本发明专利技术提供了一种针对在癌症中识别的一组独特抗原的抗体或功能性抗体片段或它们的探针。本发明专利技术包含得自L2A5单克隆抗体的核苷酸序列。所述抗体或功能性抗体片段或它们的探针包括具有本文提供的氨基酸序列的可变重链域和可变轻链域。DNA/氨基酸序列的结合是独特的，并且以前从未描述过。本发明专利技术进一步提供了在检测、治疗和预防包括癌症在内的人类疾病有用的抗体或功能性抗体片段或结合物或重组蛋白。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗肿瘤抗原的L2A5抗体或其功能性片段
本专利技术提供了一种针对在癌症中识别的一组抗原的抗体或功能性抗体片段或它们的探针。
技术介绍
唾液酸Tn(sialylTn，STn)是一种短的O-聚糖抗原，由与N-乙酰基半乳糖胺连接的唾液酸组成的二糖，即Neu5Acα-2,6GalNAc，它通过阿尔法构型中GalNAc残基依次O-连接至多肽链中的丝氨酸或苏氨酸残基。它的相关性与在正常健康组织中不存在但在几乎所有类型的癌中以不同的频率检测到的事实有关(Julien，Videira和&Delannoy，2012)。此外，STn是转移性、耐药性和高恶性癌细胞的靶标。它们的激发特征包括：1)STn表达与人类癌细胞和癌起始细胞的瘤形成和转移能力的关系(Okasaki等，2012)。2)STn与患者不良预后、总体存活率降低和对化学疗法缺乏反应的相关性(Choi等，2000)和3)逃避免疫保护(Carrascal等，2014)。α-2,6唾液酸通常是终末癌症(terminatingcancer)的生物标志物。短α2,6唾液酸化O-聚糖在几种类型的癌症中过表达。它们通常与癌症的进展和转移有关。此外，它们还可以通过被多种免疫受体(例如唾液酸结合蛋白(Siglecs))的识别而促成免疫逃避(Crocker，Paulson，&Varki，2007；Nicoll等2003)。因此，本专利技术提供了特异性结合癌症生物标志物的抗体、功能性抗体片段或探针。除了特异性识别肿瘤细胞外，这些抗体还具有阻断宿主细胞受体识别这些配体的潜能，这些受体参与了肿瘤进展的基础机制，包括免疫耐受。相关数量的抗体已经被批准用于治疗癌症患者(https://www.cancer.org/)。它们包括：1.靶向癌症特异性(相关)抗原的单克隆抗体(Monoclonalantibodies，mAb)。重组人源化mAb抗HER2曲妥珠单抗(赫赛汀(Herceptin)TM)在各种科学出版物中都有描述，例如癌症研究(CancerRes.)，1998，58：2825-2831。它靶向在将近30％的乳腺癌患者中表达的HER2受体。专利文件WO0105425描述了一种抗肿瘤组合物，其包含与抗HER2曲妥珠单抗偶联的烷基化蒽环霉素(alkylatinganthracycline)。但是，这些治疗仅适用于少数患者(占乳腺癌患者的30％)。另外，曲妥珠单抗抗体靶向的HER2蛋白也在相关的正常细胞如心脏细胞中表达，这说明了相关的心脏毒性。本专利技术允许开发靶向超出HER2以外的更广泛受体列表的重组抗体，所述受体由不同类型的癌症表达，其被STn或一组由α-2,6唾液酸封端的聚糖修饰。这将有潜能为更广泛的癌症患者群体开发治疗方法。由于STn和被α-2,6唾液酸封端的聚糖二者在癌细胞都高度过表达，它也具有更高的特异性和降低毒性的潜力。2.阻断阻止免疫系统工作的分子的MAb。它们被称为免疫检查点抑制剂(immunecheckpointinhibitors)，并且包括阻断CTLA-4，PD-1和PD-L1的药物。PD-1抑制剂的实例是被批准用于治疗皮肤黑素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌和霍奇金淋巴瘤的派姆单抗(Pembrolizumab)(可瑞达(Keytruda))和纳武单抗(Nivolumab)(欧狄沃(Opdivo))。然而，免疫检查点不能提供立即的抗肿瘤反应，并且通常被用作辅助治疗。同样，免疫检查点抑制剂可以使免疫系统攻击体内的某些正常器官，从而导致某些人的严重副作用。3.阻断癌细胞分裂所必需的细胞信号传导的MAb。这些药物包括靶向影响血管生长的血管内皮生长因子(VEGF)的贝伐单抗(Bevacizumab)(安维汀)和靶向被称为表皮生长因子受体(EGFR)的细胞蛋白的抗体西妥昔单抗(Cetuximab)(爱必妥)，EGFR对细胞生长很重要。但是，这些阻断细胞信号传导的抗体也会影响生理机制，并与毒性相关，例如高血压、出血、血栓和肾脏损害。有一些专利文件(EP2014302A1；WO2015053871A4；US7423126B2；EP2993184A1)要求保护编码与肿瘤相关的碳水化合物抗原的人抗体的核酸；然而，上述专利文献中的抗体均不识别STn抗原，STn抗原是本专利技术抗体的靶标。专利申请EP2680004(A2)要求保护抗唾液酸化聚糖的抗体，该唾液酸化聚糖包括含有N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminicacid，NeuAc)或N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminicacid，NeuGc)的STn抗原，而本专利技术涉及一种抗体，该抗体针对主要具有NeuAc的STn抗原和一组由α-2,6唾液酸封端的聚糖。