一种芋螺毒素有关杂质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种芋螺毒素有关杂质的检测方法。主要解决现有缺少对芋螺毒素杂质分析方法的技术问题。本发明专利技术检测方法，包括以下步骤：（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到试品溶液；（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到对照品溶液；（3）以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；检测波长为215nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为45℃。本方法有效地解决了芋螺毒素有关杂质检测和分离的问题，能保证芋螺毒素中有关杂质的可控性，提高产品质量。

【技术实现步骤摘要】
一种芋螺毒素有关杂质的检测方法
本专利技术涉及一种多肽分析检测方法，特别涉及一种芋螺毒素有关杂质的检测方法。
技术介绍
芋螺毒素(CTX)，结构式如下：由海洋腹足纲软体动物芋螺的毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌，由许多单一毒肽组成的鸡尾酒样的混合毒素，主要成分是一些对不同离子通道及神经受体高专一性的活性多肽化合物。每种芋螺的毒液中可能含50～200个活性多肽。不同种芋螺所含活性肽各不相同，理论上估计有5万多种不同活性肽存在于芋螺毒液中。芋螺毒素多数由10～40个氨基酸残基组成，富含两对或三对二硫键，是发现的最小核酸编码的动物神经毒素肽，也是二硫键密度最高的小肽，可作用于各种离子通道和受体的类型及亚型，是一种新型的天然麻醉剂。对于以往芋螺毒素活性环肽的人工合成中，由于其结构复杂，人工合成的产率较小，纯度也低，合成的中间肽还需氧化折叠才能形成正确的构象。在合成过程中，为了更好的控制产品质量，须对杂质进行准确的分析。现有技术中，缺少对芋螺毒素杂质分析报道。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种芋螺毒素有关杂质的检测方法，主要解决目前缺少芋螺毒素分析检测方法的技术问题。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种芋螺毒素有关杂质的检测方法，包括以下步骤：（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml供试品溶液；（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml对照品溶液；（3）以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；检测波长为215nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为45℃。所述缓冲液为三乙胺溶液。三乙胺溶液质量百分浓度为0.05%-0.1%，优选质量百分浓度0.05%。三乙胺缓冲液pH为2.5-4，pH值优选为2.5。所述洗脱梯度为乙腈质量百分比12-14%。洗脱后得到芋螺毒素杂质为：IMP1序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRRITDACV；IMP2序列为：RSSGRYCRSPYDRRRRYCRRIITDACV；IMP3序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRITDCVV；IMP4序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRIITDACV。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种芋螺毒素有关杂质的检测方法，该方法能将可能的降解杂质和工艺杂质与主成分有效分开，且灵敏度高，可应用于芋螺毒素的质量控制，有利于提高产品质量。常规检测方法很难检测缺失一个或者多一个氨基酸杂质，本专利技术可以有效解决检测问题，特别是对杂质IMP1和IMP4有很好的分离效果。附图说明图1为芋螺毒素样品检测局部放大图。图2为实例1的空白溶液HPLC图。图3为实例1的对照溶液第一针HPLC图。图4为实例1的对照溶液第二针HPLC图。图5为实例1的对照溶液第三针HPLC图。图6为实例1的对照溶液第四针HPLC图。图7为实例1的对照溶液第五针HPLC图。图8为实例1的对照溶液第六针HPLC图。图9为实例1的空白溶液HPLC图。图10为实例1的芋螺毒素样品溶液第一针HPLC图。图11为实例1的芋螺毒素样品溶液第二针HPLC图。图12为实例2的空白溶液HPLC图。图13为实例2的对照溶液第一针HPLC图。图14为实例2的对照溶液第二针HPLC图。图15为实例2的对照溶液第三针HPLC图。图16为实例2的对照溶液第四针HPLC图。图17为实例2的对照溶液第五针HPLC图。图18为实例2的对照溶液第六针HPLC图。图19为实例2的空白溶液HPLC图。图20为实例2的芋螺毒素样品溶液第一针HPLC图。图21为实例2的芋螺毒素样品溶液第二针HPLC图。图22为实例3的空白溶液HPLC图。图23为实例3的对照溶液第一针HPLC图。图24为实例3的对照溶液第二针HPLC图。图25为实例3的对照溶液第三针HPLC图。图26为实例3的对照溶液第四针HPLC图。图27为实例3的对照溶液第五针HPLC图。图28为实例3的对照溶液第六针HPLC图。图29为实例3的空白溶液HPLC图。图30为实例3的芋螺毒素样品溶液第一针HPLC图。图31为实例3的芋螺毒素样品溶液第二针HPLC图。具体实施方式实施例1进样序列实验步骤：（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml供试品溶液；（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml对照品溶液；（3）按照上述色谱条件调节三乙胺溶液pH为2.5，按照进样序列依次进样得到HPLC检测图2-图11。洗脱后得到芋螺毒素杂质为：IMP1序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRRITDACV；IMP2序列为：RSSGRYCRSPYDRRRRYCRRIITDACV；IMP3序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRITDCVV；IMP4序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRIITDACV。杂质和目标峰顺序见图1。实施例2进样序列实验步骤：（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml供试品溶液；（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml对照品溶液；（3）按照上述色谱条件调节三乙胺溶液pH为2.5，按照进样序列依次进样得到HPLC检测图12-图21。洗脱后得到芋螺毒素杂质为：IMP1序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRRITDACV；IMP2序列为：RSSGRYCRSPYDRRRRYCRRIITDACV；IMP3序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRITDCVV；IMP4序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRIITDACV。杂质和目标峰顺序见图1。实施例3进样序列实验步骤：（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml供试品溶液；（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到2mg/ml对照品溶液；（3）按照上述色谱条件调节三乙胺溶液pH为4，按照进样序列依次进样得到HPLC检测图22-图31。洗脱后得到芋螺毒素杂质为：IMP1序列为：TCRSSGRYCRSPYDRRRRYCRRRITDACV；IMP2序列为：RSSGRYCRSPYDRRRRYCRRIITDACV；IMP3序列为：TCRS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芋螺毒素有关杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到试品溶液；/n（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到对照品溶液；/n（3）以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱 ；检测波长为215nm ；流速为1 .0ml/min；进样体积为20μl；柱温为45℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种芋螺毒素有关杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）称量芋螺毒素样品，加入分析检测水稀释液，定容得到试品溶液；
（2）称量芋螺毒素对照品，加入分析检测水稀释液，定容得到对照品溶液；
（3）以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；检测波长为215nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为45℃。


2.根据权利要求1所述的一种芋螺...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，秦敬国，李阳，
申请(专利权)人：江苏吉泰肽业科技有限公司，吉尔生化上海有限公司，上海吉尔多肽有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32