一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌制造技术

本发明专利技术提供了一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)AR340菌株，该副干酪乳杆菌AR340菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15762，保藏时间为2018年5月14日。本发明专利技术的副干酪乳杆菌AR340菌株具有良好的自聚能力、共聚能力和疏水性能，即不在咽部和口腔大量聚集，同时保证一定数量的菌体粘附在口腔粘膜上发挥作用，在一定程度上减少了乙型溶血性链球菌菌株的自聚，降低致病菌的存活率，还能有效拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的生长，降低巨噬细胞NO产生量，可用于调节咽部菌群，缓解炎症反应，预防、减轻或治疗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌导致的感染症状。

【技术实现步骤摘要】
一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌
本专利技术属于生物
，特别涉及功能性乳酸菌的生产开发领域，具体涉及一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌。
技术介绍
咽炎是咽部粘膜，粘膜下组织的炎症，常为上呼吸道感染的一部分，以喉咙痛、干痒、恶心、欲吐等不适症状为主，也是世界上最常见的疾病之一。在乙型溶血性链球菌、肺炎克雷伯菌、副流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌等致病菌侵袭下，咽部菌群失调，菌群多样性发生变化，原籍优势菌群减少、条件致病菌增多，引起原籍菌群拮抗能力下降和宿主免疫力降低，进而导致咽炎疾病的发生或加重疾病程度。咽炎在污染严重的发展中国家发病率极高，致病人群广泛，以学龄儿童和青少年中发病最为常见。作为临床多发病，咽炎病程长，反复发作，已严重影响和危害人体健康，同时给大众生活带来极大的不便。临床常采用抗生素、中成药等药物进行治疗，一般见效慢，副作用大，长期使用抗生素扰乱口腔原有菌群，且易产生耐药性长期，降低治疗效果；中成药复方制剂类主要以金银花、绿茶等为主要成分，药效显著的少有。乳酸菌是指发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。乳酸菌资源在自然界分布十分广泛，具有很强的适应能力，繁殖快并且可以与其它微生物建立起共生关系。乳酸菌除了具有传统的改善食品风味，提高食品营养价值，提高食品保藏性和附加值等作用，还在维护肠道功能和宿主健康中发挥着关键作用。大量研究表明乳酸菌具有特殊的生理功能，诸如治疗结肠炎症，调节机体肠道正常菌群，保持微生态平衡，增强免疫力，改善血脂，改善肝功能，防癌抗癌，延缓衰老，甚至预防龋齿、抗诱变、促进营养物质利用等。基于此，添加有功能性乳酸菌的食品如酸奶、含片、喷雾剂、口香糖等相继被开发出来用于治疗肠道、血压、口腔等方面的疾病。近年来，国外有相关研究表明益生菌有缓解及治疗咽炎的功效，唾液链球菌K12等能有效定殖于口腔粘膜细胞上，临床验证可预防链球菌所导致的咽喉炎，国内方面鲜有报道，仅有的专利《具有缓解咽喉部炎症功效的益生菌食品组合物及食品》(授权公告号：CN103798392B)主要采用具有抗胃幽门螺旋杆菌的能力的唾液乳杆菌和增加活性异黄酮含量动物双歧杆菌作为治疗咽炎的益生菌。因此，筛选出本身具抑制咽炎致病菌乙型溶血性链球菌和抗炎性能的乳酸菌，为未来开发能调节咽喉菌群的微生态制剂对咽炎进行靶点治疗，指导临床对咽炎疾病进行菌群调节及针对性的治疗提供了一定的依据，具有非常重要的经济效益和社会效益。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌。本专利技术提供了一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)AR340菌株，具有这样的特征：该副干酪乳杆菌AR340菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15762，保藏时间为2018年5月14日。本专利技术还提供了副干酪乳杆菌AR340菌株在发酵制备用于调节咽部菌群、降低咽炎炎症以及预防、缓解、减轻咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的感染症状的产品中的应用。