具有表1中PEP01所示的氨基酸序列。
[0029]一种抗癌生物活性肽的合成方法，步骤如下：
[0030]S1、去除Fmoc保护基团：选择合适的改性树脂合成目标肽，首先在反应器中加入20％体积的pip/DMF溶液，使树脂充分浸润，然后将反应器放在摇杆上进行摇动；改性树脂为D301树脂为载体的衍生树脂，不同的改性树脂效果有差别。
[0031]S2、清洗：将反应器中溶液弃去后，在反应器中加入DMF没过树脂，然后将反应器放在摇杆上摇动，弃去滤液，清洗过程重复三次；
[0032]S3、检测树脂：将检测试剂A、B和一个树脂点放入同一个试管中，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，如果树脂的颜色发生变化，说明Fmoc基团被成功去除；
[0033]S4、耦合：将准备好的氨基酸溶液加入树脂中，然后将DIC/DMF溶液加入到反应器中，反应器被放在摇杆上摇动；
[0034]S5、检测树脂：将检测试剂A和B以及一个树脂点放入一个试管，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，如果树脂的颜色没有变化，说明氨基酸的偶联成功；
[0035]S6、清洗：对偶联后的树脂进行清洗，方法同步骤S2；
[0036]S7、耦合：选择合适的氨基酸溶液继续进行耦合，重复步骤S4
‑
S7；
[0037]S8、检测：使用HPLC和MS方法检测活性肽的纯度和分子量。
[0038]如图1
‑
2所示，通过HPLC和MS检测证明本专利技术的活性肽(以下称PEP01)的纯度为98.40％，分子质量为1088。
[0039]表1活性肽的性质
[0040][0041]试验测试
[0042](一)细胞培养
[0043]本专利技术使用的黑色素瘤SK
‑
MEL
‑
103细胞株、宫颈癌Hela
‑
S3细胞株、肺癌A549细胞株主要来自其他实验室。细胞株均使用含有5％
‑
10％胎牛血清(FBS，Gibco
TM
)、1
×
青霉素链霉素(HycloneTM)的完全培养基(DMEM)(HycloneTM)，并放在含5％CO2的37℃培养箱中培养。
[0044](二)对正常细胞的毒性试验
[0045]为了检测活性肽PEP01对正常细胞的毒性，使用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK
‑
8试剂盒)进行细胞活力检测。将人永生化角质细胞HaCaT接种到96孔板中培养过夜。然后对于试验组加入不同浓度的SEQ ID NO:1所示的活性肽序列(PEP01)处理24小时，其浓度分别为1、10、25、50、100μg/mL检测该活性肽对正常细胞活力的影响。对照组加入相同体积的无菌水，总体积均为100μL。
[0046]孵育一定时间后，向本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗癌生物活性肽，其特征在于：活性肽包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。2.一种抗癌生物活性肽的合成方法，其特征在于，步骤如下：S1、去除Fmoc保护基团：选择合适的改性树脂合成目标肽，首先在反应器中加入20％体积的pip/DMF溶液，使树脂充分浸润，然后将反应器放在摇杆上进行摇动；S2、清洗：将反应器中溶液弃去后，在反应器中加入DMF没过树脂，然后将反应器放在摇杆上摇动，弃去滤液，清洗过程重复三次；S3、检测树脂：将检测试剂A、B和一个树脂点放入同一个试管中，置于100℃环境中，检查树脂的颜色是否有变化，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱绍和，陈丽，宋兰妮，田雪晨，
申请(专利权)人：温州肯恩大学，
类型：发明
国别省市：