一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒及其使用方法和应用技术

本发明专利技术提供一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒及其使用方法和应用，属于肿瘤检测技术领域。本发明专利技术研究发现，TIPE3在胰腺癌中表达显著升高，与肿瘤侵袭转移潜能密切相关，而且是胰腺癌患者的独立预后危险因素，因此可以通过检测TIPE3的表达来达到帮助判断胰腺癌恶性程度及患者预后的目的，从而提供一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒，该试剂盒可有效预测胰腺癌恶性程度和转移潜能，对胰腺癌患者进行复发转移风险分级；同时还可以评估患者预后情况，从而有助于提高胰腺癌患者的生存率，为临床上胰腺癌的防治提供重要的科学依据，因此具有良好的临床应用价值和社会效益。

【技术实现步骤摘要】
一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒及其使用方法和应用
本专利技术属于肿瘤检测
，具体涉及一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒及其使用方法和应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。胰腺癌是恶性程度最高的消化系统肿瘤之一，其发病隐匿，进展迅速，预后极差，发病率几乎等于死亡率。据美国癌症协会(ACS)最新统计数据显示，胰腺癌的预期发病率在消化系统肿瘤中居于第二位，而死亡率高居所有恶性肿瘤的第四位。预计在2030年，胰腺癌将成为所有恶性肿瘤中的第二大杀手。虽然胰腺癌的诊断和治疗模式在不断更新完善，但近四十年来患者的预后没有显著改善，5年生存率仅为6％左右，是目前预后最差的恶性肿瘤，故临床急需有效的联合检测，从而改善整体治疗效果。此外，胰腺癌恶性程度往往只能根据胰腺癌TNM分期来评判，而对胰腺癌了解程度越高，更有利于对患者进行治疗。肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumornecrosisfactoralpha-inducedprotein8,TNFAIP8或TIPE)家族共有4个成员：TIPE、TIPE1、TIPE2与TIPE3，它们在结构上具有高度同源性。其中TIPE3于2008年被发现【参见：Sun,H.,etal.TIPE2,anegativeregulatorofinnateandadaptiveimmunitythatmaintainsimmunehomeostasis[J].Cell.2008,133(3):415-426.】。相关研究表明TIPE3是磷脂酰肌醇第二信使的转运蛋白，通过激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路，影响肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和迁移【Moniz,L.,etal.AnewTIPEofphosphoinositideregulatorincancer[J].CancerCell.2014,26(4):443-444.】。免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测，是利用了抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织或细胞内的抗原(多肽和蛋白)，对其定位、定性及相对定量的研究。比如，将酶通过共价键方式连接在抗体上，制成酶标抗体再利用酶对底物的特异性催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下在细胞表面或细胞内进行各种抗原成分的定位。目前，通常选用免疫组化间接染色法进行试验，利用该技术可在组织水平或细胞水平检测各抗原物质，如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等。由于免疫组化具有特异性强、灵敏度高、定位准确等特点，且能将形态研究与功能研究有机的结合在一起，这门新技术已经广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域。在病理学研究中，免疫组化的作用和意义更为重要。而专利技术人发现，目前未见利用免疫组化检测TIPE3评估胰腺癌恶性程度及患者预后的方法报道。
技术实现思路
基于上述现有技术的不足，本专利技术提供一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒及其使用方法和应用。本专利技术研究发现，TIPE3在胰腺癌中表达显著升高，与肿瘤侵袭转移潜能密切相关，而且是胰腺癌患者的独立预后危险因素，因此可以通过检测TIPE3的表达来达到帮助判断胰腺癌恶性程度及患者预后的目的，从而提供一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒，因此具有良好的实际应用之价值。本专利技术的第一个方面，提供一种TIPE3作为诊断标志物在制备胰腺癌相关检测产品中的应用。其中，所述胰腺癌相关检测产品包括TIPE3免疫组织化学检测试剂盒，其可用于判断胰腺癌恶性程度及患者预后情况。本专利技术的第二个方面，提供一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒，所述TIPE3免疫组织化学检测试剂盒至少包括如下组分：一抗、二抗、灭活组织切片中过氧化物酶和生物素的试剂、与辣根过氧化物酶反应并显色的显色试剂，特异性对组织中细胞核染色的试剂；其中，一抗具体为针对人TIPE3抗原所制备的TIPE3特异性抗体，如兔抗人TIPE3多克隆抗体等，在此不做具体限定。相对应的，二抗只需与一抗的种属、类别或亚类相匹配即可，如当一抗为兔抗人TIPE3多克隆抗体时，二抗可以为羊抗兔IgG(羊抗兔IgG-HRP)。本专利技术的第三个方面，提供上述TIPE3免疫组织化学检测试剂盒用于组织切片免疫组织化学染色诊断的使用方法，所述方法包括：S1、取待测者待测组织固定后制石蜡片；S2、经处理后的石蜡片先后与一抗、二抗反应；S3、反应结束后，对切片进行清洗，经DAB染色、苏木素复染、脱水透明封片，显微镜观察。本专利技术的第四个方面，提供上述TIPE3免疫组织化学检测试剂盒和/或使用方法在肿瘤检测中的应用。其中，所述肿瘤为胰腺癌；所述肿瘤检测具体包括：判断胰腺癌恶性程度、转移潜能及患者预后情况(包括胰腺癌患者生存率)。上述一个或多个技术方案的有益技术效果：上述技术方案基于胰腺癌患者癌组织TIPE3免疫组化染色强度越高、范围越广，胰腺癌的恶性程度越高；反之，则恶性程度越低，从而制备一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒，该试剂盒可以有效地区分胰腺癌癌组织和正常组织，还可为胰腺癌个体化治疗提供新的诊断和分类依据。上述试剂盒可有效预测胰腺癌恶性程度和转移潜能，对胰腺癌患者进行复发转移风险分级；同时还可以评估患者预后情况，从而有助于提高胰腺癌患者的生存率，为临床上胰腺癌的防治提供重要的科学依据，因此具有良好的临床应用价值和社会效益。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1是本专利技术实施例中TIPE3高表达和低表达患者的生存曲线；图2是本专利技术实施例中胰腺癌周围正常组织IHC染色图；图3是本专利技术实施例中胰腺癌组织IHC染色图；图4是本专利技术实施例中淋巴结转移阴性的胰腺癌组织IHC染色图；图5是本专利技术实施例中淋巴结转移阳性的胰腺癌组织IHC染色图；图6是本专利技术实施例中未发生转移的淋巴结组织IHC染色图；图7是本专利技术实施例中发生转移的淋巴结组织IHC染色图；图8是本专利技术实施例中利用本方法预测胰腺癌患者是否发生淋巴结转移的ROC曲线。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种TIPE3作为诊断标志物在制备胰腺癌相关检测产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种TIPE3作为诊断标志物在制备胰腺癌相关检测产品中的应用。


