一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1及其应用，属于农业生物技术领域，该分子标记AhyBA1的特异性引物对包括：核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物；本发明专利技术的分子标记可以快速、有效、经济的鉴定花生的分枝角度，通过该分子标记辅助选择结合回交育种的方法，可以实现花生株型的定向快速改良，在培育匍匐型的高产花生中具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1及其应用
本专利技术涉及农业生物
，特别是涉及一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1及其应用。
技术介绍
花生是我国重要的油料和经济作物，年种植面积7000万亩左右，产量约1700万吨。提高花生产量和实现机械化生产是花生育种和栽培的主要目标。花生是“地上开花、地下结果”作物，分枝角度直接影响果针入土、膨大及荚果产量，也与种植密度、栽培方式及机械化收获密切相关。因此，分枝角度对于提高花生产量和实现机械化均具有重要意义。根据分枝与主茎的夹角及分枝与主茎长度的比例，国内将花生分为直立型、匍匐型和半匍匐型三类(万书波，2003)。匍匐型花生的机械化程度高，平均亩产也要高于直立型(张新友，2018，中国油料作物学会年会报告)。匍匐型花生的果针距离地面更近，入土结荚率更高。另外，匍匐型花生具有用种量少等优点，而且在机械收获的过程中，匍匐型花生出土后可以直接翻过来在田间进行晾晒，由于分枝的支撑，可以避免荚果与地面接触，并有效减少霉菌等滋生，对于防治花生黄曲霉毒素污染非常重要。因此，匍匐型花生将是花生育种的重要方向。由于花生的分枝角度等决定花生株型的性状容易受到环境因素影响，在田间选择理想株型的花生新材料需要多年的重复性试验，育种效率非常低。另外，调控花生株型的位点与生育期等有很多不利性状连锁，在后代选择过程中，筛选到株型理想且综合性状优良的新材料费时费力。与田间的表型选择相比，分子标记辅助选择以基因型鉴定为主，可以提高后代选择的准确性、缩短育种周期。因此，明确花生株型形成的分子基础，鉴定与花生株型紧密连锁的分子标记，对于培养理想株型的花生新品种具有重要意义。目前关于花生株型的研究多集中在栽培管理方面，关于花生株型的遗传及分子机理的研究较少。Coffelt(1997)的研究认为花生的分枝角度是受两个基因控制的，并且认为匍匐型相对于直立型为显性的。为了更好的统计性状，Fonceka等(2012)将分枝与主茎的角度将花生的分枝习性分为了6个等级，进一步定位了6个与花生分枝习性相关的QTL位点，分别位于a03、a07、b04、b05、b06和b10连锁群。Galya等(2017)利用集群分离分析法将控制花生分枝角度的QTL位点定位在B05染色体约1.1Mb的区间内。这些研究进展，为精细定位花生分枝习性的QTL基因提供了重要的参考。Li等(2019)通过构建花生高密度遗传连锁图谱，将控制花生分枝角度的主效QTL位点也定位在B05染色体。最近，张晓军等(2019)鉴定了与花生株型相关的基因LBA5，并申请了该基因(专利申请号：CN201910994923.6)及相关的CAPS分子标记(专利申请号：CN201910988619.0)的专利。以上内容为揭示花生分枝角度形成的分子机制及通过生物技术改良花生的株型奠定了基础。特别是专利(专利申请号：CN201910988619.0)公开的CAPS分子标记将是花生株型分子改良的重要选择。CAPS标记是基于酶切的扩增多态性序列标记技术，在实际操作过程中，需要先通过PCR扩增，然后对扩增产物纯化，再对扩增产物进行酶切，然后再进行电泳，过程相对繁琐，而且内切酶的价格较高，会增加分子检测的成本。因此，开发方便、快速、准确的鉴定花生分枝角度的标记具有重要的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，该分子标记可用于花生分子育种及其品质改良，有利于快速得到新的种质资源。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：本专利技术提供一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1，所述分子标记AhyBA1的特异性引物对包括：核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的引物；核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的引物。SEQIDNo.1：5'-TAATACATAAAATAATGAGTAAATATAATAAAA-3'；SEQIDNo.2：5'-CCCTCATCCATTCTTACTGTCAT-3'。