专利技术的作用与效果根据本专利技术所涉及的拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌AR340，具有高安全性，同时经体外评估可知，由于具有抑制乙型溶血性链球菌的能力和一定的抗炎效果，细胞表面特性数据表明副干酪乳杆菌AR340不在咽部和口腔大量聚集，同时可以保证一定数量的菌体粘附在口腔粘膜上发挥作用，还在一定程度上减少了乙型溶血性链球菌菌株的自聚，降低致病菌菌株的存活率，有利于机体健康，从而可开发成保健食品或药品，调节咽部菌群，降低咽炎炎症，预防、缓解、减轻咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的感染症状的咽炎疾病。附图说明图1是本专利技术的实施例中副干酪乳杆菌AR340对乙型溶血性链球菌的抑制结果示意图；图2是本专利技术的实施例中副干酪乳杆菌AR340抗炎能力评估示意图；图3是本专利技术的实施例中pH对副干酪乳杆菌AR340生长情况的影响示意图；图4是本专利技术的实施例中副干酪乳杆菌AR340的自聚能力、共聚能力及疏水性评估示意图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本专利技术作具体阐述。本专利技术提供一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)AR340菌株，其特征在于，所述副干酪乳杆菌AR340菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15762，保藏时间为2018年5月14日，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本专利技术还提供了副干酪乳杆菌AR340菌株在发酵制备用于调节咽部菌群、降低咽炎炎症以及预防、缓解、减轻咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的感染症状的产品中的应用。本专利技术中，产品为食品、保健品或药品。实施例：实施例中的副干酪乳杆菌AR340筛选自上海微生物工程技术研究中心保藏菌株。1.可拮抗咽炎致病菌的副干酪乳杆菌的筛选1.1抑制乙型溶血性链球菌的乳酸菌的筛选将分离于泡菜、黄酒等食品来源的乳酸菌利用琼脂扩散方法进行体外抑菌实验：1％的比例将乳酸菌接种到液体MRS培养基中，37℃过夜静置培养；同时乙型溶血性链球菌接种到葡萄糖浸液肉汤培养基中，37℃过夜培养；在血平板上均匀涂布乙型溶血性链球菌，放置3个灭菌的牛津杯；向每个牛津杯孔中加入乳酸菌菌液(约200μL)；室温放置使乳酸菌菌液充分扩散，37℃静置培养24h，结果显示来源于加拿大冻干泡菜的副干酪乳杆菌AR340菌株能显著抑制乙型溶血性链球菌。1.2抗炎乳酸菌的筛选取处于对数生长期的小鼠巨噬细胞细胞RAW264.7，用2.5g/L的胰酶消化细胞，调节细胞浓度为1×106个/mL，接种于96孔板，100微升/孔。待细胞长至80％时汇合后分组，脂多糖LPS组：1μg/mL的脂多糖LPS刺激巨噬细胞24h。AR340组：1μg/mL的脂多糖LPS刺激巨噬细胞24h，加入AR340乳酸菌发酵混合液。加入量为100微升，浓度104CFU/mL。培养24h后收集上清，采用试剂盒测定NO含量。脂多糖LPS组在LPS(1μg/ml)存在下培养的巨噬细胞产生了大约53μmol/l。相比之下，与副干酪乳杆菌AR340能有效抑制巨噬细胞NO产生量，与脂多糖LPS组相比减少了约10％。1.3形态特征鉴定对AR340单菌落培养24h进行革兰氏染色和过氧化氢酶实验，结果显示AR340为革兰氏阳性、过氧化氢阴性。1.416SrDNA基因鉴定对副干酪乳杆菌AR340进行24h的厌氧培养后，提取基因组DNA，用引物27F和1492R克隆16SrDNA基因，纯化后送上海生工测序公司测序，所得序列经Blast比对，发现AR340与Lactococcusparacasei的同源性达到99％，故将分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)AR340菌株，其特征在于，所述副干酪乳杆菌AR340菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15762，保藏时间为2018年5月14日。/n

【技术特征摘要】
1.一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)AR340菌株，其特征在于，所述副干酪乳杆菌AR340菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCN...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾连中，夏永军，王光强，熊智强，宋馨，张汇，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31