乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片技术

本发明专利技术实施例涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片，乳酸脱氢酶测定试剂球包括第一试剂球和第二试剂球，形成第一试剂球的第一试剂液包括：第一缓冲液40‑200mmol/L、碘硝基氯化四氮唑蓝0.1‑10g/L、第一赋形剂10‑100g/L和稳定剂0.1‑10g/L，形成第二试剂球的第二试剂液包括：第二缓冲液40‑200mmol/L、乳酸盐10‑100g/L、氧化型辅酶I：10‑50g/L、黄递酶20‑100U/L和第二赋形剂10‑100g/L。检测时，将生成的还原型辅酶I(NADH)进一步反应生成有色稳定的甲臜，从而，可以检测490nm波长处的吸光度来定量乳酸脱氢酶的浓度，使得灵敏度大幅提高，此外，该剂量范围的第一赋形剂和第二赋形剂能分别保证第一试剂球和第二试剂球具有较好的形态及复融溶解性，具有较高的稳定性和精密度。

【技术实现步骤摘要】
乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片
本专利技术实施例涉及医学检测
，尤其涉及一种乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片。
技术介绍
乳酸脱氢酶广泛存在于机体中，以肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺和肺等组织中为最多，这些组织中的乳酸脱氢酶的浓度远高于血清中的乳酸脱氢酶的浓度。所以当少量组织坏死时，坏死组织中的乳酸脱氢酶释放入血液使得血液中脱酸脱氢酶的浓度升高。因此，临床上常通过测定乳酸脱氢酶的浓度，以对心梗、肝病和某些恶性肿瘤进行辅助诊断。目前，临床上，通常采用L-P速率法测定血清中乳酸脱氢酶的浓度，在L-P速率法中，试剂中的氧化型辅酶I(NAD+)会转化为还原型辅酶I(NADH)，基于乳酸脱氢酶的浓度与还原型辅酶I(NADH)的生成量呈正比，通过监测还原型辅酶I(NADH)的生成量以测定乳酸脱氢酶的浓度。然而，还原型辅酶I(NADH)的活性容易受各种因素的干扰，其自身易被氧化，直接影响乳酸脱氢酶的测定结果，检测准确性低，灵敏度低。此外，还需依赖大型全自动生化分析仪，难以应用在病人身边快速诊断，即POCT诊断。虽然，现有用于检测其它项目的冻干试剂球，但是，现有的冻干试剂球形态较差，难以完全冻干，导致其具有较低的稳定性和准确性。
技术实现思路
本专利技术实施例主要解决的技术问题是提供一种乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法、乳酸脱氢酶测定试剂球及微流控芯片，采用该方法制备得到的乳酸脱氢酶测定试剂球具有较高的灵敏度、较好的形态及复融溶解性，同时，还具有较高的稳定性和准确度。为解决上述技术问题，第一方面，本专利技术实施例中提供给了一种乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法，所述乳酸脱氢酶测定试剂球包括第一试剂球和第二试剂球；所述方法包括：分别配置第一试剂液和第二试剂液；将所述第一试剂液的液滴滴在液氮中，形成第一冰球，将所述第二试剂液的液滴滴在液氮中，形成第二冰球；将所述第一冰球冷冻干燥制得所述第一试剂球，将所述第二冰球冷冻干燥制得所述第二试剂球；其中，所述第一试剂液包括以下组分：第一缓冲液40-200mmol/L、碘硝基氯化四氮唑蓝0.1-10g/L、第一赋形剂10-100g/L和稳定剂0.1-10g/L，并且，所述第一试剂液的PH值在第一预设范围内；所述第二试剂液包括以下组分：第二缓冲液40-200mmol/L、乳酸盐10-100g/L、氧化型辅酶I：10-50g/L、黄递酶20-100U/L和第二赋形剂10-100g/L，并且，所述第二试剂液的PH值在第二预设范围内。在一些实施例中，所述配置第一试剂液的步骤包括：将所述第一缓冲液加入第一预设定量的水中；待所述第一缓冲液在所述水中完全溶解后，加入所述碘硝基氯化四氮唑蓝，得到第一溶液，并调节所述第一溶液的PH值至第三预设范围内，其中，所述第三预设范围与所述第一预设范围存在交集，所述第三预设范围的下限大于所述第一预设范围的下限，所述第三预设范围的上限大于所述第一预设范围的上限；将所述第一赋形剂和所述稳定剂依次加入所述第一溶液中，得到第二溶液，并调节所述第二溶液的PH值至所述第一预设范围内，将第二预设定量的水加入所述第二溶液中，得到第三预设定量的所述第一试剂液。