CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用制造技术

本发明专利技术涉及CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用。以所述CUL9作为标志物，基于CUL9细胞浆阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。与现有技术相比，本发明专利技术通过结直肠癌CUL9细胞浆阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和总体预后进行评价的方法，即根据结直肠癌患者肿瘤组织中CUL9细胞浆表达的情况可以直接确定患者的临床特征和预后信息。

【技术实现步骤摘要】
CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用
本专利技术属于结直肠癌预后评价
，尤其是涉及一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用。
技术介绍
结直肠癌作为常见的消化道恶性肿瘤，对人民的健康威胁不容小视。根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的全球肿瘤流行病统计数据(GLOBOCAN2020)估计，2020年全球结直肠癌新发病例193.16万，死亡病例93.52万，分别位于所有恶性肿瘤的第三位和第二位。近几十年来，随着人民生活水平的提高及饮食结构的改变，结直肠癌的发生比例亦逐渐增多。随着对结直肠癌研究的不断深入，结直肠癌预后已经较过去几十年呈改善趋势。然而，对于结直肠癌临床诊治而言，肿瘤分期依旧是重要的预后因素，早期结直肠癌和中晚期结直肠癌的预后存在较大异质性。中国专利CN107622800A公开了一种用于结直肠癌肝转移疗效预测的数学模型，其给出了一个公式，公式涉及的因素包括ATP6V1B1、CUL9、ERBB2、LY6G6D、RBMXL3、PTCH1这六个基因的基因型，该专利说明对西妥昔单抗敏感人群进行筛选后，客观反应率提升显著，从而可以更好的用于治疗方式的预测。中国专利CN103954757B公开了一种通过TEAD4细胞核阳性表达情况对结直肠癌评价的方法，即首先制成肿瘤组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据免疫评分进行分组，最后按照TEAD4的细胞核着染情况将患者分为TEAD4细胞核阳性表达组和TEAD4细胞核阴性表达组，然后运用统计学方法分析两组病人的临床特征以及总生存期的差异。该种通过结直肠癌免疫学指标TEAD4细胞核阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和总体预后进行评价的方法，即根据结直肠癌患者肿瘤组织中TEAD4细胞核阳性表达的情况可以直接确定患者的临床特征和预后信息。然而现有技术中，并没有通过结直肠癌标志物CUL9细胞浆阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：本专利技术提供一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，所述CUL9作为标志物，基于CUL9细胞浆阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。本专利技术提供一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，具体方法为：a.制作蜡块和组织芯片；b.组织芯片包埋；c.脱蜡水化；d.抗原修复并封闭；e.CUL9一抗抗体过夜孵育；f.洗片后二抗室温孵育，显色放大液；g.孵育后DAB显色；h.苏木精染核，固定；i.脱水至腊，切片保持；j.结果读片；k.统计分析：所有数据均使用SPSS统计软件包(22.0；SPSSInc.，Chicago，Illinois，USA)进行统计分析，OS的计算及分析使用Kaplan-Meier方法进行，危险因素表示为危险比[HR,95％置信区间(Confidenceinterval，CI)]，P值小于0.05被定义为有统计显著性。在本专利技术的一个实施方式中，抗原修复并封闭的方法为：将组织切片浸于由EDTA配制的抗原修复液中，加热，取出后室温下冷却，洗涤，将组织切片浸泡在灭活液中灭活后，洗涤，将组织切片擦洗干净，在每张组织切片上滴加5％的BSA水溶液作为封闭液，孵育，封闭非特异性抗原。在本专利技术的一个实施方式中，步骤j所述的结果读片的方法为：CUL9阳性染色为细胞胞浆上呈现棕黄色颗粒，由两人分别独立进行免疫组化评分，评分结果有异议时重新评估，对染色结果进行评分，包括两个指标：1)染色强度：0分(-)：0％细胞染色；1分(+)：0-10％细胞不完全染色；2分(++)：10％细胞弱至中等完全染色；3分(+++)：10％细胞中度至强烈完整的染色；2)阳性染色占全部视野的比例；两个指标的乘积为最终的免疫组化评分，即表达量，Cut-off值取表达量的中位数，大于cut-off值为高表达，小于等于Cut-off值为低表达。本专利技术还提供一种验证CUL9细胞浆高表达和低表达情况与结直肠癌患者的临床特征和预后生存率的关系的方法，首先制成肿瘤组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据免疫评分进行分组，最后按照CUL9的细胞浆着染情况将患者分为CUL9细胞浆高表达组和CUL9细胞浆低表达组，然后运用统计学方法分析两组病人的临床特征以及总生存期的差异。在本专利技术的一个实施方式中，对于结直肠癌患者，在手术切除标本后，首先制作基于石蜡切片的组织芯片，通过免疫组织化学的实验方式验证CUL9的表达水平。在本专利技术的一个实施方式中，具体方法为：a.制作蜡块和组织芯片；b.组织芯片包埋；c.脱蜡水化；d.抗原修复并封闭；e.CUL9一抗抗体过夜孵育；f.洗片后二抗室温孵育，显色放大液；g.孵育后DAB显色；h.苏木精染核，固定；i.脱水至腊，切片保持；j.结果读片；k.统计分析：所有数据均使用SPSS统计软件包进行统计分析，OS的计算及分析使用Kaplan-Meier方法进行，危险因素表示为危险比[HR,95％置信区间(Confidenceinterval，CI)]，P值小于0.05被定义为有统计显著性，统计分析数据为CUL9免疫组化评分数据和及结直肠癌临床病理特征的相关性分析。在本专利技术的一个实施方式中，抗原修复并封闭的方法为：将组织切片浸于由EDTA配制的抗原修复液中，加热，取出后室温下冷却，洗涤，将组织切片浸泡在灭活液中灭活后，洗涤，将组织切片擦洗干净，在每张组织切片上滴加5％的BSA水溶液作为封闭液，孵育，封闭非特异性抗原。在本专利技术的一个实施方式中，步骤j所述的结果读片的方法为：CUL9阳性染色为细胞胞浆上呈现棕黄色颗粒，由两人分别独立进行免疫组化评分，评分结果有异议时重新评估，对染色结果进行评分，包括两个指标：1)染色强度：0分(-)：0％细胞染色；1分(+)：0-10％细胞不完全染色；2分(++)：10％细胞弱至中等完全染色；3分(+++)：10％细胞中度至强烈完整的染色；2)阳性染色占全部视野的比例；两个指标的乘积为最终的免疫组化评分，即表达量，Cut-off值取表达量的中位数，大于cut-off值为高表达，小于等于Cut-off值为低表达。在本专利技术的一个实施方式中，本专利技术数据提示：CUL9高表达与肿瘤直径>4cm(P＝0.001)，肿瘤低分化(P＝0.037)，N1/2(P＝0.028)和M1(P＝0.001)正相关；CUL9蛋白高表达(P＝0.001，HR＝1.71，95％CI：1.45-2.34)都是OS较差相关。多因素回归分析结果显示：T3/T4分期(P＝0.001，HR＝1.23，95％CI：1.03-1.67本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，所述CUL9作为标志物，基于CUL9细胞浆阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。/n