专利申请WO1998046246A1和WO1995029927A3要求保护产生与肿瘤相关的碳水化合物抗原的α-O-连接的糖结合物(glycoconjugates)或糖苷(glycosides)的方法，所述肿瘤相关的碳水化合物抗原包括2,6-唾液酸T抗原(2,6sialylTantigen)。尽管提到了用于开发治疗癌症的抗体的可能性，但这些专利申请均未提供检测2,6-唾液酸T抗原的抗体序列，也没有提供本专利主题的相关的含2,6-唾液酸的抗原的组。若干专利申请已要求保护结合唾液酸残基的抗体，例如CA2743032A1，其特征在于识别唾液酸残基(包括NeuGc)的IgM抗体，或US20160184450A1和US8148335B2，它们要求保护与脱N-乙酰化唾液酸特异性结合的抗体，或EP2302390A1和US20120142903A1专利申请，它们包括识别NeuGc结构的抗体；而本专利技术要求保护一种抗体，该抗体不仅识别与GalNAc结合的NeuAc(STn抗原)，而且识别由α-2,6-连接的唾液酸封端的一组聚糖中的NeuAc的结构。EP2261255A1专利申请记载了在鸡中识别单糖NeuAc的抗体的生产，以及US20110034676A1专利申请要求保护抗Neu5Ac结构和Neu5Gc结构二者的多克隆抗体的生产和纯化。然而，本专利技术要求保护编码在小鼠中产生的mAb的核酸，所述mAb靶向寡糖STn抗原和被α-2,6-连接的唾液酸封端的一组聚糖。这是优点，因为本专利技术将允许区分肿瘤相关的聚糖，而不仅仅是单糖NeuAc，后者也在正常细胞中表达。此外，US2010/0034825A1专利申请要求保护，使用长的Tn-或STn-MUC1串联重复糖肽进行免疫来产生抗MUC1糖蛋白的抗体。这项工作与本专利技术不同，因为靶标结构不同，即靶标MUC1糖蛋白而不是聚糖结构，STn也不是被α-2,6-连接的唾液酸封端的聚糖。WO2016057916A1专利抗体识别STn抗原，而不是由α-2,6-连接唾液酸封端的聚糖。根据以上所述，由于肿瘤抗原在正常细胞中同时表达，因此通常不是肿瘤特异性的。因此，由于脱靶效应，靶疗法通常显示出相关的毒性。肿瘤抗原不是泛肿瘤抗原(pan-tumourantigens)，并且局本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体、功能性抗体片段或它们的探针，其特征在于，所述抗体、功能性抗体片段或它们的探针得自L2A5单克隆抗体，并特异性结合STn和由α2,6-连接的唾液酸封端的一组聚糖，编码可变轻链域和重链域，所述可变轻链域和重链域各自包含互补决定区，其中：/na)所述轻链L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3分别为SEQ ID No.6、SEQ ID No.8和SEQ IDNo.10；/nb)所述重链H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3分别是SEQ ID No.12、SEQ ID No.14和SEQ IDNo.16。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180126 PT 1105261.一种抗体、功能性抗体片段或它们的探针，其特征在于，所述抗体、功能性抗体片段或它们的探针得自L2A5单克隆抗体，并特异性结合STn和由α2,6-连接的唾液酸封端的一组聚糖，编码可变轻链域和重链域，所述可变轻链域和重链域各自包含互补决定区，其中：
a)所述轻链L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3分别为SEQIDNo.6、SEQIDNo.8和SEQIDNo.10；
b)所述重链H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3分别是SEQIDNo.12、SEQIDNo.14和SEQIDNo.16。
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述由α2,6-连接的唾液酸封端的一组聚糖包括STn、2,6-唾液酸T或二唾液酸T或2,6-唾液酸乳糖胺。
3.根据前述权利要求所述的抗体，其特征在于，所述抗体、功能性抗体片段或它们的探针是嵌合的或人源化的。
4.根据前述权利要求所述的抗体，其特征在于所述抗体、功能性抗体片段或它们的探针在糖基化位点发生聚糖变化。
5.一种使用...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·A·Q·维代拉，C·M·M·诺沃，L·R·R·洛雷罗，M·A·R·卡拉斯卡尔，J·A·R·C·费雷拉，M·A·S·帕尔马，L·L·桑托斯，L·C·O·力玛，柴文刚，M·巴赫曼，
申请(专利权)人：里斯本新大学，葡萄牙肿瘤研究所波尔图FGEPE，赫姆霍兹森德拉姆德雷斯顿罗森多夫研究中心eV，
类型：发明
国别省市：葡萄牙;PT
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