【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗GPC3嵌合抗原受体(CAR)与反式共刺激分子的组合及其治疗用途相关申请本申请要求于2018年11月7日提交的美国临时申请号62/756,683的申请日的权益。先前申请的全部内容以引用的方式并入本文。专利技术背景癌症免疫疗法(包括基于细胞的疗法)用于激发攻击肿瘤细胞的免疫反应，同时保留正常组织。这是治疗各种类型癌症的有前途的选择，因为它有可能逃避耐药性的遗传和细胞机制，并在保留正常组织的同时靶向肿瘤细胞。基于细胞的疗法可能涉及具有反应性偏向癌细胞的细胞毒性T细胞。Eshhar等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.；1993；90(2):720-724；Geiger等人，JImmunol.1999；162(10):5931-5939；Brentjens等人，Nat.Med.2003；9(3):279-286；Cooper等人，Blood.2003；101(4):1637-1644；以及Imai等人，Leukemia.2004；18:676-684。一种方法是表达嵌合受体，其具有与一个或多个T细胞活化信...
【技术保护点】
1.一种基因工程改造的造血细胞，其中所述造血细胞共表达：/n(i)嵌合抗原受体(CAR)多肽；其中所述CAR多肽包含：/n(a)细胞外抗原结合结构域，其中所述细胞外结合结构域对磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)具有特异性；/n(b)跨膜结构域；及/n(c)胞质信号传导结构域；和/n(ii)共刺激多肽，其中所述共刺激多肽是B7/CD28超家族的成员、肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员或其配体，其中所述共刺激多肽由外源核酸编码。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181107 US 62/756,6831.一种基因工程改造的造血细胞，其中所述造血细胞共表达：
(i)嵌合抗原受体(CAR)多肽；其中所述CAR多肽包含：
(a)细胞外抗原结合结构域，其中所述细胞外结合结构域对磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)具有特异性；
(b)跨膜结构域；及
(c)胞质信号传导结构域；和
(ii)共刺激多肽，其中所述共刺激多肽是B7/CD28超家族的成员、肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员或其配体，其中所述共刺激多肽由外源核酸编码。
2.如权利要求1所述的造血细胞，其中所述共刺激多肽是B7/CD28超家族的成员或其配体，选自由以下组成的组：CD28、CD80、CD86、ICOS、ICOSL、B7-H3、B7-H4、VISTA、TMIGD2、B7-H6和B7-H7。
3.如权利要求1所述的造血细胞，其中所述共刺激多肽是TNF超家族的成员或其配体，其选自由以下组成的组：4-1BB、4-1BBL、BAFF、BAFFR、CD27、CD70、CD30、CD30L、CD40、CD40L、DR3、GITR、GITRL、HVEM、LIGHT、TNF-β、OX40、OX40L、RELT、TACI、TL1A、TNF-α、TNFRII、BCMA、EDAR2、TROY、LTBR、EDAR、NGFR、OPG、RANK、DCR3、TNFR1、FN14(TweakR)、APRIL、EDA-A2、TWEAK、LTb(TNF-C)、NGF、EDA-A1、APP淀粉样前体蛋白(APP)和TRAIL。
4.如权利要求1-3中任一项所述的造血细胞，其中所述CAR多肽还包含至少一种共刺激信号传导结构域。
5.如权利要求4所述的造血细胞，其中所述至少一个共刺激信号传导结构域是选自由以下组成的组的共刺激分子：4-1BB、CD28、CD28LL→GG变体、OX40、ICOS、CD27、GITR、ICOS、HVEM、TIM1、LFA1和CD2。
6.如权利要求4所述的造血细胞，其中：
(i)所述CAR多肽包含CD28共刺激分子的共刺激结构域；并且
(ii)所述共刺激多肽是BAFFR或CD27。
7.如权利要求6所述的造血细胞，其中所述CD28共刺激分子包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。
8.如权利要求4所述的造血细胞，其中：
(i)所述CAR多肽包含4-1BB共刺激分子的共刺激结构域；并且
(ii)所述共刺激多肽是CD70、LIGHT或OX40L。
9.如权利要求8所述的造血细胞，其中所述4-1BB共刺激分子包含SEQIDNO:22的氨基酸序列。
10.如权利要求8或权利要求9所述的造血细胞，其中所述CD70包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，所述LIGHT包含SEQIDNO:43的氨基酸序列，并且所述OX40L包含SEQIDNO:47的氨基酸序列。
11.如权利要求1-10中任一项所述的造血细胞，其中(a)的细胞外抗原结合结构域是对GPC3有特异性的单链抗体片段(scFv)。
12.如权利要求11所述的造血细胞，其中所述scFv包含如SEQIDNO:74所列的重链可变区和如SEQIDNO:75所列的轻链可变区。
13.如权利要求1-12中任一项所述的造血细胞，其中(b)的跨膜结构域是单程膜蛋白的。
14.如权利要求13所述的造血细胞，其中所述跨膜结构域是选自由以下组成的组的膜蛋白：CD8α、CD8β、4-1BB、CD28、CD34、CD4、FcεRIγ、CD16A、OX40、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、CD32、CD64、VEGFR2、FAS和FGFR2B。
15.如权利要求1-14中任一项所述的造血细胞，其中(b)的跨膜结构域是非天然存在的疏水蛋白区段。
16.如权利要求1-15中任一项所述的造血细胞，其中(c)中的胞质信号传导结构域包含基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。
17.如权利要求16所述的造血细胞，其中(c)的胞质信号传导结构域是CD3ζ或FcεR1γ的胞质结构域。
18.如权利要求1-17中任一项所述的造血细胞，其中所述CAR多肽还包含铰链结构域，其位于(a)的C端和(b)的N端。
19.如权利要求18所述的造血细胞，其中所述铰链结构域是CD28、CD16A、CD8α,或IgG的。
20.如权利要求18或权利要求19所述的造血细胞，其中所述铰链结构域是非天然存在的肽。
21.如权利要求1-20中任一项所述的造血细胞，其中所述CAR多肽还包含在其N端的信号肽。
22.如权利要求1-21中任一项所述的造血细胞，其中所述造血细胞是造血干细胞或免疫细胞，任选地其中所述免疫细胞是自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或T细胞。
23.如权利要求22所述的造血细胞，其中所述免疫细胞是T细胞，其中内源性T细胞受体、内源性主要组织相容性复合物、内源性β-2-微球蛋白或其组合的表达已受到抑制或消除。
24.如权利要求1-23中任一项所述的造血细胞，其中所述造血细胞衍生自外...
【专利技术属性】
技术研发人员：K麦金尼斯，C威尔逊，B赫林，G莫茨，
申请(专利权)人：SOTIO有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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