在一些实施例中，所述配置第二试剂液的步骤包括：将所述第二缓冲液加入第一预设定量的水中；待所述第二缓冲液在所述水中完全溶解后，加入所述乳酸盐，得到第三溶液，并调节所述第三溶液的PH值至第四预设范围内，其中，所述第四预设范围与所述第二预设范围存在交集，所述第四预设范围的下限大于所述第二预设范围的下限，所述第四预设范围的上限大于所述第二预设范围的上限；将所述第二赋形剂加入所述第三溶液中，得到第四溶液，并调节所述第四溶液的PH值至所述第二预设范围内，依次将所述氧化型辅酶I、所述黄递酶、第二预设定量的水加入所述第四溶液中，得到第三预设定量的所述第二试剂液。在一些实施例中，所述第一缓冲液包括Tris缓冲液，咪唑缓冲液，磷酸盐缓冲液，二乙醇缓冲液，N-乙酰-D-葡胺缓冲液中的至少一种；和/或，所述第二缓冲液包括Tris缓冲液，咪唑缓冲液，磷酸盐缓冲液，二乙醇缓冲液，N-乙酰-D-葡胺缓冲液中的至少一种。在一些实施例中，所述稳定剂包括六水氯化镁，氯化钾，海藻糖，蔗糖，牛血清白蛋白，螯合剂EDTA中的至少一种。在一些实施例中，所述第一赋形剂包括甘露醇，PEG3350，PEG8000，葡聚糖1万，葡聚糖4万，水溶性淀粉中的至少一种；和/或，所述第二赋形剂包括甘露醇，PEG3350，PEG8000，葡聚糖1万，葡聚糖4万，水溶性淀粉中的至少一种。在一些实施例中，所述第一预设范围为7.0-8.0，所述第二预设范围为8.0-9.0。为解决上述技术问题，第二方面，本专利技术实施例中提供给了一种乳酸脱氢酶测定试剂球，采用如上第一方面所述的乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法制备得到。为解决上述技术问题，第三方面，本专利技术实施例中提供给了一种微流控芯片，包括芯片本体和如上第二方面所述的乳酸脱氢酶测定试剂球，其中，所述乳酸脱氢酶测定试剂球设置于所述芯片本体内部。为解决上述技术问题，第四方面，本专利技术实施例中提供给了一种生化分析仪，包括分析仪本体、反应槽以及如上第三方面所述的微流控芯片，其中，所述反应槽开设于所述分析仪本体内，所述微流控芯片安装于所述反应槽。本专利技术实施例的有益效果：区别于现有技术的情况，本专利技术实施例提供的乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法、乳酸脱氢酶测定试剂球和微流控芯片，其中，乳酸脱氢酶测定试剂球包括第一试剂球和第二试剂球，形成第一试剂球的第一试剂液的组分包括：第一缓冲液40-200mmol/L、碘硝基氯化四氮唑蓝0.1-10g/L、赋形剂10-100g/L和稳定剂0.1-10g/L，并且，所述第一试剂液的PH值在第一预设范围内，形成第二试剂球的第二试剂液的组分包括：第二缓冲液40-200mmol/L、乳酸盐10-100g/L、氧化型辅酶I：10-50g/L、黄递酶20-100U/L和赋形剂10-100g/L，并且，所述第二试剂液的PH值在第二预设范围内。当检测样本(例如血清)与乳酸脱氢酶测定试剂球接触溶解时，乳酸在乳酸脱氢酶催化作用下生成丙酮酸的过程中氧化型辅助酶I(NAD+)会生成还原型辅酶I(NADH)，还原型辅酶I(NADH)进一步与碘硝基氯化四氮唑蓝在黄递酶的催化作用下，生成有色稳定的甲臜，基于甲臜在490nm波长处有吸收峰，从而，可以检测490nm波长处的吸光度来定量乳酸脱氢酶的浓度，该方法检测的吸光度远高于检测还原型辅酶I(NADH)在340nm波长处的吸光度，从而，使得乳酸脱氢酶测定试剂球的灵敏度得到大幅提高，此外，该剂量范围的第一赋形剂和第二赋形剂能够分别保证第一试剂球和第二试剂球具有较好的形态及复融溶解性，从而，具有较高的稳定性和精密度。附图说明一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法，其特征在于，所述乳酸脱氢酶测定试剂球包括第一试剂球和第二试剂球；/n所述方法包括：/n分别配置第一试剂液和第二试剂液；/n将所述第一试剂液的液滴滴在液氮中，形成第一冰球，将所述第二试剂液的液滴滴在液氮中，形成第二冰球；/n将所述第一冰球冷冻干燥制得所述第一试剂球，将所述第二冰球冷冻干燥制得所述第二试剂球；/n其中，所述第一试剂液包括以下组分：第一缓冲液40-200mmol/L、碘硝基氯化四氮唑蓝0.1-10g/L、第一赋形剂10-100g/L和稳定剂0.1-10g/L，并且，所述第一试剂液的PH值在第一预设范围内；/n所述第二试剂液包括以下组分：第二缓冲液40-200mmol/L、乳酸盐10-100g/L、氧化型辅酶I：10-50g/L、黄递酶20-100U/L和第二赋形剂10-100g/L，并且，所述第二试剂液的PH值在第二预设范围内。/n

