一种小分子多肽及其在制备预防和治疗帕金森药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种小分子多肽及其在制备预防和治疗帕金森药物中的应用，涉及生物医药技术领域。所述小分子多肽由封端基团和短肽连接得到，所述短肽的序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术的小分子多肽克服了现有技术中缺少利用SIRT2相关的小分子多肽用于制备预防和治疗帕金森的药物的问题，本发明专利技术的小分子多肽MYR‑SIRT2

【技术实现步骤摘要】
一种小分子多肽及其在制备预防和治疗帕金森药物中的应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种小分子多肽及其在制备预防和治疗帕金森药物中的应用。
技术介绍
帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)是发病率仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)的发病率第二高的神经退行性疾病，多发生于50岁以上的中老年人，发病率随年龄增长而增高，严重影响中老年人的身体健康及生活质量。PD的主要病理特征是中脑多巴胺能神经元的丢失和路易小体的形成(Lewybody)，Lewy小体为含α-突触核蛋白(α-synuclein)和泛素(ubiquitin，Ub)的蛋白包涵体。一旦PD发病出现临床运动症状，50-60％的黑质多巴胺能神经元已经退行死亡，纹状体的多巴胺减少了70-80％，目前尚无有效的根治方案，其发病机制非常复杂，受到年龄、遗传、环境、线粒体功能失调、氧化应激、蛋白错误折叠、泛素蛋白酶体降解途径受损等各种因素的影响。SIRT2是Sirtuin家族的主要成员，在神经系统中特异性的高表达。2007年，Outeiro等在Science上报道，AGK2(SIRT2抑制剂)可以通过增大包涵体的体积解除PD模型中α-突触核蛋白介导的细胞毒性。PD的特征是形成错误折叠的具有细胞毒性的α-突触核蛋白，包括蛋白聚合体和包涵体(Lewy小体)。众多国内外学者和我们实验室的研究发现敲除或者抑制SIRT2，可以减轻帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)发病时的多巴胺能神经元的丢失和运动功能障碍，对PD具有保护作用，但是其具体机制尚不明确。目前尚未见到相关研究利用SIRT2相关的小分子多肽用于制备预防和治疗帕金森的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种小分子多肽及其在制备预防和治疗帕金森药物中的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种小分子多肽，由封端基团和短肽连接得到，所述短肽的序列如SEQIDNO.1所示。优选的，所述封端基团为肉豆蔻酸。本专利技术还提供了所述小分子多肽在制备预防和治疗帕金森药物中的应用。本专利技术的技术效果和优点：本专利技术提供了一种小分子多肽，由封端基团和短肽连接得到，所述短肽的序列如SEQIDNO.1所示，所述封端基团为肉豆蔻酸。本申请的小分子多肽可以有效的的阻止200μMMPP+所致的神经元死亡，还可以减少MPTP造模所致的多巴胺能神经元的丢失、改善小鼠的运动能力，从而减轻PD时多巴胺能神经元的死亡和运动障碍，为治疗PD提供了一种新思路。附图说明图1为MTT实验结果。图2为本申请多肽对MPTP造模所致的黑质多巴胺能神经元死亡和运动障碍影响的实验流程。图3为免疫荧光黑质TH神经元计数结果。图4为旷场实验结果。图5为转棒实验结果。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1设计多肽：包含SIRT2蛋白Ser331位点和Ser335位点，序列为TSASPKKSPPPA十二个氨基酸的多肽(SIRT2328-339)，并在短肽的N-末端结合肉豆蔻酸(Myristicacid，MYR)。对照多肽为SIRT2328-339肽的乱序肽(Scramble)，序列为KTAPSAPKPPSS，短肽的N-末端同样结合肉豆蔻酸(Myristicacid，MYR)。委托康卫生物技术有限公司合成，肽的纯度达到95％以上。实施例2选取怀孕16-18天的SD大鼠，无菌条件下取E16-18大鼠胚胎置于预冷的D-hanks液中，首先用眼科剪沿小鼠颈部下缘断头，然后用眼科镊、眼科剪剥离小鼠头皮进而暴露出颅骨，沿颅骨矢状缝脊髓部用尖镊剥离颅骨，暴露脑皮层并用尖镊一分为二，解剖显微镜下分离出大脑皮层部分，剥离脑膜、血管、海马及中脑部分，放置于另一清洁盛有预冷D-Hanks溶液的玻璃皿，然后将皮层加入0.125％胰酶在37℃孵箱内消化，2min后观察消化情况，并进一步确定消化时间。随后用枪头吸出组织转移到装有血清的离心管内终止消化胰酶。用5ml的移液器吹打20下后，静置2min后取上清过200目晒网，收集过滤后细胞悬液到另一支离心管内。将细胞悬液于1000r/min离心5min，吸出上层培养基，管内细胞沉淀中加入新鲜培养液(DMEM+10％FBS)并反复吹打成细胞悬液。显微镜下细胞计数，按3×106/孔细胞密度接种到6孔板内，若需培养细胞爬片，则将细胞按3×105/孔种植于24孔板中(底部铺有盖玻片)，放入5％CO2培养箱中。培养6h后换液(Neurobasal+2％B27+0.5mMglutamine+25mMglutamate+1％penicillin-streptomycin培养基)并加入Ara-C使其终浓度为1×105mM/L。Ara-C作用24h后全量换液，以后3天半量换液一次。神经元培养7天后，用MTT法检测0.1μM、1μM、10μMMYR-SIRT2328-339肽对原代神经元细胞存活率的影响，随后再用0.1μM、1μM、10μMMyr-SIRT2328-339肽预先处理原代神经元0.5h后，再用200μMMPP+处理原代神经元48h，检测MYR-SIRT2328-339对MPP+所致神经元存活率下降的影响。MTT实验显示0.1μM、1μM、10μM的MYR-SIRT2328-339多肽对神经元存活率没有影响，但可以有效的的阻止200μMMPP+所致的神经元死亡，结果如图1所示。实施例3取25g左右的健康成年C57BL/6雄性小鼠60只，随机分成四组，一组小鼠注射生理盐水，另外三组小鼠每天一次腹腔注射30mg/ml的1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridinehydrochloride(MPTP)造模，连续注射5天，在造模同时给一组MPTP组注射MYR-Scramble肽，一组MPTP组注射MYR-SIRT2328-339肽，连续10天，每天一次，2mg/kg。造模结束后1天，处死小鼠取整脑固定脱水后切黑质脑片，免疫荧光检测小鼠黑质多巴胺神经元的数目。实验流程如图2所示，实验结果显示腹腔注射MYR-SIRT2328-339肽可以减少MPTP造模所致的多巴胺能神经元的丢失，如图3所示。实施例4旷场实验利用实施例3中造模结束后1天的小鼠，在处死之前进行旷场实验：旷场四壁贴上不同形状及颜色纸板标记；正式实验开始前三天将待测小鼠放入实验室适应环境，每天半小时至一小时；实验开始前半小时将所有小鼠放入实验室适应环境；打开“动物行为学”系统，点击“实验”的下拉菜单中的“新建”选择实验类型“自发活动”动物“小鼠”并命名选中新建的实验；点击“添加动物”可以用耳标号命名并设置不同组；选中新建的实验点击“系统设置”，选择视频存储路径，右键下拉菜单点击“添加实验箱”并命名活动区域；向旷场四壁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小分子多肽，其特征在于，由封端基团和短肽连接得到，所述短肽的序列如SEQID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种小分子多肽，其特征在于，由封端基团和短肽连接得到，所述短肽的序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫建国，周亚莉，谭洁，邵晓云，方方，苏燕，徐兴凤，李茂，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：广西;45