本专利技术还提供利用上述的与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1鉴定花生分枝角度的方法，包括以下步骤：(1)提取花生种子或者叶片DNA；(2)采用上述的特异性引物对对所提取的DNA进行PCR扩增；(3)经步骤(2)得到的扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若出现174bp大小的特征条带，则判定待测花生材料下代为匍匐型品种。进一步地，在步骤(2)中，所述PCR扩增总体积25uL：DNA模板20-30ng/uL1uL，特异性引物对0.5pmol/uL各0.5uL，10mMdNTPmix0.5uL，10×TaqBuffer2.5uL，25mMMgCl22.0uL，Taq酶5U/uL0.25uL，加水至25uL。进一步地，在步骤(2)中，所述PCR扩增反应条件：预变性95℃4min；94℃30s，58℃30s，72℃25s，35个循环；72℃延伸5min。进一步地，在步骤(3)中，采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。本专利技术还提供一种如上述的与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1的应用，所述分子标记AhyBA1位于15号染色体157.42-157.58Mb的区域内，所述分子标记AhyBA1用于花生育种和/或花生品质改良中。进一步地，用于准确筛选花生的株型。进一步地，用于辅助筛选和培养匍匐型花生新品种。本专利技术公开了以下技术效果：本专利技术提供了一种可以鉴定匍匐型品种花生的分子标记AhyBA1，花生的株型受主效基因的控制，但也容易受到环境的影响。因此，通过肉眼筛选和培育匍匐或者直立的花生品种存在很大的盲目性，而且需要在花生出苗后才能观察。利用本专利技术提供的标记，可以在播种之前，从种子上切取少量的子叶，然后通过对子叶DNA的检测，提前确定植株的株型，提高育种效率。而且，花生是异源四倍体，A和B亚基因组等位基因高度同源，很多标记难以区分A05和B05染色体，本专利技术的分子标记是通过多次科学的实验和摸索后筛选出来的，结果可靠，可信度高。本专利技术的分子标记是简单的PCR标记，技术要求简单。与CAPS分子标记相比，不需要经过酶切、纯化、回收等步骤，直接通过PCR扩增和电泳即可实现鉴定，对仪器操作要求也比较低，采用常规实验的常规仪器均可操作，具有快速、高效、低成本的特点。本专利技术的分子标记方便、快速、准确且低成本，可以有效的鉴定花生的分枝角度，一方面有助于基因的精细定位、分离与克隆，另一方面对于花生的分子育种和品质改良都具有重要的应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为花生分枝角度主效基因的精细定位；图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1，其特征在于，所述分子标记AhyBA1的特异性引物对包括：/n核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的引物；/n核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1，其特征在于，所述分子标记AhyBA1的特异性引物对包括：
核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的引物；
核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的引物。


2.利用权利要求1所述的与花生分枝角度紧密连锁的分子标记AhyBA1鉴定花生分枝角度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取花生种子或者叶片DNA；
(2)采用权利要求1中所述的特异性引物对对所提取的DNA进行PCR扩增；
(3)经步骤(2)得到的扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若出现174bp大小的特征条带，则判定待测花生材料下代为匍匐型品种。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述PCR扩增总体积25uL：DNA模板20-30ng/uL1uL，特异性引物对0.5pmol/uL各0.5uL，10mMdNTPmix0.5uL，10×TaqB...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兴军，赵传志，周希萌，赵术珍，李膨呈，田锐铮，侯蕾，厉广辉，夏晗，潘教文，
申请(专利权)人：山东省农业科学院，
类型：发明
国别省市：山东;37