【技术特征摘要】
1.一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，所述CUL9作为标志物，基于CUL9细胞浆阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。


2.根据权利要求1所述的一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，具体方法为：
a.制作蜡块和组织芯片；
b.组织芯片包埋；
c.脱蜡水化；
d.抗原修复并封闭；
e.CUL9一抗抗体过夜孵育；
f.洗片后二抗室温孵育，显色放大液；
g.孵育后DAB显色；
h.苏木精染核，固定；
i.脱水至腊，切片保持；
j.结果读片；
k.统计分析：所有数据均使用SPSS统计软件包进行统计分析，OS的计算及分析使用Kaplan-Meier方法进行，危险因素表示为危险比[HR,95％置信区间(Confidenceinterval，CI)]，P值小于0.05被定义为有统计显著性，统计分析数据为CUL9免疫组化评分数据和及结直肠癌临床病理特征的相关性分析。


3.根据权利要求1所述的一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，抗原修复并封闭的方法为：将组织切片浸于由EDTA配制的抗原修复液中，加热，取出后室温下冷却，洗涤，将组织切片浸泡在灭活液中灭活后，洗涤，将组织切片擦洗干净，在每张组织切片上滴加5％的BSA水溶液作为封闭液，孵育，封闭非特异性抗原。


4.根据权利要求1所述的一种CUL9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，步骤j所述的结果读片的方法为：
CUL9阳性染色为细胞胞浆上呈现棕黄色颗粒，由两人分别独立进行免疫组化评分，评分结果有异议时重新评估，对染色结果进行评分，包括两个指标：1)染色强度：0分(-)：0％细胞染色；1分(+)：0-10％细胞不完全染色；2分(++)：10％细胞弱至中等完全染色；3分(+++)：10％细胞中度至强烈完整的染色；2)阳性染色占全部视野的比例；
两个指标的乘积为最终的免疫组化评分，即表达量，Cut-off值取表达量的中位数，大于cut-off值为高表达，小于等于Cut-off值为低表达。


5.一种验证CUL9细胞浆高表达和低表达情况与结直肠癌患者的临床特征和预后生存率的关系的方法，其特征在于，首先制成肿瘤组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据免疫评分进行分组，最后按照CUL9的细胞浆着染情况将患者分为CUL9细胞浆高表达组和CUL9细胞浆低表达组，然后运用统计学方法分析两组病人的临床特征以及总生存期的差异。


6.根据权利要求5所述一种验证CUL9细胞浆高表达和...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕洋，汤文涛，郑鹏，徐宇秋，林奇，许剑民，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31