一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法与应用技术

本发明专利技术提供一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法与应用，其特征在于：可湿性粉剂采用的组分,以重量份计，包括：

【技术实现步骤摘要】
一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法与应用
本专利技术涉及动植物寄生线虫学领域，具体涉及一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法与应用。
技术介绍
随着驱虫药在全世界的广泛使用，动物的寄生线虫对三大类驱虫药如苯并咪唑、阿维菌素/伊维菌素、左旋咪唑的耐药性不断发生，给畜牧业生产造成了严重的损失。为了减少寄生虫对化学药物的抗药性及畜产品中的残留，人们曾推荐轮牧、清理牧场粪便、饲喂天然含有丹宁的植物以及使用隐含抗原的疫苗等化药替代或补充方法来控制家畜的寄生虫病，而利用自然界线虫的天敌——食线虫真菌对家畜常见的线虫病进行生物防治是最有前景的化药替代/补充方法。利用食线虫真菌对家养动物寄生线虫病的生物防治，其原理是当动物随饲料吞食线虫真菌制剂或生防制剂喷洒于圈舍周围粪便中，真菌的孢子随粪便中虫卵同步发育，在此过程中虫卵孵化出幼虫刺激真菌产生捕食结构，进而捕杀寄生线虫的自由生活阶段的幼虫，致使感染性幼虫的数量不断减少，阻止了感染性幼虫进一步感染家畜。因此，间接的控制和减少了家畜体内的寄生虫数量，达到了生物防治的目的。在研究家养动物寄生线虫生物防治中，捕食线虫性真菌研究的尤为重要，国内外众多学者进行了大量的菌种分离和筛选研究，其中捕食线虫性真菌Arthrobotrys(Duddingtonia)flagrans（同物异名Trichotheciumflagrans，为了保持生物防治文献的连贯性，目前仍然习惯上称为D.flagrans）。由于该菌在培养期间能够产生大量的双层壁的厚垣孢子，拥有同类真菌不具备的特性，目前在国外，D.flagrans作为动物胃肠线虫生物防治候选菌种，已取得具有应用前景的成果。然而，国内在动物寄生线虫生物防治优良候选菌种的缺乏，严重制约了在该领域的研究，由于引进外来菌种有基因重组和物种入侵的风险。为此，我们自2011年以来，在全国20个省（自治区/直辖市）、48个县87个位点对食线虫真菌进行了较为广泛的分离、鉴定工作，分离出8属28种的食线虫真菌，在国内首次分离了D.flagrans13株，并对当地分离株的形态学、分子遗传学、捕食机理、体外杀虫试验、体内通过消化道试验以及其它生物学特性进行了研究，同时也对其它食线虫真菌进行了大量菌种筛选工作的研究。对于家畜寄生线虫的生物防治，研制针对具体菌株所适宜的剂型，制备成可直接供给动物食用，是非常重要的，这包括两方面的要求，一则要保持D.flagrans孢子具有稳定的活性传递到动物的粪便中有效发挥捕杀L3作用，二则是便于保存和运输。可湿性粉剂是农药的四大剂型之一，随着生物农药的不断发展，人们将一些真菌的分生孢子或厚垣孢子加入可湿性粉剂中制成生物农药应用于农业生产中。可湿性粉剂因为其使用时加水稀释，能够形成稳定的悬浮液，喷雾施用与水具有高度亲和性，故称为“可湿性”。可湿性粉剂制备成本低、易于储存和运输、施用范围广，能够很好的附着在叶片表面，还可以将不溶于水的原药加工成可喷雾的可湿性粉剂剂型以提高药效。目前国内外研究者们已经研制出木霉菌（Trichoderma）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、莱氏野村菌（Nomuraearileyi）、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)和苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)等生物防治的可湿性粉剂。木霉菌属(Hypocreales)的一些物种被认为是重要的线虫生物调节剂，可在不造成环境问题的情况下在农业土壤上使用,也是目前国内研究者们研究最多的生防菌，这些可湿性粉剂全部是应用于农业，目前还没有一种用于畜牧生产上寄生线虫防治的可湿性粉剂。另外，国内报道了关于食线虫真菌粉状制剂的研制及应用，将捕食线虫性真菌分离株接种在培养基上，温度25～28℃，相对湿度80%以上，进行厚垣孢子批量培养，15～25d终止培养并收获含孢子的培养物。将收获含孢子的培养物连同谷粒，置容器中摊薄，于35℃风干，风干时间3～5d；或者真空干燥，温度35℃～40℃，真空度为0.082～0.085MPa；或者自然风干，最后收获干燥物备用配置和粉碎。将干燥后培养物按照质量比为1:1混合，再把干燥的菌株培养物与麸皮按照质量比为1:5～1:10混合，混合物经粉碎机粉碎并搅拌均匀获得捕食线虫性真菌粉状制剂。但上述粉状制剂无法长期保存贮藏。经以前的研究，我国分离的D.flagrans菌株在形态学、培养特性方面不同于国外菌种，证明是适应我国地理特征的新分离株，与其它菌种相比具有诸多优良性能，适合于作为研制生防制剂的菌种。如果将D.flagrans厚垣孢子制备成可湿性粉剂，在能够保持其活性的前提下，则在畜牧业或农业的病虫害防治方面有广阔的应用前景。
技术实现思路
针对以上技术问题，本专利技术提供一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法与应用，实现以下专利技术目的：对动物寄生线虫的有效生物防治，易于贮藏存和运输、生产工艺简单且易于规模化生产，能在生产中方便应用、成本低。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，可湿性粉剂采用的组分,以重量份计，包括：D.flagrans厚垣孢子粉15～20份、亚甲基二萘二磺酸钠3～5份、皂角粉3～5份、十二烷基磺酸钠7～10份和硅藻土60～70份。进一步的，可湿性粉剂采用的组分,以重量份计，包括：D.flagrans厚垣孢子粉20份、亚甲基二萘二磺酸钠4份、皂角粉4份、十二烷基磺酸钠8份和硅藻土64份。所述D.flagrans厚垣孢子粉：含有的厚垣孢子数为5×106~107个/g。所述的制备方法包括食线虫性真菌D.flagrans分离株SDH035厚垣孢子的制备：将捕食线虫性真菌鞭式节丛孢D.flagrans分离株SDH035在玉米-小麦联合谷培养基上进行批量培养，温度25～30℃，相对湿度80～100%，15～25d终止培养。所述的制备方法包括D.flagrans厚垣孢子粉的制备：采用0.05%吐温-80将玉米-小麦联合谷培养基上的培养物洗脱下来，将洗下的厚垣孢子及菌丝，用搅拌器在300~350r/min的转速时持续搅拌1~1.5min，再经双层纱布过滤以除去菌丝，再经3000~3500r/min离心4.5~5.5min去上清，得到孢子浓缩液；将浓缩后的孢子液与硅藻土按3：1的比例混合并搅拌均匀，进行干燥；得到D.flagrans厚垣孢子粉。所述干燥：干燥温度为34~38℃，真空干燥，干燥时间为2.5~3.5h。所述的可湿性粉剂：含水量0.45%~0.64%，厚垣孢子含量1.21×106~1.487×106个/g。润湿时间为56s~67s，孢子悬浮率60.45%~74.0%，pH6.7~6.8。制剂中的厚垣孢子在24h内的萌发率为33.92~34.4%。一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的应用，所述可湿性粉剂在体外对绵羊捻转血矛线虫三期幼虫的杀虫率可达85.62~89.77%。本专利技术采用的菌种：鞭式节丛孢Arthrobotrys（Duddingtonia）fla本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，其特征在于：采用的组分,以重量份计，包括：