2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述胰腺癌相关检测产品包括TIPE3免疫组织化学检测试剂盒；所述TIPE3免疫组织化学检测试剂盒用于判断胰腺癌恶性程度及患者预后情况。


3.一种TIPE3免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，所述TIPE3免疫组织化学检测试剂盒至少包括如下组分：一抗、二抗、灭活组织切片中过氧化物酶和生物素的试剂、与辣根过氧化物酶反应并显色的显色试剂，特异性对组织中细胞核染色的试剂；
其中，一抗具体为针对人TIPE3抗原所制备的TIPE3特异性抗体。


4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述灭活组织切片中过氧化物酶和生物素的试剂为H2O2溶液；
所述与辣根过氧化物酶反应并显色的显色试剂为DBA溶液；
所述特异性对组织中细胞核染色的试剂为苏木素。


5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述TIPE3免疫组织化学检测试剂盒还包括固定剂、脱蜡水化剂、血清封闭剂、缓冲液、抗体稀释液和脱水透明剂。


6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述固定剂为中性缓冲4％多聚甲醛液、Bouin’s液或mDF液；
所述血清封闭剂是和二抗同一来源的动物自身的血清中抗体，预先能和组织中能够与二抗结合的位点发生结合；或者小牛血清、BSA、羊血清，且不与一抗来源一致；
所述缓冲液是PBS缓冲液；
所述抗体稀释液为PBS，或添加叠氮化钠防腐...

【专利技术属性】
技术研发人员：李泽群，贾雯羽，周岩冰，牛军，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东;37