一种dcas9介导检测HPV16型E6基因的免疫层析方法技术

本发明专利技术公开了检测HPV16型E6基因的免疫层析方法，包括：步骤1，针对靶标基因设计特异性引物及sgRNA序列；步骤2，取待测样本RNA，并加入5'端标有生物素的引物，进行RT‑RPA核酸扩增，得到扩增产物；步骤3，在扩增产物里加入dcas9蛋白及sgRNA进行反应，形成dcas9/sgRNA/HPV16 E6‑biotin复合物；步骤4，将反应产物加入免疫层析试纸条，即可判读结果。本发明专利技术通过信号放大后，由sgRNA/dcas9复合物再次识别靶标基因，特异性高，稳定性强，灵敏度高；且当靶标基因改变时，只需要更换引物及sgRNA序列，免疫层析试纸条则可以通用，可扩展性强。

【技术实现步骤摘要】
一种dcas9介导检测HPV16型E6基因的免疫层析方法
本专利技术属于生物检测
，涉及一种检测HPV16型E6基因的免疫层析方法。
技术介绍
核酸检测属于分子诊断，应用分子生物学方法检测受检个体或其携带的病毒、病原体的遗传物质的结构或表达调控的变化水平，为疾病的防治、预测、诊断、治疗和预后判断提供信息和决策依据的技术。由于分子诊断技术可针对产生疾病的相关基因进行准确诊断，特异性强，灵敏度高，可应用于传染性疾病、血液筛查、遗传性疾病、肿瘤分子诊断等领域，还能在部分应用领域替代其他体外诊断技术，成为体外诊断技术中重要的发展和研究方向。核酸检测通常结合扩增技术，将微量的特异性核酸序列放大到能够被仪器检测到的水平。传统的核酸检测有聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，PCR)和逆转录-聚合酶链反应(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，PCR)，前者扩增DNA，后者则扩增RNA，是目前临床应用最广泛的分子诊断技术。PCR技术核酸扩增分三个基本反应步骤，分别是变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测HPV16型E6基因的免疫层析方法，其特征在于：包括以下几个步骤：/n步骤（1），针对HPV16型E6基因设计特异性引物及sgRNA序列；所述特异性引物的5'端标记生物素，所述sgRNA的识别序列位于扩增产物内部；/n步骤（2），利用RPA等温核酸扩增技术，取待测样本RNA，并加入步骤（1）中5'端标有生物素的特异性引物，进行RT-RPA核酸扩增，得到扩增产物；/n步骤（3），结合CRISPR/Cas9系统，在扩增产物里加入dcas9蛋白及步骤（1）中的sgRNA序列进行反应，形成dcas9/sgRNA/HPV16 E6-biotin蛋白核酸复合物；/n步骤（4），将步骤（3）中的...

【技术特征摘要】
1.一种检测HPV16型E6基因的免疫层析方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
步骤（1），针对HPV16型E6基因设计特异性引物及sgRNA序列；所述特异性引物的5'端标记生物素，所述sgRNA的识别序列位于扩增产物内部；
步骤（2），利用RPA等温核酸扩增技术，取待测样本RNA，并加入步骤（1）中5'端标有生物素的特异性引物，进行RT-RPA核酸扩增，得到扩增产物；
步骤（3），结合CRISPR/Cas9系统，在扩增产物里加入dcas9蛋白及步骤（1）中的sgRNA序列进行反应，形成dcas9/sgRNA/HPV16E6-biotin蛋白核酸复合物；
步骤（4），将步骤（3）中的反应产物加入免疫层析试纸条，即可判读结果：若试纸条T线和C线均有红色条带，表明是阳性样品；若试纸条C线有带，T线无带，表明是阴性样品；若试纸条C线无带，则检测无效，需要重复检测。


2.如权利要求1所述的一种检测HPV16型E6基因的免疫层析方法，其特征在于：所述特异性引物F序列为：5’-CCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGC-3’；所述特异性引物R序列为：5’-CGAAAAGCAAAGTCATATACCTCACGTCGC-3’。


3.如权利要求1所述的一种检测HPV16型E6基因的免疫层析方法，其特征在于：所述sgRNA序列为：
GCAACAGUUACUGCGACGUG...

【专利技术属性】
技术研发人员：周勇，唐银，
申请(专利权)人：重庆威斯腾前沿生物研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50