一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，涉及蛋白质活性研究领域，包括钛粉负载、储存液保存和固液分离提取使用纤连蛋白等步骤，本发明专利技术将纯钛粉表面活化后可以有效负载纤连蛋白，并保持其生物活性，储存液中高浓度的蛋白酶抑制剂及蛋白保护剂可有效防止蛋白降解，较好的维持存储过程中纤连蛋白的生物学活性。使用时，可通过固液分离的方法提取纤连蛋白而去除有害蛋白保护成分如毒性剂量的PMSF或EDTA或其他干扰实验的保护成分，简单高效的完成纤连蛋白提取使用，并不影响其在细胞实验中的活性应用及研究。

【技术实现步骤摘要】
一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法
本专利技术涉及蛋白质活性研究领域，特别涉及一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法。
技术介绍
纤维连接蛋白(Fn)是一类细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)蛋白，在细胞与细胞、细胞与基膜间起到桥联作用，维持细胞的正常形态和功能，它可以与肝素、肌动蛋白、纤维蛋白、胶原蛋白、DNA和细胞结合。其重要作用是促进细胞的黏连和粘附，可提高细胞的贴壁率、汇合率，缩短细胞汇合时间，使细胞形态结构良好，代谢率增强及蛋白质合成速度显著提高。对于经常需要使用的纤连蛋白，一般将纤连蛋白放在-20度保存，为了避免纤连蛋白反复冻融，一般的做法是在纤连蛋白中加入一定量的甘油，但仅仅加入甘油，可以避免纤连蛋白反复冻融，但不能有效的防止纤连蛋白的降解。且由于保护剂的成分比较多，加入的量不同对纤连蛋白的影响也不一样，所以需要一种方法来保护纤连蛋白稳定性和生物学活性。常用的蛋白保护剂有甘油、甘露醇、聚乙二醇、甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、牛血清白蛋白等。在实际操作中很难用单一保护剂实现对纤连蛋白的有效保本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)将纤连蛋白固定于活化后的纯钛粉表面；/n(2)将固定有纤连蛋白的固体粉末加入储存液中充分混匀后-20℃保存，所述储存液中包含蛋白酶抑制剂和蛋白保护剂；/n(3)使用前离心去除储存液，PBS或TBS清洗沉淀后重悬至工作浓度即得纤连蛋白工作液。/n

【技术特征摘要】
1.一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将纤连蛋白固定于活化后的纯钛粉表面；
(2)将固定有纤连蛋白的固体粉末加入储存液中充分混匀后-20℃保存，所述储存液中包含蛋白酶抑制剂和蛋白保护剂；
(3)使用前离心去除储存液，PBS或TBS清洗沉淀后重悬至工作浓度即得纤连蛋白工作液。


2.根据权利要求1中所述的一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，其特征在于：所述纤连蛋白固定于钛粉表面的方法如下：
(a)纯钛粉依次用丙酮，无水乙醇和蒸馏水超声清洗两次，每次5min，干燥备用；
(b)另配制0.5M的NaOH溶液，将上述已经干燥的纯钛粉浸没在该溶液中70℃下反应24h后，充分用蒸馏水进行清洗后干燥，得到活化钛粉；
(c)配制2％氨丙基三乙氧基硅烷APTE溶液，溶剂为无水乙醇，将活化钛粉放入APTE溶液中37℃下震荡反应10h；再经无水乙醇清洗后在120℃下固化反应6h以增强APTE与活化钛粉表面的结合，得到硅烷化钛粉A；
(d)用EDC/NHS/PBS体系配制浓度为150μg/mL的纤连蛋白溶液，纤连蛋白溶液pH7.0；
(e)将硅烷化钛粉A重悬浸泡在纤连蛋白溶液中反应15min，0.01M的PBS洗掉未结合的纤连蛋白分子，离...

【专利技术属性】
技术研发人员：王梦，刘洁，刘家炉，徐文俊，单雪芹，凡玉芳，王亚男，李诚茹，吴蕾，金巢，
申请(专利权)人：安徽九川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34