对PD-1具有提高的结合亲和力的PD-L1变体制造技术

本发明专利技术涉及对PD‑1具有提高的结合亲和力的PD‑L1变体。本发明专利技术还涉及用于制备PD‑L1变体的方法和用于筛选PD‑L1变体的方法。本发明专利技术的PD‑L1变体通过用不同的氨基酸序列取代野生型PD‑L1的一部分氨基酸序列来实现最优化，从而极大地提高对PD‑1的结合亲和力，并通过使突变位点减到最少来大大降低免疫原性产生的可能性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对PD-1具有提高的结合亲和力的PD-L1变体
本专利技术涉及对PD-1具有增强的结合亲和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之间的结合的PD-L1变体，以及制备所述变体的方法。
技术介绍
治疗癌症的药物大致分为小分子药物和大分子药物。大分子药物由于其高特异性而作为治疗剂受到关注，而小分子药物由于其缺乏特异性而具有相对大的副作用。最近在学术文献中的报告表明，阻断免疫检查点抑制蛋白，特别是PD-1和PD-L1之间的结合在癌症治疗中是有效的，并且PD-1和PD-L1比其他免疫检查点抑制蛋白引起的副作用更少(J.Naidoo等人(2015),AnnalsofOncology,LuciaGelao等人(2014)Toxins,GorgeK.Philips等人(2015),InternationalImmunology)。主要的医药公司，包括Bristol-MyersSquibb，已经努力通过PD-1/PD-L1免疫检查点抑制来开发治疗药物，并且正在开发用于抗癌治疗的药物，例如抗体形式的YERVOY(伊匹单抗)和OPDIVO(纳武单抗)。因为PD-1和PD-L1不仅在癌细胞中表达，而且还在人免疫细胞中表达，抗体药物可以杀死健康免疫细胞，从而引起自身免疫疾病。而且，作为大分子蛋白的抗体由于其体积大(150kDa)，所以很难穿透细胞。因此，需要具有突出的细胞穿透能力的治疗剂以抑制肿瘤和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)之间的PD-1/PD-L1结合。通过之前研究中的筛选，发现了PD-L1变体。然而，这些变体具有相对低的结合亲和力并且含有许多突变，从而当在治疗药物中使用时引发了免疫原性。因此，需要开发以高亲和力结合PD-1的PD-L1变体。提供
技术介绍
的描述仅仅是为了更好地理解本专利技术的背景，而不应被认为对应于本领域技术人员已知的现有技术。专利技术详述本专利技术要解决的问题本专利技术的专利技术人认真而深入地进行了研究，以发现对PD-1具有高结合亲和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之间结合，同时使免疫原性的可能性最小化的PD-L1变体。结果，本专利技术发现了用其他最佳氨基酸取代野生型PD-L1序列中的一些氨基酸极大地改善了所得PD-L1变体对PD-1的亲和力，并且尽可能少的突变位点降低了免疫原性的可能性。基于该发现已经完成了本专利技术。因此，本专利技术的一个目标是提供对PD-1具有增强的结合亲和力的PD-L1变体。本专利技术的另一个目标是提供编码PD-L1变体的核酸分子。本专利技术的另一个目标是提供包含核酸分子的载体。本专利技术的另一个目标是提供包含载体的宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供包含变体、核酸分子或载体的组合物。本专利技术的另一个目的是提供用于制备所述变体的方法。本专利技术的又一个目的是提供用于筛选变体的方法。根据本文的详细描述、权利要求书和附图，本专利技术的其他目标和优点将变得更加明显。解决问题的方法本专利技术的一个方面提供了对PD-1具有增强的结合亲和力的PD-L1变体。本专利技术的专利技术人认真而深入地进行了研究，以发现对PD-1具有高结合亲和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之间结合，同时使免疫原性的可能性最小化的PD-L1变体。结果，本专利技术发现了野生型PD-L1序列中的一些氨基酸被其他最佳氨基酸取代极大改善了所得PD-L1变体对PD-1的亲和力，并且尽可能少的突变位点降低了免疫原性的可能性。如本文所使用的，术语“PD-L1(或程序性死亡配体1)变体”是指包含与野生型PD-L1序列相比，其中一个或多于一个氨基酸被取代、缺失或添加的经突变的变体。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体旨在包含具有与SEQIDNO:123中所示的野生型PD-L1序列相比，一些氨基酸被取代、缺失或添加的序列的变体。本专利技术的PD-L1变体与SEQIDNO:123中所示的野生型PD-L1的氨基酸序列具有至少50％，更优选至少60％，甚至更优选至少70％，更优选至少80％和最优选至少90％的同源性。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中的一些氨基酸和所述野生型PD-L1序列中第169位的E169D的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体还包含位于以下位置的一个或多于一个氨基酸取代，所述位置选自SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中的第41、73、117、124、130、139、195、198、201、213和218位。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第195位的R195K、R195A、R195I、R195T、R195V、R195F、R195L、R195R或R195M的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第198位的P198S、P198T或P198H的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第41、117、124和195位的分别为M41V、N117S、L124S或R195A的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第195位的R195K的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第73和195位的分别为Q73R和R195I的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第130和195位的分别为T130A和R195I的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第117和198位的分别为N117S和P198H的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第195和213位的分别为R195I和L213P的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第139、198和201位的分别为A139S、P198T和N201S的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含SEQIDNO:123所示的野生型PD-L1序列中第218位的N218D的氨基酸取代。根据本专利技术优选的实施方案，PD-L1变体包含选自SEQIDNO:90、94、95、97、100、102、103、104、107、和108至122所示的序列的序列。本专利技术的另一方面提供了编码PD-L1变体的核酸分子、包含所述核酸分子的载体或包含所述载体的宿主细胞。本专利技术的核酸分子可以是分离的或重组的核酸分子。这样的核酸分子的实例包括单链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)具有增强的亲和力的程序性死亡配体1(PD-L1)变体，其中PD-L1变体包含SEQ ID NO：123所示的野生型PD-L1序列中的一些氨基酸和所述野生型PD-L1序列中第169位的E169D的氨基酸取代。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180629 KR 10-2018-00753491.一种对程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)具有增强的亲和力的程序性死亡配体1(PD-L1)变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中的一些氨基酸和所述野生型PD-L1序列中第169位的E169D的氨基酸取代。


2.根据权利要求1所述的PD-L1变体，其还包含位于以下位置的一个或多于一个氨基酸取代，所述位置选自SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中的第41、73、117、124、130、139、195、198、201、213和218位。


3.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第195位的R195K、R195A、R195I、R195T、R195V、R195F、R195L、R195R或R195M的氨基酸取代。


4.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第198位的P198S、P198T或P198H的氨基酸取代。


5.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第41、117、124和195位的分别为M41V、N117S、L124S和R195A的氨基酸取代。


6.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第195位的R195K的氨基酸取代。


7.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第73和195位的分别为Q73R和R195I的氨基酸取代。


8.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第130和195位的分别为T130A和R195I的氨基酸取代。


9.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第117和198位的分别为N117S和P198H的氨基酸取代。


10.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第195和213位的分别为R195I和L213P的氨基酸取代。


11.根据权利要求2所述的PD-L1变体，其中PD-L1变体包含SEQIDNO：123所示的野生型PD-L1序列中第139、198和201位的分别为...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑相泽，河志妍，
申请(专利权)人：国民大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR