一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法，包括以下步骤：(S1)重组质粒的构建：在NCBI数据库中得到来源于Streptococcus equ inus淀粉酶基因，并且连接在组成型载体pMG36e中，酶切位点为Nde I和BspH I；(S2)氯化钙法嗜热链球菌的感受态细胞制备；(S3)重组质粒的转化；(S4)阳性克隆子的培养：在MRS固体培养基中长出的单菌落挑取培养在含有红霉素的MRS液体培养基中，37℃，200rpm环境中震荡培养9‑16h，作为后续的种子液；(S5)高温灭菌和(S6)接种。利用基因工程技术嗜热链球菌体内导入淀粉酶基因，可以达到嗜热链球菌在厌氧培养下的高密度培养方法，以达到高密度菌种在食品领域的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法
本专利技术涉及食品加工
，特别涉及一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法。
技术介绍
嗜热链球菌来源于乳制品，是革兰氏阳性菌。目前，乳酸菌占益生菌的绝大部分，可以有效地将各种糖类分解为乳酸，在氧气低或无氧环境下生长良好，是专性厌氧菌或兼性厌氧菌，而嗜热链球菌作为乳酸菌的一员，在酸奶发酵中有着广泛的应用。嗜热链球菌作为最常见的发酵剂，在发酵剂作用下牛奶中的乳糖被转化成乳酸，乳中酪蛋白在酸性环境下形成三维凝胶网状结构，对酸奶的凝胶特性产生影响，进而影响酸奶的品质。氧气是影响酸奶品质的重要因素之一，厌氧条件更有利于乳酸菌的生长繁殖和积累代谢产物。但申请人在实现现有技术中的技术方案的过程中，发现现有技术的技术方案中存在如下技术问题：目前工业化的嗜热链球菌培养工艺基本都是兼性厌氧，存在着菌体密度不高，导致代谢产物积累偏少，影响其应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法，解决了现有技术中菌体密度低且代谢产物积累少的技术问题，达到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(S1)重组质粒的构建：在NCBI数据库中得到来源于Streptococcus equinus淀粉酶基因，并且连接在组成型载体pMG36e中，酶切位点为Nde I和BspH I；/n(S2)氯化钙法嗜热链球菌的感受态细胞制备：在37℃环境下在MRS培养基中培养至OD

【技术特征摘要】
1.一种提高嗜热链球菌高密度的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
(S1)重组质粒的构建：在NCBI数据库中得到来源于Streptococcusequinus淀粉酶基因，并且连接在组成型载体pMG36e中，酶切位点为NdeI和BspHI；
(S2)氯化钙法嗜热链球菌的感受态细胞制备：在37℃环境下在MRS培养基中培养至OD600＝0.6-0.8的嗜热链球菌菌液；在7000-10000rpm下离心2-3min，弃上清；用2mL预冷的MRS培养基清洗细胞，离心弃上清；再用200μL预冷的MRS培养基重悬细胞；
(S3)重组质粒的转化：在上述菌液中加入80μL预冷的0.3M氯化钙溶液，混合均匀，从中取100μL的混合菌液，加入10μL的重组质粒，用移液枪进行混匀后在冰上静置30min，然后42℃热激90s；再在冰上静置1.5-2min，静置结束后，加入800-900μL没有红霉素的MRS液体培养基；将菌体在37℃环境下培养60-90min；培养结束后，在7000-10000rpm下离心2-3min，弃去800-900μL的MRS培养基，重悬剩下的细胞，涂布在含有红霉素的MRS固体培养基中，37℃环境中培养9-16h；
(S4)阳性克隆子的培养：在MRS固体培养基中长出的单菌落挑取培养在含有红霉素的MRS液体培养基中，37℃，200rpm环境中震荡培养9-16h，作为后续的种子液；
(S5)高温灭菌：在MRS培养基中加入1.3-1.5g/L的半胱氨酸和0.0001-0.00012％的刃天青溶液，再加入20-30％的可溶性淀粉溶液，在高温灭菌之前...

【专利技术属性】
技术研发人员：方曙光，汪欣，郭晓娟，朱建国，
申请(专利权)人：漯河微康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41