本发明专利技术公开了一种具有缓解动脉粥样硬化功效的植物乳杆菌ZDY04，保藏地点为武汉市中国典型物培养保藏中心，保藏编号为CCTCCM 2021039。本发明专利技术植物乳杆菌来源于传统发酵食品腌菜，革兰氏阳性菌，能通过降低血清TMAO水平，促进胆固醇逆向转运，发挥抗动脉粥样硬化作用。本发明专利技术选取具有缓解动脉粥样硬化能力的植物乳杆菌ZDY04安全无副作用，对心血管疾病治疗具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
一种具有缓解动脉粥样硬化功效的植物乳杆菌ZDY04
本专利技术属微生物领域，具体涉及一种具有缓解动脉粥样硬化功效的植物乳杆菌ZDY04。
技术介绍
动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是威胁人类健康生活的常见病。在很多国家，动脉粥样硬化及其引起的心血管疾病死亡率居首位。动脉粥样硬化性疾病是诱发心血管疾病(主要包括冠心病、外周动脉疾病和脑卒中等)的最主要因素，其发病机制复杂，亦是心血管疾病致残致死的主要原因。目前认为,动脉粥样硬化疾病是多种复杂因素相互作用的结果。动脉粥样硬化进展的特征分成几个阶段：脂肪条纹形成、动脉粥样硬化形成和动脉粥样硬化斑块形成。当受到各种有害刺激时，内皮细胞功能发生障碍并被活化，活化的内皮随后表达粘附分子，导致白细胞(例如T细胞和单核细胞)的浸润，其可分化成巨噬细胞和树突细胞。同时，修饰的脂蛋白在动脉壁中的沉积增加了内皮细胞的通透性，促进了泡沫细胞和坏死核心的形成以及巨噬细胞的脂质摄取。病变进程随血管平滑肌细胞的迁移和增殖、细胞外基质的沉积以及覆盖坏死核心的纤维帽形成而发展。同时，斑块中的大量免疫细胞和相关细胞因子不断募集白细胞，促进细胞凋亡，影响斑块的组成，最终加剧斑块形成和破裂。近年来,研究表明动脉粥样硬化的发生发展与肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(TMAO)紧密相关，TMAO通过诱发炎症、促进泡沫细胞形成及抑制胆固醇逆向转运进而促进动脉粥样硬化发生发展。乳酸菌(Lacticacidbacteria,LAB)泛指产生乳酸等有机酸的细菌的总称，而植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)是乳酸菌的一种。目前常见功能包括：(1)调节宿主肠道菌群，从而达到预防和缓解肠道健康的功能，如缓解由DSS诱导的结肠炎和预防幽门螺杆菌引起的胃病等；(2)调节机体免疫反应，导致IL-6和TNF-α的减少，提高NK细胞的活性等；(3)促进大分子物质的消化与吸收，如蛋白质和乳糖等；(4)降低胆固醇等。此外有研究表明动脉粥样硬化的治疗与肠道微生物相关，目前常见的药物包括降脂药物(如他汀类药物)，抗血小板类药物(如血栓素合成酶抑制剂和血栓素受体拮抗剂)和抗炎症类药物(如磷脂酶抑制)剂等。然而这些药物对部分人不敏感且存在副作用，而通过益生菌干预来调节肠道微生态从而缓解动脉粥样硬化更安全且价格低廉。因此，本专利技术从微生态治疗角度出发筛选出一株具有缓解动脉粥样硬功能的菌株，所述菌株通过降低血清TMAO水平，促进胆固醇逆向转运来发挥抗动脉粥样硬化的功效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有缓解动脉粥样硬化功能的植物乳杆菌。为解决上述问题，本专利技术提供一种植物乳杆菌，所述植物乳杆菌是一种具有缓解动脉粥样硬化功效的植物乳杆菌ZDY04，于2021年1月8日保藏于中国武汉大学中国典型培养物保藏中心，编号为：CCTCCNO：M2021039。已于2021年1月23日由中国典型培养物保藏中心检测为存活。与现有技术相比，本专利技术提供的益生菌植物乳杆菌ZDY04在缓解动脉粥样硬化方面具有较好的效果，其主要通过降低血清TMAO水平，促进胆固醇逆向转运，发挥抗动脉粥样硬化作用。