一种高效链霉亲和素磁珠及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高效链霉亲和素磁珠及其制备方法。所述制备方法包括以下步骤：步骤一、羧基磁珠的活化；步骤二、羧基磁珠与链霉亲和素的共价偶联；步骤三、物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测；步骤四，链霉亲和素磁珠的淬灭及保存。本发明专利技术方法制得的链霉亲和素磁珠稳定性好，活性强，偶联效率高，与传统方法相比，偶联效率由58.2%提高到92.7%。

【技术实现步骤摘要】
一种高效链霉亲和素磁珠及其制备方法
本专利技术涉及一种高效链霉亲和素磁珠及其制备方法。
技术介绍
链霉亲和素磁珠因与生物素标记配体，如生物素标记核酸、抗体或细胞表面蛋白等有高效地结合力，被广泛应用于生物研发及应用领域，然而链霉亲和素在与磁珠偶联时时常发生附着式地物理连接，不能稳定地与磁珠结合，特别是在后期应用时，经对磁珠地反复冲洗，时常发生链霉亲和素从磁珠上剥离的现象。同时，链霉亲和素由于是一种活性物质，偶联磁珠时极易发生失活现象，导致后期链霉亲和素磁珠的低结合效率。因此，一种高效稳定地将链霉亲和素偶联到磁珠的方法亟待研发。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，该方法制得的链霉亲和素磁珠稳定性好，偶联效率高，偶联效率高达92.7%。为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，包括以下步骤：步骤一，羧基磁珠的活化；步骤二，羧基磁珠与链霉亲和素的共价偶联；步骤三，物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测；步骤四，链霉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤一，羧基磁珠的活化；/n步骤二，羧基磁珠与链霉亲和素的共价偶联；/n步骤三，物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测；/n步骤四，链霉亲和素磁珠的淬灭及保存。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一，羧基磁珠的活化；
步骤二，羧基磁珠与链霉亲和素的共价偶联；
步骤三，物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测；
步骤四，链霉亲和素磁珠的淬灭及保存。


2.如权利要求1所述的一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤一中羧基磁珠活化的方法如下：（1）取羧基磁珠原液于EP管中，置于磁力架上磁珠分选两分钟，去除保存液；（2）加入0.01M磷酸盐缓冲液清洗磁珠两次，磁珠分选去上清；（3）加入现配现用的5mg/mLNHS和5mg/mLBOP溶液37℃旋转孵育2小时，活化磁珠表面的羧基；（4）活化后磁珠分选2min，并加入0.01M磷酸盐缓冲液清洗磁珠3次，去除活化剂。


3.如权利要求1所述的一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤二中羧基磁珠与链霉亲和素共价偶联的方法如下：（1）将步骤一活化后的羧基磁珠放于偶联缓冲液中,加入链霉亲和素，室温旋转孵育至少3小时，磁珠分选去上清；（2）加入0.01M磷酸盐缓冲液清洗磁珠三次，加入500uL0.01M磷酸盐缓冲液重悬磁珠。


4.如权利要求1所述的一种高效链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤三中物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测的方法如下：（1）将步骤二中得到的偶联过链霉亲和素的磁珠放入微量透析装置,所述透析装置截留分子量...

【专利技术属性】
技术研发人员：周勇，宋阳阳，
申请(专利权)人：重庆威斯腾前沿生物研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50