【技术特征摘要】
20200708 CN 20201065162451.一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，其特征在于：采用的组分,以重量份计，包括：D.flagrans厚垣孢子粉15～20份、亚甲基二萘二磺酸钠3～5份、皂角粉3～5份、十二烷基磺酸钠7～10份和硅藻土60～70份。


2.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，其特征在于：采用的组分,以重量份计，包括：D.flagrans厚垣孢子粉20份、亚甲基二萘二磺酸钠4份、皂角粉4份、十二烷基磺酸钠8份和硅藻土64份。


3.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，其特征在于：所述D.flagrans厚垣孢子粉：含有的厚垣孢子数为5×106~107个/g。


4.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括食线虫性真菌D.flagrans分离株SDH035厚垣孢子的制备：将捕食线虫性真菌鞭式节丛孢D.flagrans分离株SDH035在玉米-小麦联合谷培养基上进行批量培养，温度25～30℃，相对湿度80～100%，15～25d终止培养。


5.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子可湿性粉剂的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括D.flagrans厚垣孢子粉的制备：采用0.05%吐温-80将玉米...

【专利技术属性】
技术研发人员：王波波，张颖，杨明彩，蔡葵蒸，徐斌，王孝伟，周世良，王奕彤，杨明娟，
申请(专利权)人：西北民族大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62