附图说明图1为本专利技术的植物乳杆菌ZDY04抑制ApoE-/-小鼠全长主动脉中动脉粥样硬化病变的形成，A为全长主动脉油红O染色，B为全长主动脉斑块病变区域统计结果，C为主动脉弓斑块病变区域统计结果，D为胸主动脉斑块病变区域统计结果，E为腹主动脉斑块病变区域统计结果；图2为本专利技术的植物乳杆菌ZDY04抑制ApoE-/-小鼠主动脉根部中动脉粥样硬化病变的形成，A为主动脉根部H&E、油红O和Masson染色，B为斑块面积统计结果，C为斑块内脂滴占比统计结果，D为胶原纤维占比统计结果；图3为本专利技术的植物乳杆菌ZDY04减少ApoE-/-小鼠主动脉根部中斑块内巨噬细胞阳性区域，A为小鼠主动脉根部AS斑块CD68和α-SMA免疫荧光染色，B为CD68阳性区域统计结果，C为α-SMA阳性区域统计结果；图4本专利技术的植物乳杆菌ZDY04减少ApoE-/-小鼠中血清TMAO和粪便TMA的水平，A为盲肠内TMA统计结果，B为血清内TMAO含量统计结果，C为肝脏Fmo3基因表达统计结果，D为肝脏FMO3蛋白表达及统计结果；图5本专利技术的植物乳杆菌ZDY04对小鼠血清胆固醇和胆汁酸的影响，A为血清总胆固醇统计结果，B为低密度脂蛋白胆固醇统计结果，C为高密度脂蛋白胆固醇统计结果；图6为本专利技术的植物乳杆菌ZDY04上调小鼠肝脏中胆固醇逆转运相关基因的表达，A为肝脏Sr-b1基因mRNA表达，B为肝脏Abcg5基因mRNA表达、C为肝脏Abcg8基因mRNA表达，D为肝脏Abcg1基因mRNA表达，E为Cyp7a1基因mRNA表达，F为肝脏CYP7A1蛋白表达。具体实施方式下面结合实例对本专利技术进行进一步的说明。实施例1植物乳杆菌ZDY04的分离与鉴定从传统发酵食品腌菜中进行乳酸菌分离。取腌菜稀释液涂布于MRS琼脂平板上，厌氧培养24h，用接种环挑去单菌落进行菌落PCR，并进行16SrDNA测序。测序结果见序列表。结果显示与植物乳杆菌有最高的同源性，因此将其命名为植物乳杆菌ZDY04。实施例2植物乳杆菌ZDY04缓解动脉粥样硬化将6-8周龄的30只雄性ApoE-/-小鼠随机分成三组，每组10只。一组喂食普通饲料并灌胃PBS，一组喂食普通饲料(含1.3％胆碱)并灌胃PBS，一组喂食普通饲料(含1.3％胆碱)并按1×109CFU/天/只小鼠剂量灌胃植物乳杆菌ZDY04，连续灌胃16周。以3％戊巴比妥钠按90mg/kg麻醉小鼠，用医用胶带将小鼠固定于取材板(可透水)；用湿润的棉花将小鼠的胸腹部毛发湿润；剪开小鼠前胸部皮肤，剪掉其胸骨及整个胸廓使整个腹腔与胸腔暴露；剪断小鼠下腔静脉，取10mL预冷的无菌PBS溶液，输液针头刺入左心室心尖部，缓慢均匀推注PBS液，直至流出的液体清亮。接着用4％多聚甲醛溶液灌注小鼠，直接小鼠尾巴僵硬；灌流结束后，将肺逐叶从蒂部剪去，去除胸腺，胸腔仅剩心脏与主动脉，在心底上方简单分离；在体式显微镜下仔细剥离全长主动脉(包含主动脉弓直至髂动脉分支处)外的脂肪和附着结缔组织，然后从脊柱上仔细取出整条主动脉和心脏；将全长主动脉和心脏置于4％多聚甲醛中固定24h，待进行油红O染色。结果如图1所示，植物乳杆菌ZDY04相比模型组能显著抑制主动脉病变形成。通过油红O染色和HE染色结果表明植物乳杆菌ZDY04能显著抑制小鼠主动脉根部动脉粥样硬化的形成(图2)。实施例3植物乳杆菌ZDY04抑制巨噬细胞浸润主动脉根部切片采用CD68和α-SMA免疫荧光双标双抗的染色方法来特异性的标记巨噬细胞。从冰冻切片免疫荧光CD68染色结果中可发现植物乳杆菌ZDY04组的主动脉根部的巨噬细胞面积显著少于对照组(图3)。这说明植物乳杆菌ZDY04可通过抑制巨噬细胞浸润来缓解动脉粥样硬化。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种植物乳杆菌，其特征在于：所述植物乳杆菌是一种具有缓解动脉粥样硬化功效的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZDY04，于2021年1月8日保藏于中国培养物保藏中心，编号为：CCTCC M2021039。/n
【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌，其特征在于：所述植物乳杆菌是一种具有缓解动脉粥样硬化功效的植物乳杆菌(Lactobacillu...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏华，裘梁，赵奎，陶雪莹，张志鸿，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西;36
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。