【技术特征摘要】
1.一种乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法，其特征在于，所述乳酸脱氢酶测定试剂球包括第一试剂球和第二试剂球；
所述方法包括：
分别配置第一试剂液和第二试剂液；
将所述第一试剂液的液滴滴在液氮中，形成第一冰球，将所述第二试剂液的液滴滴在液氮中，形成第二冰球；
将所述第一冰球冷冻干燥制得所述第一试剂球，将所述第二冰球冷冻干燥制得所述第二试剂球；
其中，所述第一试剂液包括以下组分：第一缓冲液40-200mmol/L、碘硝基氯化四氮唑蓝0.1-10g/L、第一赋形剂10-100g/L和稳定剂0.1-10g/L，并且，所述第一试剂液的PH值在第一预设范围内；
所述第二试剂液包括以下组分：第二缓冲液40-200mmol/L、乳酸盐10-100g/L、氧化型辅酶I：10-50g/L、黄递酶20-100U/L和第二赋形剂10-100g/L，并且，所述第二试剂液的PH值在第二预设范围内。


2.根据权利要求1所述的乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法，其特征在于，所述配置第一试剂液的步骤包括：
将所述第一缓冲液加入第一预设定量的水中；
待所述第一缓冲液在所述水中完全溶解后，加入所述碘硝基氯化四氮唑蓝，得到第一溶液，并调节所述第一溶液的PH值至第三预设范围内，其中，所述第三预设范围与所述第一预设范围存在交集，所述第三预设范围的下限大于所述第一预设范围的下限，所述第三预设范围的上限大于所述第一预设范围的上限；
将所述第一赋形剂和所述稳定剂依次加入所述第一溶液中，得到第二溶液，并调节所述第二溶液的PH值至所述第一预设范围内，将第二预设定量的水加入所述第二溶液中，得到第三预设定量的所述第一试剂液。


3.根据权利要求1所述的乳酸脱氢酶测定试剂球的制备方法，其特征在于，所述配置第二试剂液的步骤包括：
将所述第二缓冲液加入第一预设定量的水中；
待所述第二缓冲液在所述水中完全溶解后，加入所述乳酸盐，得到第三溶液，并调节所述第三溶液的PH值至第四预设范围内，其中，所述第四预设范围与所述第二预设范围存在交集，所述第四预设范围的...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟健，汪晨宇，周慧欣，陈明，
申请(专利权)人：深圳市锦瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44